孫緒丁，權(quán)富家，任松鵬，趙延霞

(1.山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司，山東 濟南 250101；2.金訶藏藥股份有限公司，青海 西寧 810003)

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藏藥材止瀉木子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

孫緒丁1，權(quán)富家2，任松鵬1，趙延霞1

(1.山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司，山東 濟南 250101；2.金訶藏藥股份有限公司，青海 西寧 810003)

目的：研究制定藏藥材止瀉木子的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜(TLC)法定性鑒別止瀉木子；采用高效液相色譜(HPLC)法測定錐絲堿含量，采用Waters C18柱(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，柱溫為25℃，甲醇-0.005mol/L庚烷磺酸鈉(65∶35，V/V)，流速為1.0mL/min，檢測波長為215nm。結(jié)果：TLC方法專屬性強，特征斑點清晰；HPLC法測定大黃中錐絲堿含量的線性范圍為0.116～1.160mg/mL(r=0.999 4，n=5)，平均加樣回收率為97.43%，RSD為1.11%(n=6)。結(jié)論：建立藏藥材止瀉木子的定性、定量分析方法簡便易行，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高，可有效控制藥材質(zhì)量。

止瀉木子；薄層色譜法；高效液相色譜法；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

近年來，隨著藏藥制劑的推廣，止瀉木子用量逐年增大，現(xiàn)階段質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)難以滿足藥材質(zhì)量控制要求，給臨床安全用藥帶來隱患。止瀉木子為夾竹桃科植物止瀉木(HolarrhenaantidysentericaWall.ex A.DC.)的干燥種子，果期采集果實，取種子曬干。止瀉木子具有清熱、利膽、止瀉的作用，用于治療赤巴病、肝膽病、胃腸熱病、腹瀉、痢疾等疾病，用于十味黑冰片丸、十三味榜嘎散、復(fù)方酸藤消痔膠囊等多個藏藥制劑，應(yīng)用較為廣泛。藏藥部頒標(biāo)準(zhǔn)中WS3-BC-0014-95號，無任何質(zhì)量控制內(nèi)容，不足以控制止瀉木子的質(zhì)量，且文獻(xiàn)未發(fā)現(xiàn)任何有關(guān)止瀉木子的質(zhì)量控制方法。本研究建立薄層色譜鑒別和液相含量測定方法，穩(wěn)定性、重復(fù)性較好，且方法簡便易行，專屬性強，精密度、回收率較高，為止瀉木子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供參考。現(xiàn)具體報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

L-2100型日立高效液相色譜儀(包括日立L-2100泵，日立L-2400紫外檢測器)；色譜柱：Waters C18柱(250mm×4.6mm，5μm)。

島津AUW220D電子天平，KQ-300B超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥

止瀉木子對照藥材(批號：20110501)、錐絲堿對照品(批號：00003711-048)；止瀉木子(金訶藏藥股份有限公司提供，批號分別：20120101、20120102、20120103)；薄層硅膠G板(青島海洋化工分廠)。

甲醇為色譜純，超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC鑒別

取本品2g，加1%鹽酸50mL，超聲處理1h，過濾，濾液加氨水調(diào)節(jié)pH至9～10，用二氯甲烷萃取濾液3次，每次20mL，合并萃取液，蒸干(40℃以下)，加甲醇2mL溶解，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。取止瀉木子對照藥材2g，同法制備對照品溶液，取錐絲堿對照品適量，加甲醇制備0.1mg/mL錐絲堿對照品溶液。按薄層色譜法實驗，吸取上述溶液各5μL，分別點于硅膠G薄層板，以甲苯-乙酸乙酯-二乙胺(6.5∶2.5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液，加熱至顯色清晰。在與對照品相應(yīng)位置上，供試品色譜顯相同的熒光斑點。

圖1 TLC鑒別色譜

注：1.對照品溶液；2.對照藥材溶液；3～5.三批供試品溶液，批號分別為20120101、20120102、20120103

2.2 HPLC法測定含量

2.2.1 波長選擇 取錐絲堿對照品溶液，于190～400nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)樣品為末端紫外吸收，可選擇205～220nm為檢測波長。同時，考慮流動相為甲醇，其截至波長為205nm，由于樣品吸收峰不能過小，選定215nm為檢測波長。

2.2.2 色譜條件 色譜柱：Waters C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動相為甲醇-0.005mol/L庚烷磺酸鈉(65∶35)，檢測波長為215nm，柱溫為25℃，流速為1.0mL/min，進(jìn)樣量為10μL。

2.2.3 對照品溶液制備 取錐絲堿對照品適量，精密稱量，加甲醇制備0.1mg/mL錐絲堿對照品溶液。

2.2.4 供試品溶液制備 取本品粉末1g，精密稱量，置具塞錐形瓶，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率為120W，頻率為40kHz)30min，放冷，再稱定重量，加甲醇補充減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.5 系統(tǒng)適用性試驗與陰性干擾試驗 在“2.2.2”項色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，供試品色譜中錐絲堿峰與其相鄰色譜峰分離度均大于1.5，可用于止瀉木子含量的測定。見圖2。

圖2 HPLC色譜

2.2.6 線性關(guān)系考察 精密量取錐絲堿對照品貯備液溶液(錐絲堿含量為1.16mg/mL)1.0、3.0、5.0、8.0、10.0mL，分別置10mL容量瓶，加水稀釋至刻度，搖勻，精密進(jìn)樣10μL。以峰面積(A)對溶液濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y= 308.2X- 8.136，R=0.999 4。結(jié)果表明：錐絲堿在0.116～1.160mg/mL范圍內(nèi)，色譜峰峰面積(A)與對照品濃度(C)線性關(guān)系良好。

2.2.7 精密度試驗 精密吸取錐絲堿對照品溶液10μL，注入液相色譜儀，各連續(xù)測定6次，記錄峰面積并計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD%=0.152%(n=6)。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液10μL，分別于0、4、8、12、24h注入液相色譜儀，記錄峰面積并計算峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD%=0.189%(n=5)。結(jié)果表明，供試品溶液中錐絲堿在24h內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定。

2.2.9 重復(fù)性試驗 取同一批止瀉木子樣品(批號：20120101)6份，制備供試品溶液，精密吸取10μL，注入液相色譜儀進(jìn)行測定，計算得出樣品中錐絲堿含量為0.46%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%=0.579%(n=6)。結(jié)果表明，該分析方法重復(fù)性良好。

2.2.10 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的同一批樣品(批號：20120101，含量為0.46%)0.5g，共6份，分別置于具塞錐形瓶中，均精密加入25mL錐絲堿對照品溶液(含量為1.16mg/mL)和甲醇25mL，按“2.2.4”項方法制備供試品溶液，按“2.2.2”項色譜條件進(jìn)行測定，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀測定，以外標(biāo)法方程計算含量，并計算回收率。結(jié)果顯示：供試品中錐絲堿平均加樣回收率為97.43%，RSD為1.11%(n=6)，該方法測定結(jié)果準(zhǔn)確。

2.2.11 樣品含量測定 按“2.2.4”項所述方法制備的三批供試品溶液(批號分別為20120101、20120102、20120103，每批3份)。按“2.2.2”項色譜條件進(jìn)行含量測定，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，根據(jù)外標(biāo)法方程分別計算供試品中錐絲堿的含量。見表1。

表1 止瀉木子含量測定結(jié)果 (n=3)

3 討論

隨著藏藥材止瀉木子相關(guān)制劑十味黑冰片丸、十三味榜嘎散、復(fù)方酸藤消痔膠囊的普及，其臨床用量越來越大。但目前尚無質(zhì)量控制相關(guān)研究，制劑使用存在一定的安全隱患，本文通過鑒別止瀉木子中生物堿及測定錐絲堿含量建立其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

本研究，除上述展開劑外，也可選擇正己烷-乙酸乙酯-甲醇-二乙胺(10∶8∶2∶1)進(jìn)行展開，效果相當(dāng)。測定錐絲堿含量研究中，使用簡單流動相如甲醇-水、乙腈-水或簡單鹽類均不能較好地分離止瀉木子中錐絲堿，研究發(fā)現(xiàn)離子流動相對后續(xù)效果改善明顯，除庚烷磺酸鈉洗脫外，使用0.1%三氟乙酸也可達(dá)到良好的分析效果。

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[2] 阿古拉，烏蘭巴特爾.敖勒蓋熱-13味散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2013(8)：53-55.

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(責(zé)任編輯：李嵐春)

2014-12-28

濟南市科技局“基于神經(jīng)功能重建型中風(fēng)后遺癥中藥新藥的研發(fā)”(2013019)

孫緒丁(1987-)，男，山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司經(jīng)理，研究方向為藥品分析。

R258

A

1673-2197(2015)08-0020-02

10.11954/ytctyy.201508010