鄭亞琴，邱艷麗，汪 偶，臧 鑫，李 倩

（哈爾濱醫(yī)科大學藥物分析教研室，黑龍江哈爾濱150000）

氣相色譜法測定自釀葡萄酒中甲醇的含量

鄭亞琴，邱艷麗，汪 偶，臧 鑫，李 倩*

（哈爾濱醫(yī)科大學藥物分析教研室，黑龍江哈爾濱150000）

目的：針對人們所擔憂的葡萄酒中甲醇含量超標的問題，本實驗建立一種測定自釀葡萄酒中的甲醇含量的方法。方法：采用氣相色譜法對葡萄酒中的雜質甲醇進行定量檢測。色譜條件：固定相為GsBP-InoWAX毛細管柱，柱溫為90℃，載氣為氮氣，流速為1.4 mL/min；以氫焰離子化檢測器（FID）為檢測器，溫度為200℃；進樣口溫度為150℃。結果：該方法在16～1000 μg/mL的濃度范圍內線性關系良好（R2=0.9987），精密度為1.2%，回收率為90.03%～94.00%。結論：該方法快速準確，分析成本低，能夠滿足快速分析自釀葡萄酒中甲醇的要求。

氣相色譜，甲醇，自釀葡萄酒

葡萄酒具有美容養(yǎng)顏、延年益壽、預防疾病的功能[1]，而自釀葡萄酒不僅保留葡萄酒的風味還經濟實惠，所以自釀葡萄酒在老百姓的生活中普遍存在。有傳言稱自釀葡萄酒中甲醇含量易超標，經常飲用會對身體產生有害作用。甲醇為無色有酒精氣味易揮發(fā)的液體，易溶于水、醇類、乙醚等。以各類糧食釀造的酒，其中甲醇含量較低；而薯干、谷糠、野生植物等為原料時，酒中的甲醇含量則較高[2]，甚至有報道自釀葡萄酒甲醇易超標中毒。甲醇在體內代謝成甲醛和甲酸，對視神經毒性最大，飲用含有過量甲醇的酒可致失明、肝病、甚至死亡[3]。因此檢測自釀葡萄酒中甲醇的含量，對保證人體健康具有重要意義。為此，本文擬建立一種分析測定方法，旨在測定自釀葡萄酒中甲醇含量。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

正丙醇 分析純、天津市光復精細化工研究所；無水乙醇 分析純、天津市永大化學試劑有限公司；甲醇 分析純、天津市光復精細化工研究所；市售酒樣 購自哈爾濱家得樂連鎖超市；葡萄 品種為夏黑、購自哈爾濱家得樂連鎖超市；酵母 安琪牌；水去離子水。

Thermo Trace 1300氣相色譜儀（GC） Thermo Trace；Agilent 6820氣相色譜儀（GC） 美國安捷倫；電子天平 分度值0.1 mg，Mettler-Toledo。

1.2 實驗方法

1.2.1 紅葡萄酒的釀造 葡萄經清洗破碎添加酵母，敞口浸漬發(fā)酵9 d，分離皮渣，將皮渣壓榨，將壓榨汁勾兌入分離時的自流汁中，密封二次發(fā)酵（20 d），然后靜置澄清（4 d），分離上清液，澄清葡萄酒放入橡木桶，桶中陳釀（30 d）最后制成紅酒[4]。

1.2.2 色譜條件 柱溫為90℃；以氮氣為載氣，柱流速為1.4 mL/min，進樣口溫度為150℃；火焰離子化檢測器（FID）檢測，溫度為200℃，GsBP-InoWAX毛細管柱；分流比為20∶1；進樣量為0.2 μL。

1.2.3 溶液的制備

1.2.3.1 內標溶液的配制 精密稱取0.9991 g正丙醇于100 mL容量瓶中，用去離子水溶解并稀釋至刻度，作為內標溶液。

1.2.3.2 標準溶液的配制 精密稱取1.0018 g甲醇于50 mL容量瓶中，用去離子水溶解并稀釋到刻度，作為甲醇標準溶液。

分別量取20.00 mg/mL甲醇溶液0、1、2、3、4、5 mL，量取6份5.0 mL的10.00 mg/mL正丙醇溶液（內標物）分別加到甲醇溶液中，用去離子水稀釋，制成內標濃度為0.50 mg/mL，甲醇濃度為0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00 mg/mL的待測系列標準溶液。

精密稱取0.9988 g乙醇于50 mL容量瓶中，用去離子水溶解并稀釋到刻度，作為乙醇標準溶液。

1.2.3.3 供試品溶液的配制 分別量取自釀葡萄酒1.00 mL，正丙醇溶液0.5 mL于10 mL容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度得到自釀樣品溶液。分別量取市售葡萄酒5.0 mL，正丙醇溶液0.5 mL于10 mL容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，得到市售樣品溶液。

1.3 數據處理

本實驗數據處理方法為SPSS 13.0軟件的T檢驗。

2 結果與分析

2.1 線性范圍考察

按照“1.2.2”設定的參考條件，將待測標準系列溶液分別進樣0.2 μL，直接測定，以峰面積比值（x）對甲醇濃度（y）做標準曲線。如圖1所示，甲醇濃度在16～1000 μg/mL的濃度范圍內線性方程為y=0.8651x＋0.0135，R2為0.9987，表明該方法的線性良好。

圖1 甲醇標準曲線Fig.1 Standard curve of methanol

2.2 專屬性

將甲醇、正丙醇和乙醇標準溶液混合振搖均勻后，按1.2.2方法進樣0.2 μL，直接測定，記錄色譜圖，結果見圖2。甲醇的保留時間為2.223 min；乙醇為2.282 min；正丙醇為2.558 min，基線平穩(wěn)，三者分離良好。

圖2 專屬性考察色譜分析圖Fig.2 The chromatogram of specificity

2.3 精密度

結果見表1。將甲醇濃度為0.2 mg/mL的標準溶液連續(xù)進樣5次，得到甲醇含量的相對標準偏差（RSD）為1.2%。

表1 精密度實驗Table 1 Precision test

2.4 回收率

在已知濃度的樣品溶液中加入已知量的甲醇標準品，測定其加標回收率。根據線性曲線，選擇0.50 mg/mL為中心濃度，按其80%、100%、120%的比例分別配制9份溶液（每種濃度各3份），分別與樣品溶液等體積混合，按照氣相條件進樣0.2 μL，記錄色譜圖，計算回收率，結果見表2。根據表2結果可知回收率在90.03%～94.00%范圍內，表明準確度良好，符合雜質定量檢測的要求。

表2 回收率實驗Table 2 Recovery test

2.5 檢測限

當信噪比（S/N）為3時，測得甲醇含量為0.004 mg/mL，故檢測限為0.004 mg/mL。

2.6 定量限

當信噪比（S/N）為10時，測得甲醇含量為0.016 mg/mL，故定量限為0.016 mg/mL。

2.7 樣品測定

將配制好的樣品按“1.2.1”設定的參考條件分別進樣0.2 μL，得到樣品色譜圖，見圖3；自釀樣品溶液和市售樣品溶液分別連續(xù)進樣5針，根據標準曲線計算樣品中甲醇的含量，最后取平均值，見表3。由結果可知，市售葡萄酒樣品中甲醇含量符合國家標準（＜0.4 mg/mL[5]），而自釀葡萄酒中甲醇含量普遍高于市售葡萄酒，個別甲醇含量嚴重超出國家標準范圍。

圖3 葡萄酒樣品色譜圖Fig.3 The chromatogram of wine

表3 葡萄酒中甲醇含量測定結果Table 3 Methanol in wine

3 結論與討論

本文以正丙醇為內標，采用GC/FID法測定自釀葡萄酒中甲醇的含量。外標法是現在測定酒中甲醇、雜醇油的標準方法[6]，與外標法相比，內標法具有重現性好，準確度高，可在一定程度上消除操作條件等的變化所引起的誤差[7-10]。正丙醇作為內標物，其結構與甲醇相似，化學性質穩(wěn)定，不與甲醇發(fā)生反應，與甲醇的分離度大于1.5，是理想的內標物質。有文獻報道采用頂空進樣效果較好[11-12]，但其設備要求苛刻，價格昂貴，影響因素較多；另有文獻報道可采用填充柱GC法，因酒中成分復雜，高沸點的成分流不出柱子易污染氣化室和色譜柱[13]，所以不適合酒樣的檢測。本方法采用直接進樣，成本低，操作簡便，用內標法進行定量，準確度高，重復性好，適合于酒樣的測定。同時可以滿足快速、準確地分析葡萄酒中甲醇含量的需求。

在本次測定的過程中，發(fā)現不同的制備過程中葡萄酒的甲醇含量也不同。為此推斷因葡萄的產地，葡萄的選擇、盛裝器皿、儲存時間不同以及制備方法的不同都會影響自釀葡萄酒中甲醇的含量。自釀葡萄酒雖經濟實惠，但在生產流程中存在難以人為控制的因素，而造成其甲醇含量難以控制，進而帶來相應危害。綜上所述，從健康角度出發(fā)，應慎重制造和飲用自釀葡萄酒。

根據以上的各項實驗結果，各組分分離度均大于1.5，相對標準偏差為1.2%，小于10%，加標回收率在90.03%～94.00%之間，且定量限小于甲醇的國標（400 mg/mL），該方法符合葡萄酒、果酒通用分析方法（GB/T15038-2006），同時也滿足氣相色譜方法驗證的各項要求。本文建立了一種快速簡便的檢測酒中甲醇含量的氣相色譜法，即以正丙醇為內標，采用GC/FID和GsBP-InoWAX毛細管柱，對樣品直接進樣進行分析。該方法的優(yōu)點是操作簡單，樣品不需要任何處理，而且進樣量小，分析周期短，3 min即可，大大縮短了檢測時間，樣品對毛細管色譜柱基本無污染，準確度高，靈敏性好，適合成分復雜的樣品的檢測，是一種高效、低成本、簡捷的檢測葡萄酒中甲醇含量的方法。

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Determination of methanol in self-made wine by gas chromatography

ZHENG Ya-qin，QIU Yan-li，WANG Ou，ZANG Xin，LI Qian*
（Department of Pharmaceutical Analysis of Harbin Medical University，Harbin 150000，China）

Objective：The aim of this investigation was to develop a method to detect methanol quantitatively in self-made wine.Methods：Using gas chromatography for quantitative detection of methanol in wine.The chromatographic conditions：stationary phase was capillary column of GsBP-InoWAX，column temperature：90℃，carrier gas：nitrogen，flow rate：1.4 mL/min；hydrogen flame ionization detector（FID）as the detector，the temperature was 200℃；the inlet temperature was 150℃.Results：The data showed that in the concentration range of 16～1000 μg/mL，a good linear relationship（R2=0.9987）.The method was validated with a good accuracy and the relative standard deviation（RSD）was 1.2%.Recovery was between 90.03%～94.00%. Conclusion：Quick and relatively low-cost method was developed，and the method was appropriate for quantitative analysis of methanol in self-made wine.

gas chromatography；methanol；self-made wine

TS261.7

A

1002-0306（2015）22-0054-03

10.13386/j.issn1002-0306.2015.22.002

2015－01－30

鄭亞琴（1992-），女，碩士研究生，研究方向：藥物分析，E-mail：13054288759@163.com。

*通訊作者：李倩（1976-），女，博士，副教授，研究方向：體內藥物分析及藥品質量標準的制定，E-mail：liqian@ems.hrbmu.edu.cn。

國家自然科學基金（31100835）；中國博士后面上基金資助（2013M531066）；黑龍江省博士后資助LBH-Z11059。