王 平，涂同濤，臧思思，丁 寧，孫 余，楊 露，胡麗華＊

（1.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北武漢430022；2.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院輸血科）

心臟移植排斥反應(yīng)患者血清IL－6檢測(cè)的意義

王 平1，涂同濤2，臧思思1，丁 寧1，孫 余1，楊 露1，胡麗華1＊

（1.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北武漢430022；2.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院輸血科）

目的研究心臟移植術(shù)后患者血清中IL－6的變化及其在疾病發(fā)展過程中的意義。方法 分別在移植前及術(shù)后第1、3、7、14、30天抽取患者靜脈血，采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)血清中IL－6濃度，并監(jiān)測(cè)患者血清中FK506藥物濃度。結(jié)果 心臟移植患者血清中IL－6在術(shù)前與健康對(duì)照組人群無顯著性差異（P＞0.05），并在術(shù)后第一天明顯升高（P＜0.05），并于第3天開始降低，在術(shù)后第7天基本回復(fù)術(shù)前水平；移植急性排斥組患者血清中IL－6濃度顯著高于術(shù)前水平，在未發(fā)生排斥反應(yīng)時(shí)，移植穩(wěn)定組患者血清中IL－6與術(shù)前無明顯差異；移植急性排斥反應(yīng)患者血清中FK506濃度與IL－6濃度呈現(xiàn)顯著地負(fù)相關(guān)性（P＜0.05）。結(jié)論 IL－6在移植急性排斥反應(yīng)病情的發(fā)展中起著重要作用，監(jiān)測(cè)受者血清中IL－6水平可預(yù)測(cè)急性排斥反應(yīng)發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。

心臟移植；白細(xì)胞介素－6；FK506

（Chin J Lab Diagn，2015，19：1673）

近年來，心臟移植已經(jīng)成為心臟功能衰竭終末期最為重要的治療手段，但是移植術(shù)后最常發(fā)生的免疫排斥反應(yīng)仍然是影響患者生存及移植物存活的重要因素。如何早期診斷排斥反應(yīng)，是臨床醫(yī)生面臨的重要問題。到目前為止，心肌內(nèi)膜活檢（EMB）仍是心臟移植排斥反應(yīng)診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。但是，進(jìn)行EMB是一種創(chuàng)傷性的檢查方法，不能及時(shí)、全面地診斷是否發(fā)生排斥反應(yīng)。因此尋找無創(chuàng)、簡(jiǎn)便、快捷、全面、可靠、為臨床提供可靠的動(dòng)態(tài)連續(xù)觀測(cè)指標(biāo)的方法具有重要意義。在本研究中，我們通過檢測(cè)心臟移植患者血清中IL－6在手術(shù)前后的變化，來評(píng)估其在移植排斥反應(yīng)的發(fā)展及預(yù)后中的意義。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

心臟移植組為本院2014年10月－2015年3月接受異體心臟移植患者36例，男25例，女11例；年齡22－70歲，平均43歲；排除再次移植及術(shù)后1個(gè)月內(nèi)發(fā)生明顯病毒、細(xì)菌等病原體感染者（PCT、CRP、WBC等指標(biāo)正常）。選取年齡、性別與患者相匹配的健康對(duì)照者36例，男24例，女12例；22－60歲，平均40歲，均來自健康查體者，各項(xiàng)檢查指標(biāo)均正常。所有患者接受同種異體心臟移植術(shù)后第一天開始使用他克莫司（FK506）、馬替麥考酚酯（MMF）和皮質(zhì)激素三聯(lián)免疫抑制方案。根據(jù)患者術(shù)后是否出現(xiàn)不明原因的低熱、乏力、食欲不振、關(guān)節(jié)痛、早搏、期前收縮等癥狀，將患者分為移植穩(wěn)定組（29例）和移植急性排斥反應(yīng)組（7例），其中移植急性排斥反應(yīng)組病例均經(jīng)心肌內(nèi)膜活檢符合心臟移植排斥病理表現(xiàn)；兩組患者在年齡、性別比、原發(fā)疾病、冷熱缺血時(shí)間、免疫抑制方案等方面均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.2 試劑與儀器

EXL800酶標(biāo)儀（美國(guó)Bil－Tek公司生產(chǎn)），人IL－6ELISA試劑盒（深圳欣博盛生物科技有限公司），全自動(dòng)免疫化學(xué)分析儀（美國(guó)雅培ARCHITECTi1600SR）。

1.3 方法

分別收集患者術(shù)前及術(shù)后第1、3、7、14、30天EDTA抗凝血2ml和無抗凝劑血3ml，分離后放置于－80℃凍結(jié)保存。采用酶聯(lián)免疫法（ELISA）測(cè)定IL－6，按試劑盒說明書進(jìn)行操作。采用高相液相色譜－質(zhì)譜法監(jiān)測(cè)血清Fk506濃度。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 18.0軟件進(jìn)行分析，結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x—±s）表示，組間整體分布比較采用秩和非參數(shù)檢驗(yàn)，兩變量間相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)，以雙側(cè)檢驗(yàn)P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 心臟移植受者手術(shù)前后血清IL－6水平的變化

心臟移植患者術(shù)前與健康對(duì)照組血清中IL－6水平無顯著性差異（P＞0.05）；與術(shù)前比較，心臟移植術(shù)后第1天患者血清中IL－6水平顯著升高（z＝－4.16，P＜0.05），術(shù)后第3天患者血清中IL－6低于術(shù)前水平（z＝2.816，P＜0.05），術(shù)后第7天基本回復(fù)至術(shù)前水平。見表1。

表1 心臟移植患者手術(shù)前后IL－6的動(dòng)態(tài)變化

表1 心臟移植患者手術(shù)前后IL－6的動(dòng)態(tài)變化

與術(shù)前比較＊P＞0.05，＊＊P＜0.05

（健康對(duì)照組）術(shù)前術(shù)后1天術(shù)后3天術(shù)后7天術(shù)后14天術(shù)后30天IL－6（pg／ml）9.22±1.79 8.91±1.44 25.95±20.97＊＊6.08±2.72＊＊8.24±4.29＊8.87±4.15＊8.55±3.34＊

2.2 移植急性排斥組發(fā)生排斥反應(yīng)時(shí)IL－6水平比較

移植排斥組患者發(fā)生排斥反應(yīng)時(shí)，血清中IL－6水平明顯高于移植穩(wěn)定組（z＝－3.084，P＜0.05）及術(shù)前（z＝－3.0，P＜0.05）。見表2。

2.3 心臟移植患者術(shù)后FK506藥物水平與IL－6相關(guān)性分析

我們檢測(cè)術(shù)后患者血清中藥物濃度，并將FK506水平與血清中IL－6水平進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)患者血清中FK506濃度與IL－6水平呈明顯的負(fù)相關(guān)（r＝－0.66，P＜0.05），見圖1。

表2 移植排斥組IL－6的變化

圖1 FK506與IL－6的相關(guān)性分析

3 討論

IL－6作為一種多功能的前炎癥細(xì)胞因子，具有廣泛的生物學(xué)功能，在機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)、造血調(diào)控等過程中均發(fā)揮重要作用，能刺激多種細(xì)胞生長(zhǎng)、促進(jìn)細(xì)胞分化和Ig分泌、加速干細(xì)胞急性期蛋白合成等［1］。其過度表達(dá)與心臟移植急性排斥反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)［2－5］，進(jìn)一步研究IL－6的生物學(xué)效應(yīng)，可能對(duì)心臟移植急性排斥反應(yīng)的早期診治提供更廣闊的空間。

本研究結(jié)果顯示：心臟移植患者血清IL－6水平在術(shù)后第1天顯著升高，隨后由于免疫抑制劑的大劑量使用，受者的免疫系統(tǒng)被抑制，術(shù)后第3天血清中IL－6水平明顯低于術(shù)前水平（P＜0.05），之后IL－6逐漸回復(fù)術(shù)前水平并基本穩(wěn)定。而急性移植排斥反應(yīng)組患者血清中IL－6水平明顯高于術(shù)前及移植穩(wěn)定組，這與文獻(xiàn)報(bào)道相符合［2，6，7］，提示IL－6在心臟移植急性排斥反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要的作用。

實(shí)驗(yàn)中我們還發(fā)現(xiàn)：當(dāng)心臟移植患者血清中FK506血藥濃度降低時(shí)，藥物對(duì)機(jī)體免疫功能的抑制強(qiáng)度減弱，血清中IL－6水平會(huì)逐步升高，患者發(fā)生排斥反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增大；隨著血清藥物濃度的提高，IL－6水平會(huì)相應(yīng)降低，病人急性排斥反應(yīng)的臨床癥狀也會(huì)緩解。已有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)通過給心臟移植后的小鼠輸注IL－6mAb中和體內(nèi)IL－6，結(jié)果顯示可顯著抑制小鼠急性排斥反應(yīng)的發(fā)生，移植物存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)；組織病理學(xué)結(jié)果顯示抗IL－6mAb輸注可減輕抑制物結(jié)構(gòu)的破壞，移植物中浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞明顯減少［8，9］。因此，監(jiān)測(cè)同種異體心臟移植受者血清中IL－6水平可預(yù)測(cè)急性排斥反應(yīng)發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，抑制受者體內(nèi)的IL－6的表達(dá)可能是一種有效的治療移植排斥反應(yīng)的措施。

雖然大量動(dòng)物研究表明IL－6在心臟移植排斥反應(yīng)的診治中發(fā)揮重要作用，但在臨床研究中卻很少見，接下來，我們將收集大量的臨床病例，進(jìn)一步研究IL－6在心臟移植排斥中的作用機(jī)理，為臨床上預(yù)防心臟移植急性排斥反應(yīng)的發(fā)生和治療提供有效的依據(jù)。

［1］黃華明，陳愛軍.白細(xì)胞介素6的研究現(xiàn)狀［J］.醫(yī)學(xué)雜志，2010，26（14）：2658.

［2］李敬來，蕭明第.IL－6mRNA在排異反應(yīng)中的動(dòng)態(tài)表達(dá)及其與移植心臟生存時(shí)間的相關(guān)性研究［J］.上海醫(yī)學(xué)，2002，25（1）：5.

［3］李向東.器官移植排斥反應(yīng)監(jiān)測(cè)新進(jìn)展［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2006，21（5）：547.

［4］Diaz JA，Booth AJ，Lu G，et al.Critical role for IL－6in hypertrophy and fibrosis in chronic cardiac allograft rejection［J］.Am J Transplant，2009，9（8）：1773.

［5］Liang Y，Christopher K，F(xiàn)inn PW，et al.Graft produced interleukin－6function as a danger signal and promotes rejection after transplantation［J］.Transplantation，2007，84：771.

［6］Zhao XM，Yeoh TK，Hiebert M，et al.The expre－ssion of acidic fibroblast growth factor（heparin－binding growth factor－1）and cytokine genes in human cardiac allografts and T cells［J］.Transplantation，1993，56：1177.

［7］Normann SJ，Peck AB，Staples ED，et al.Experimental and clinical allogeneic heart transplant rejedtion：correlations between histology and immune reactivity detected by cytokine messenger RNA［J］.J Heart Lung Transplant，1996，15：778.

［8］Booth AJ，Grabauskiene S，Wood SC，et al.IL－6Promotes Cardiac Graft Rejection Mediated By CD4＋Cells［J］.J Immunol，2011，187（11）：5764.

［9］雷 鈞，何 凡，吳 敏，等.抗白介素6單克隆抗體治療延長(zhǎng)小鼠同種心臟移植物存活的實(shí)驗(yàn)研究［J］.華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2010，39（2）：197.

Significance and serum levels of Interleukin－6in patients with acute rejection of heart transplantation

WANG Ping，TU Tong－tao，ZANG Si－si，et al.
（Department of Clinical Laboratory，Union Hospital，Tongji Medical college，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430022，China）

ObjectiveTo study the change and clinical significance of serum IL－6in patients with heart transplantation.Methods Serum IL－6was detected before and post transplantation on day 1，3，7，14，30with ELISA.The level of Serum FK506was measured on and off.Results There were no significant difference existed in the levels of serum IL－6in pre－transplantation patients compared to those of control group respectively（p＞0.05）.After operation，the levels of serum IL－6on day 1in patients were significantly higher，and dropper to the nadir on day 3，then rose to pre－operative values on day 7.These results indicated that the level of FK506was negatively correlated with the level of serum IL－6.Conclusion IL－6may play an important role in the development of post－transplanted rejection of patients，and could be an useful markers to monitor the level of immunosuppressant after cardiac transplantation.

heart transplantation；IL－6；FK506

R654.2

A

2014－09－22）

1007－4287（2015）10－1673－03

湖北省衛(wèi)生廳采供血管理資助項(xiàng)目（CGX2012－3）

＊通訊作者