田宋新，柴璐璐，王 宏

(石河子大學(xué) a.第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科； b.醫(yī)學(xué)院神經(jīng)病學(xué)教研室，新疆 石河子 832000)

早期分泌性抗原靶6、脂阿拉伯甘露聚糖診斷結(jié)核性腦膜炎的價值

田宋新a，柴璐璐a，王 宏b

(石河子大學(xué) a.第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科； b.醫(yī)學(xué)院神經(jīng)病學(xué)教研室，新疆 石河子 832000)

目的 探討早期分泌性抗原靶6(Esat6)、脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)檢測在結(jié)核性腦膜炎診斷中的應(yīng)用價值。方法 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Elisa法)檢測結(jié)核性腦膜炎患者(結(jié)腦組，20例)、非結(jié)核性腦膜炎患者(非結(jié)腦組，20例)和對照組(以頭痛為主訴者，20例)腦脊液及血清中Esat6和LAM含量，并進行比較。結(jié)果 結(jié)腦組患者腦脊液、血清中的Esat6及LAM含量均明顯高于非結(jié)腦組和對照組(均P<0.05)；非結(jié)腦組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液及血清中Esat6與LAM水平存在顯著相關(guān)性(r=0.961，r=0.894，均P<0.05)。結(jié)論 腦脊液、血清中Esat6和LAM檢測可作為結(jié)核性腦膜炎的輔助診斷指標。

結(jié)核性腦膜炎； 診斷； 分泌型抗原靶6； 脂阿拉伯甘露聚糖； 酶聯(lián)免疫吸附法

結(jié)核性腦膜炎是由結(jié)核分枝桿菌引起的非化膿性腦膜炎性疾病，約占全身性結(jié)核病的1%，肺外結(jié)核病的7%～10%，病死率為20%～50%，生存患者中20%～30%遺留永久性中樞神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥[1]。因此，早期診斷、早期治療是降低結(jié)核性腦膜炎致死率、致殘率的關(guān)鍵。由于結(jié)核性腦膜炎患者臨床表現(xiàn)缺乏特異性，實驗室及影像學(xué)表現(xiàn)也無特異性的指標，因此結(jié)核性腦膜炎早期、準確的診斷一直是困擾醫(yī)學(xué)界的難題。結(jié)核抗原作為結(jié)核桿菌存在的證據(jù)，對結(jié)核病的診斷很有價值。有研究[2]表明，檢測結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液中分泌性抗原靶6(Esat6)的含量，在診斷結(jié)核桿菌感染方面具有較高的靈敏度和特異度。國外有研究[3]發(fā)現(xiàn)，檢測脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)抗原有助于結(jié)核病的診斷。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附法(Elisa法)檢測結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液及血清中Esat6和LAM的表達，探討兩者聯(lián)合檢測在結(jié)核性腦膜炎診斷中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 病例資料

選擇2013年11月至2014年8月在石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院、石河子市人民醫(yī)院住院的結(jié)核性腦膜炎患者20例(結(jié)腦組)，均符合2010年柳葉刀的結(jié)核性腦膜炎診斷標準[4]，包括臨床入選標準、臨床評分標準(臨床特征、腦脊液特征、腦影像學(xué)特征及其他部位結(jié)核的證據(jù))及排除標準。其中男12例，女8例，年齡18～68(44.70±16.32)歲，病程3～30(17.4±10.5)d。選擇非結(jié)核性腦膜炎患者20例(非結(jié)腦組)，男10例，女10例，年齡14～72(44.50±17.55)歲。其中病毒性腦膜炎14例，化膿性腦膜炎6例。選擇同期住院以頭痛為主訴的患者20例(對照組)，男13例，女7例，年齡14～78(43.05±18.35)歲。查體神經(jīng)系統(tǒng)無異常，腦脊液常規(guī)、生化檢測指標均在正常參考范圍。3組患者年齡、性別比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。

1.2 檢測方法

所有入選對象于入院48 h內(nèi)行腰椎穿刺術(shù)，留取腦脊液2 mL行常規(guī)+生化檢查及結(jié)核桿菌涂片檢測；同時留存腦脊液2 mL，于4 ℃、2 300 r·min-1離心10 min，取上清液分裝，置于-80 ℃ 冰箱保存?zhèn)溆?。取入院次日清晨空腹靜脈血3 mL，加入未加抗凝劑的試管中，以3 000 r·min-1離心15 min 后分離血清，置于-80 ℃ 冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

采用Elisa法檢測腦脊液及血清中Esat6和LAM水平，試劑盒由上海藍基生物科技有限公司提供，具體步驟嚴格按試劑盒的操作說明書進行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

結(jié)腦組腦脊液中Esat6及LAM含量明顯高于非結(jié)腦組和對照組(均P<0.05)，非結(jié)腦組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；結(jié)腦組患者血清中Esat6及LAM含量明顯高于非結(jié)腦組和對照組(均P<0.05)；非結(jié)腦組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液及血清Esat6與LAM水平存在顯著相關(guān)性(r=0.961，r=0.894，均P<0.05)。

組別n腦脊液血清Esat6LAMEsat6LAM結(jié)腦組203.23±0.89*9.48±1.80*1.11±0.25*3.05±1.11*非結(jié)腦組202.21±0.457.57±1.400.83±0.201.86±0.60對照組201.98±0.307.02±1.350.72±0.161.51±0.57

*P<0.05與非結(jié)腦組和對照組比較。

3 討論

結(jié)核性腦膜炎診斷的金標準是腦脊液涂片檢出抗酸桿菌或培養(yǎng)出結(jié)核分枝桿菌，但是兩者檢出陽性率很低，并且結(jié)核桿菌生長緩慢，培養(yǎng)周期較長(4～6周)，對疾病的早期診斷價值有限。聚合酶鏈反應(yīng)檢測結(jié)核桿菌具有快速、敏感的特點，但對技術(shù)設(shè)備要求高，從而限制了其在臨床的應(yīng)用。目前，結(jié)核桿菌抗原檢測診斷結(jié)核病的方法備受關(guān)注。結(jié)核的致病菌為結(jié)核分枝桿菌，當(dāng)機體受到結(jié)核分枝桿菌感染后，體內(nèi)首先會出現(xiàn)結(jié)核抗原，結(jié)核抗原的檢測可以作為結(jié)核分枝桿菌存在的直接證據(jù)，其檢測不受機體免疫功能狀況的影響，避免了結(jié)核病患者因免疫應(yīng)答低下導(dǎo)致的體液免疫檢測或細胞免疫檢測的假陰性。因此檢測結(jié)核抗原可作為結(jié)核病早期快速、敏感及特異的診斷方法。

結(jié)核分枝桿菌抗原根據(jù)所處的細胞位置不同，分為分泌性蛋白抗原、胞壁脂膜抗原和胞漿應(yīng)激蛋白抗原3種，分泌性蛋白是目前發(fā)現(xiàn)對結(jié)核分枝桿菌感染保護性最好的一組蛋白抗原。Esat6是結(jié)核分枝桿菌早期分泌性蛋白的主要成分，由RD1區(qū)基因Rv3875編碼，共編碼95個氨基酸。有研究[5]證實，Esat6僅存在于結(jié)核分枝桿菌及少數(shù)幾種致病性分枝桿菌中，90%以上的非致病性分枝桿菌缺乏編碼此蛋白的基因，增殖期和非復(fù)制期的結(jié)核分枝桿菌都高度表達Esat6。Esat6是重要的T細胞抗原，可被感染結(jié)核分枝桿菌的T淋巴細胞識別產(chǎn)生γ-干擾素，基于此原理的結(jié)核分枝桿菌感染T細胞斑點試驗(T-SPOT)在臨床上逐步開展，它具有敏感性高、快速的特點，但是不能區(qū)分活動性感染、既往感染或潛伏感染，因此T-SPOT不能作為單獨診斷結(jié)核病的依據(jù)，尤其是對結(jié)核性腦膜炎僅能作為參考性實驗室依據(jù)。而Elisa法相對于T-SPOT操作簡便、價格低廉，所需樣本量少，更適宜臨床應(yīng)用。

宋孚霞等[6]應(yīng)用間接酶聯(lián)免疫實驗檢測結(jié)腦組和對照組腦脊液中Esat6含量，結(jié)果顯示：結(jié)腦組與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，診斷靈敏性為88%，特異性為92%。本研究對3組患者腦脊液及血清Esat6進行檢測，結(jié)果顯示：結(jié)腦組患者腦脊液中Esat6含量明顯高于非結(jié)腦組和對照組(均P<0.05)；非結(jié)腦組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，與文獻[6]研究結(jié)果一致。提示Esat6對結(jié)核性腦膜炎的早期診斷具有一定的價值，可能作為結(jié)核性腦膜炎診斷的一項輔助檢查手段。

LAM是結(jié)核分枝桿菌細胞壁的重要組成部分，其核心骨架為甘露聚糖，側(cè)鏈為甘露糖、阿拉伯糖單位，分子以磷脂酰肌醇錨定在胞質(zhì)膜上。LAM具有菌屬特異性和高度的免疫原性，為結(jié)核分枝桿菌的重要抗原，在結(jié)核分枝桿菌與宿主的相互作用中起著關(guān)鍵作用。以往主要用LAM-IgG抗體診斷結(jié)核病，當(dāng)分枝桿菌感染人體后，LAM引起機體的免疫反應(yīng)，致敏淋巴細胞產(chǎn)生針對LAM的特異性抗體LAM-IgG，通過對體液LAM-IgG的檢測可反映分枝桿菌的感染情況。李永剛等[7]研究發(fā)現(xiàn)，檢測腦脊液LAM抗體對結(jié)核性腦膜炎有良好的診斷價值。丁曉旭等[8]研究顯示，腦脊液中LAM-IgG診斷結(jié)核性腦膜炎的敏感性為50.9%，血液中LAM-IgG診斷結(jié)核性腦膜炎的敏感性為75.4%。但針對抗原的特異性抗體產(chǎn)生需要時間，且易受機體免疫狀態(tài)的影響出現(xiàn)假陰性結(jié)果，不能區(qū)別既往感染或急性感染，抗原的檢測可以彌補這些不足。由此推測LAM抗原的檢測可能優(yōu)于LAM-IgG抗體。

近年來國外學(xué)者對體液中的LAM抗原進行檢測，并取得了令人滿意的結(jié)果。研究[9-12]報道，在結(jié)核病患者血清、尿液、痰液及肺外結(jié)核患者的胸腔積液和腦脊液中均檢測到LAM抗原，檢測的敏感性為50%～91%，特異性為69%～100%。施健等[13]研究顯示，結(jié)核性胸腔積液患者胸水及血清中LAM抗原陽性率高于非結(jié)核組。王芳等[14]用Elisa法檢測患者胸腔積液LAM抗原水平，結(jié)果顯示：結(jié)核組高于非結(jié)核組，診斷結(jié)核性胸膜炎的敏感性為54%，特異性為78%。本研究結(jié)果顯示，結(jié)腦組患者腦脊液及血清中LAM含量均高于非結(jié)腦組及對照組(均P<0.05)，非結(jié)腦組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。表明LAM在結(jié)核性腦膜炎的病程中起到了一定的作用，是結(jié)核性腦膜炎診斷的一個有用參數(shù)。本研究將結(jié)核性腦膜炎患者的Esat6與LAM表達水平進行pearson相關(guān)分析，顯示有較高的相關(guān)性，提示Esat6和LAM在結(jié)核性腦膜炎中可同時存在，發(fā)揮著相似的作用，2項指標聯(lián)合檢測有利于結(jié)核性腦膜炎的診斷。

本研究檢測了結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液及血清中Esat6及LAM水平，提示這2種抗原在結(jié)核性腦膜炎的診斷中具有較好的臨床應(yīng)用價值，有望成為結(jié)核性腦膜炎診斷的輔助指標。

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(責(zé)任編輯：周麗萍)

Values of Early Secretory Antigenic Target 6 and Lipoarabinomannan in Diagnosis of Tuberculous Meningitis

TIAN Song-xina,CHAI Lu-lua,WANG Hongb

(a.DepartmentofNeurologyoftheFirstAffiliatedHospital； b.DepartmentofNeurologyofSchoolofMedicine,ShiheziUniversity,Shihezi832000,China)

Objective To investigate the values of early secretory antigenic target 6 (Esat6) and lipoarabinomannan (LAM) in the diagnosis of tuberculous meningitis.Methods The levels of Esat6 and LAM in cerebrospinal fluid and serum were detected by Elisa in 20 patients with tuberculous meningitis,20 patients with non-tuberculous meningitis and 20 control subjects with headache as the chief complaint.Results The cerebrospinal fluid and serum levels of Esat6 and LAM in tuberculous meningitis group were significantly higher than those in non-tuberculous meningitis group and control group (P<0.05).However,the difference was not statistically significant between non-tuberculous meningitis group and control group (P>0.05).The cerebrospinal fluid and serum levels of Esat6 were significantly correlated with those of LAM in patients with tuberculous meningitis (r=0.961andr=0.894,respectively;P<0.05).Conclusion The Esat6 and LAM in cerebrospinal fluid and serum can be used as auxiliary diagnostic indicators of tuberculous meningitis.

tuberculous meningitis; diagnosis; secretory antigenic target 6; lipoarabinomannan; enzyme linked immunosorbent assay

2014-09-02

國家“十二五”計劃重大傳染病防治專項結(jié)核病專項(2013ZX10003003-002-002)

田宋新(1989—)，女，碩士研究生，主要從事神經(jīng)系統(tǒng)疾病的診治研究。

王宏，主任醫(yī)師，教授，E-mail:wang832000@sina.com。

R529.3

A

1009-8194(2015)03-0001-03

10.13764/j.cnki.lcsy.2015.03.001