張艷艷　楊小琴　張媛媛

摘 要：應(yīng)用不同激素配比的培養(yǎng)基對(duì)榆林市本土馬鈴薯品種陜北紅洋芋進(jìn)行莖尖的分化培養(yǎng)，以期獲得脫毒試管苗。試驗(yàn)結(jié)果表明，最適合陜北紅洋芋莖尖分化成苗的培養(yǎng)基配方為MS+0.1 mg/L NAA+0.1 mg/L GA3+0.05 mg/L 6-BA，成活率達(dá)97.4%，分化成苗率達(dá)42.1%。

關(guān)鍵詞：陜北紅洋芋；莖尖脫毒；培養(yǎng)基篩選

陜北紅洋芋是陜北榆林特有的馬鈴薯品種，有多年的栽培歷史。該品種植株繁茂，莖稈紫褐色，葉色深綠，薯塊較大，呈不規(guī)則橢圓形，紫皮白肉，產(chǎn)量較為可觀。由于馬鈴薯的傳統(tǒng)種植方式是用薯塊作為營(yíng)養(yǎng)體進(jìn)行繁殖，導(dǎo)致病毒隨著世代繁衍在母體內(nèi)逐漸累積，從而引起種性退化，對(duì)生產(chǎn)造成很大為害。本研究采用莖尖脫毒技術(shù)來脫除馬鈴薯體內(nèi)對(duì)生產(chǎn)造成損害的病毒，恢復(fù)馬鈴薯的優(yōu)良種性，改善品質(zhì)，提高產(chǎn)量，最終做到為生產(chǎn)服務(wù)[1]。同時(shí)，本研究還篩選了一系列不同激素配比的培養(yǎng)基，獲得了陜北紅洋芋最適宜的成活和成苗培養(yǎng)基，為后續(xù)的脫毒種苗生產(chǎn)提供了技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

以本地馬鈴薯品種陜北紅洋芋的薯塊萌發(fā)幼芽為供試材料。

1.2 試驗(yàn)方法

①培養(yǎng)基設(shè)計(jì) 本試驗(yàn)以云薯201[2]，隴薯6號(hào)[3]以及費(fèi)烏瑞它[4]的研究結(jié)果為參考依據(jù)，以MS作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，以NAA、6-BA、GA3、D-泛酸鈣這4種生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的不同配比設(shè)計(jì)出了8種培養(yǎng)基。培養(yǎng)基成分詳見表1。

②外植體的制備 選用標(biāo)準(zhǔn)薯型的薯塊室溫下置于暗光中自然萌芽，10 d后待薯塊長(zhǎng)出約0.5 cm長(zhǎng)的白色簇生芽時(shí)，將薯塊置于自然散射光下繼續(xù)萌芽。待芽長(zhǎng)到1.5～2.0 cm時(shí)，即可取芽作外植體。

③外植體的處理 用鑷子小心取下薯塊上的健壯芽，裝入紗袋中抽緊袋口，掛于自來水水龍頭下流水沖洗40～60 min。在無菌操作臺(tái)上，用75%的酒精均勻噴濕并靜置1 min，用無菌水沖洗一遍，之后用6%的次氯酸鈉溶液浸泡10 min，最后再用無菌水沖洗3遍，放于燒杯內(nèi)控水備用。

④芽莖尖的剝離和培養(yǎng) 將處理好的芽用無菌鑷子夾取放在體視顯微鏡下進(jìn)行剝離，剝離的莖尖大小以帶有1～2個(gè)葉原基為宜。

將剝離的莖尖接種于上述8種培養(yǎng)基中放在日光溫室內(nèi)培養(yǎng)并開始觀察愈傷組織的形成狀況。最初的2周適當(dāng)遮光，2周后置于溫度20～27℃、光照16 h/d的條件下培養(yǎng)。待苗高約1 cm時(shí)轉(zhuǎn)入MS普通培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

⑤統(tǒng)計(jì)成活率及成苗率 莖尖接種培養(yǎng)6個(gè)月后進(jìn)行調(diào)查，統(tǒng)計(jì)莖尖成活率（成活莖尖個(gè)數(shù)與接種莖尖個(gè)數(shù)之比）和成苗率（成苗莖尖個(gè)數(shù)與成活莖尖個(gè)數(shù)之比）。

2 結(jié)果與分析

馬鈴薯莖尖接種6個(gè)月后，生長(zhǎng)狀況已經(jīng)穩(wěn)定，之后基本上沒有大的變化。由表2可以看出，馬鈴薯莖尖在1號(hào)培養(yǎng)基（云薯201培養(yǎng)基）中能夠全部成活，但成苗率為0；莖尖在2號(hào)培養(yǎng)基（隴薯6號(hào)培養(yǎng)基）中能夠全部成活，成苗率接近40%；莖尖在3號(hào)培養(yǎng)基（費(fèi)烏瑞它培養(yǎng)基）中的成活率較高，而且成苗率是試驗(yàn)8種培養(yǎng)基中最高的；莖尖在4號(hào)培養(yǎng)基中絕大多數(shù)能夠成活，但多數(shù)發(fā)展為愈傷組織，且愈傷組織的生活力較強(qiáng)，一部分能夠分化成苗；莖尖在5號(hào)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)狀況良好，通過愈傷途徑可以得到一些苗子；6號(hào)培養(yǎng)基較5號(hào)培養(yǎng)基中6-BA的含量高了0.05 mg/L，成苗率下降了3.3%，7號(hào)培養(yǎng)基中6-BA含量更高，莖尖成苗率又進(jìn)一步降低；莖尖在8號(hào)培養(yǎng)基中，莖尖極少出現(xiàn)愈傷化，生長(zhǎng)過于緩慢，極少數(shù)能夠不通過愈傷途徑直接成苗。

試驗(yàn)結(jié)果說明，參試的8種培養(yǎng)基中，3號(hào)參考費(fèi)烏瑞它培養(yǎng)基而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基配方最適于陜北紅洋芋的莖尖組培；對(duì)于陜北紅洋芋來說最適宜其莖尖組培的6-BA濃度為0.05 mg/L。

3 結(jié)論與討論

陜北紅洋芋在陜北榆林具有較好種植和推廣前景。至今未對(duì)該品種作出判定，遺傳背景不詳。通過本試驗(yàn)，筆者認(rèn)為陜北紅洋芋與云薯[2]和隴薯[3]的培養(yǎng)特性相差較大，莖尖培養(yǎng)直接成苗的最適宜培養(yǎng)基的可借鑒性較低[5]。而與費(fèi)烏瑞它[4]的莖尖培養(yǎng)直接成苗的最適宜培養(yǎng)基成分最為接近，并且參考費(fèi)烏瑞它的最適宜培養(yǎng)基而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基配方可以使陜北紅洋芋的莖尖培養(yǎng)直接成苗率達(dá)到最高。故筆者猜測(cè)陜北紅洋芋與費(fèi)烏瑞它或有相對(duì)較近的遺傳背景。

在NAA、GA3濃度固定的情況下調(diào)整6-BA的使用濃度，在一定范圍內(nèi)能夠提高莖尖的成活率和成苗率，陜北紅洋芋的最適6-BA濃度為0.05 mg/L。當(dāng)濃度達(dá)到0.2 mg/L的時(shí)候，對(duì)莖尖發(fā)育會(huì)產(chǎn)生抑制作用，這與前人結(jié)果一致[6]。另外，用D-泛酸鈣代替培養(yǎng)基中的NAA，初期雖然能夠明顯地促進(jìn)不定芽的分化，但中后期莖尖分化就會(huì)日趨緩慢，甚至衰老死亡。因此，用D-泛酸鈣代替NAA促使莖尖分化成芽的培養(yǎng)基配方還有待改進(jìn)。此外，有研究[7]在馬鈴薯莖尖分化培養(yǎng)的培養(yǎng)基中添加適量的玉米素，有顯著的成苗效果，在同等條件下，與6-BA相比較，效果更加顯著。

馬鈴薯在體外擴(kuò)繁中，通過愈傷組織和不定芽再生的過程，會(huì)頻發(fā)多倍性。Curry等[8]建議應(yīng)用流式細(xì)胞儀對(duì)任意途徑獲得的分化苗進(jìn)行遺傳漂變的檢測(cè)，從而篩選對(duì)生產(chǎn)有價(jià)值的單株，摒棄無意義的變異材料。這為我們通過莖尖剝離獲得脫毒種苗的研究提供了遺傳性的檢測(cè)依據(jù)。

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