劉會民 ，劉蓬蓬

(1.朝陽市第二人民醫(yī)院，遼寧 朝陽 122000；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600)

?

正交試驗優(yōu)選關(guān)黃柏炭最佳炮制工藝研究

劉會民1，劉蓬蓬2

(1.朝陽市第二人民醫(yī)院，遼寧 朝陽 122000；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600)

目的：優(yōu)選關(guān)黃柏炭的炮制工藝。方法：以鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀為指標(biāo)，選擇炒制溫度、炒制時間為考察因素并結(jié)合飲片炒炭后的外觀性狀要求，采用正交試驗優(yōu)選關(guān)黃柏炭的最佳炮制工藝。結(jié)果：關(guān)黃柏炭的炮制工藝為每100g關(guān)黃柏在240℃條件下炒4min。結(jié)論：優(yōu)化的關(guān)黃柏炭炮制工藝穩(wěn)定、可行。

關(guān)黃柏；炮制；炒炭；正交試驗

關(guān)黃柏為蕓香科植物黃檗PhellodendronamurenseRupr.的干燥樹皮,其藥性苦、寒，入腎、膀胱經(jīng)，具有清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡的功效[1]。關(guān)黃柏中生物堿為其主要有效成分，其中包含小檗堿、黃柏堿、巴馬汀、藥根堿，具有抗炎、解熱的功效。關(guān)黃柏制炭后，苦寒之性大減，收澀之性增加，清濕熱之中兼具澀性，可用于治療便血，崩漏下血[2]。本實驗以鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀為指標(biāo)，選擇炒制溫度、炒制時間為考察因素，采用正交試驗優(yōu)選關(guān)黃柏炭的最佳炮制工藝，為工業(yè)化大生產(chǎn)提供研究基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters e2695高效液相色譜儀，Waters 2998型檢測器；METTLER AE240型十萬分之一分析天平(瑞士METTLER公司)；FA1004B型電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；DFT-100型高速萬能粉碎機(jī)(溫嶺市林大機(jī)械有限公司)；KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)等。

1.2 藥材

生關(guān)黃柏飲片購自大連開發(fā)區(qū)保健大藥房，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)翟延君教授鑒定為蕓香科植物黃檗PhellodendronamurenseRupr.的干燥樹皮。

1.3 試藥

鹽酸巴馬汀對照品(中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號110732-200506)，鹽酸小檗堿對照品(成都曼斯特生物科技有限公司，純度≥98%，批號MUST-10090303)；乙腈、甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗

根據(jù)炮制規(guī)范對炒炭工藝進(jìn)行正交實驗設(shè)計，對關(guān)黃柏按照L9(34)正交因素水平表進(jìn)行炮制，以關(guān)黃柏中的主要成分鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀的含量為考察指標(biāo)，結(jié)合生產(chǎn)實際選擇炒制時間、炒制溫度為考察因素，因素水平見表1。

表1 關(guān)黃柏炭工藝因素水平

2.2 樣品制備

取9份關(guān)黃柏，每份20g，按照正交試驗因素表炮制樣品。

2.3 鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀含量測定[3]

2.3.1 對照品溶液制備 取鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含105.2、14.96μg的對照品溶液，即得。

2.3.2 供試品溶液制備 取各樣品粉末(過60目篩)約0.2g，精密稱定，置50mL量瓶中，加入60%乙醇40mL，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)45min，放冷，加60%乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3 色譜條件 Agilent TC-C18(150mm×4.6mm，5μm)色譜柱，以乙腈為流動相A，以0.1%磷酸溶液(加入磷酸二氫鈉使其達(dá)到0.02mol/L)為流動相B，按表2中的規(guī)定進(jìn)行洗脫，檢測波長：345nm，流速：1.0mL·min-1，柱溫：25 ℃，進(jìn)樣量：10μL，結(jié)果見表3。色譜見圖1-圖3。

表2 流動相洗脫

圖1 鹽酸巴馬汀對照品色譜

圖2 鹽酸小檗堿對照品色譜

圖3 關(guān)黃柏炭炮制品色譜

2.3.4 線性關(guān)系考察 精密吸取各生物堿對照品溶液適量，注入液相色譜儀，按“2.3.3”項下色譜條件測定，并記錄峰面積，以對照品的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)X，峰面積(A)為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得鹽酸小檗堿與鹽酸巴馬汀回歸方程分別為：Y=4 062 106.770 8X- 12 224.201 8(r=0.999 3)，Y=4 131 597.030 5X+9 112.494 4(r=0.999 1)，結(jié)果表明鹽酸小檗堿在0.005 26～0.157 8μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，鹽酸巴馬汀在0.006～0.09μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.5 精密度試驗 分別精密吸取鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀對照品溶液5μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，按“2.3.3”項下條件測定各對照品的色譜峰面積，計算其RSD分別為1.1%和1.3%，表明儀器精密度良好。

2.3.6 穩(wěn)定性實驗 取同一關(guān)黃柏炭供試品，放置于室溫，于0、2、4、6、8、10、12、24h后，按“2.3.3”項下條件操作，結(jié)果鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀的峰面積RSD分別為1.5%和2.3 %，表明該供試品溶液在室溫下24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.7 重復(fù)性試驗 取同一關(guān)黃柏炭供試品6份，按“2.3.3”項下條件測定鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀各成分的含量，計算其RSD分別為1.8%和1.5%，結(jié)果表明供試品重復(fù)性良好。

2.3.8 加樣回收率試驗 取6份已知含量樣品0.2g，精密稱定，分別精密加入鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀對照品各10mL，按“2.3.2”項下條件操作。測得鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀的平均回收率分別為101.97%和99.83 %，RSD分別為1.9%和1.2%。

2.4 炒炭工藝優(yōu)選

鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀均為關(guān)黃柏中指標(biāo)性成分，且在2010 年版《中國藥典》中以鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀為檢測指標(biāo)，故在綜合評分中將鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀權(quán)重系數(shù)均定為0.5。綜合指標(biāo)OD=(mAi×0.5/mAmax+mBi×0.5/mBmax)×100。炒炭試驗結(jié)果見表3，方差分析見表4。

表3 正交試驗優(yōu)化關(guān)黃柏炭炮制工藝測定結(jié)果

表4 方差分析結(jié)果

注：F0.05(2,2)=19.0。

2.5 結(jié)果

方差分析結(jié)果表明，炒制溫度和炒制時間對關(guān)黃柏炭中小檗堿和巴馬汀含量均有顯著性影響，主次順序為A(炒制溫度)>B(炒制時間)。從正交試驗結(jié)果可以看出A1B3綜合評分最高，但結(jié)合關(guān)黃柏炭成品質(zhì)量，即表面焦黑色，內(nèi)部深褐色的要求，最終選定關(guān)黃柏的制炭優(yōu)化工藝為A2B2，即每100g關(guān)黃柏在240℃條件下炒4min。

2.6 驗證試驗

按“2.5”項得到的炮制參數(shù)進(jìn)行驗證性試驗，得到以下結(jié)果，見表5。從結(jié)果可以看出所指定的關(guān)黃柏炭工藝穩(wěn)定可行。

3 討論

試驗中考察指標(biāo)為鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀，為盡量客觀反映各個因素之間的關(guān)系及因素水平對關(guān)黃柏炮制品質(zhì)量的影響，擬采用綜合加權(quán)評分法。即以一個綜合指標(biāo)(overall desirability，OD)，將各個考察指標(biāo)統(tǒng)一綜合考察，以綜合指標(biāo)進(jìn)行直觀分析。在綜合評分中將鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀權(quán)重系數(shù)均定為0.5。綜上，綜合指標(biāo)OD=(mAi×0.5/mAmax+mBi×0.5/ mBmax)×100。同時，在確定關(guān)黃柏炒炭的最佳工藝時將炮制后的飲片外觀性狀是否符合要求作為首要篩選條件。

本試驗中鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀的含量測定方法參照2010版藥典中關(guān)黃柏的含量測定內(nèi)容。由于在實際進(jìn)樣時發(fā)現(xiàn)在同一進(jìn)樣量下各樣品中指標(biāo)成分含量差別較大，為了使其在同一線性范圍內(nèi)，故在1～20μL范圍內(nèi)根據(jù)實際情況選取不同的進(jìn)樣量。

本實驗參照了文獻(xiàn)中的關(guān)于鹽酸小檗堿和巴馬汀的測定方法，最終選定藥典的方法，其操作方法簡單，測定結(jié)果快捷。最終制定的關(guān)黃柏炒炭工藝在驗證實驗中結(jié)果良好，說明本工藝穩(wěn)定可行，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。

[1] 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典[S] .一部. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 賈天柱.中藥炮制學(xué)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2008.

[3] 張煊,崔征,周海燕,等. 高效液相色譜法測定關(guān)黃柏不同采收期及黃檗不同部位的小檗堿、巴馬汀含量[J]. 沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2003,20(3):194-197.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

Study on Processing Technology of Phellodendron Amurense Rupr Carbonisatus by Orthogonal Experiment Design

Liu Huiming1,Liu Pengpeng2

(1.The second peoples hospital of chaoyang city, Chaoyang 122000,China; 2. Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Dalian 116600,China)

Objective:To optimize the processing technology of phellodendron amurense rupr carbonisatus. Methods:The content of palmatine chloride and berberine hydrochloride was regarded as evaluated index, the heating temperature and heating time as examine factors, associate with appearance to optimize the best processing technology of the phellodendron amurense rupr carbonisatus by orthogonal experiment design. Results:The best processing technology of the phellodendron amurense rupr carbonisatus is frying for 4minutes at 240℃per 100g. Conclusion:The optimized processing technology is stable and feasible.

Phellodendron；Processing；Carbonizing by Stir-frying；Orthogonal Experiment Design

2014-09-25

國家自然科學(xué)基金項目(81274083)

劉會民(1968-)，男，遼寧省朝陽市第二人民醫(yī)院副主任中藥師，研究方向為中藥制劑。

R283

A

1673-2197(2015)03-0019-03

10.11954/ytctyy.201503008