李建華，張文龍，鮑玉成，商振德，邱南海

（天津市海河醫(yī)院骨科，天津300350）

結(jié)核感染T淋巴細(xì)胞斑點(diǎn)試驗在骨結(jié)核病診斷中的臨床應(yīng)用價值

李建華，張文龍，鮑玉成，商振德，邱南海

（天津市海河醫(yī)院骨科，天津300350）

結(jié)核病是目前全球最常見的傳染性疾病之一，結(jié)核分枝桿菌相關(guān)檢查在各種結(jié)核病確診過程中有著舉足輕重的作用。傳統(tǒng)診斷結(jié)核病主要依賴于結(jié)核菌涂片，經(jīng)抗酸染色然后在顯微鏡下觀察，盡管該方法的特異性較強(qiáng)，但是其敏感性較低，且對某些類型結(jié)核病如骨結(jié)核、中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)核來說標(biāo)本采集難度較大［1－2］，從而使得該方法在臨床上的應(yīng)用受到了極大的限制。隨著研究的深入，諸多新技術(shù)逐步用于結(jié)核病的診斷。本研究旨在探討結(jié)核感染T淋巴細(xì)胞斑點(diǎn)試驗（T－SPOT.TB）在骨結(jié)核病診斷中的臨床應(yīng)用價值，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年6月－2014年12月我院收治的150例骨結(jié)核、15例類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、22例布氏菌病、17例化膿性脊柱骨關(guān)節(jié)感染、18例骨性關(guān)節(jié)炎、23例骨腫瘤，所有患者均符合相應(yīng)的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并完善所有檢查，排除各種原發(fā)性或繼發(fā)性免疫功能缺陷患者。4組患者性別、年齡等一般資料相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 4組患者一般資料的比較

1.2 研究方法

1.2.1 PPD皮試 將0.1ml PPD（北京祥瑞生物制品有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字S10960016，規(guī)格為每1ml含50IU結(jié)核菌素純蛋白衍化物）在研究對象左側(cè)或右側(cè)前臂內(nèi)側(cè)給予皮內(nèi)注射，注射48－72h后對反應(yīng)面積進(jìn)行測量。結(jié)果判斷［3］：硬結(jié)直徑≤5 mm提示（－），硬結(jié)直徑5－9mm提示（＋），硬結(jié)直徑10－19mm提示（＋＋），硬結(jié)直徑≥20mm或者有水泡甚至壞死時提示（＋＋＋）。

1.2.2 抗結(jié)核抗體檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELSIA法），抽取研究對象靜脈血3ml，3 000rpm離心5min分離血清，取血清按試劑盒（成都永安制藥有限公司）說明進(jìn)行抗結(jié)核抗體檢測。結(jié)果判斷：樣本的吸光值／臨界對照品的吸光度值＞1.2為陽性，＜1.0為陰性。

1.2.3 T－SPOT.TB 抽取研究對象靜脈血5ml，肝素抗凝，采用無菌Ficoll淋巴細(xì)胞分離液進(jìn)行單個核淋巴細(xì)胞分離，淋巴細(xì)胞計數(shù)結(jié)束后進(jìn)行TSPOT.TB，試劑盒由Oxford Immunotec Ltd生產(chǎn)。結(jié)果判斷：當(dāng)陰性對照孔斑點(diǎn)數(shù)為0－5時（抗原A孔或抗原B孔斑點(diǎn)數(shù)－陰性對照孔斑點(diǎn)數(shù)）×4≥24為陽性，反之為陰性。當(dāng)陰性對照孔斑點(diǎn)數(shù)≥6時，抗原A孔或抗原B孔斑點(diǎn)數(shù)≥2×陰性對照孔斑點(diǎn)數(shù)為陽性，反之為陰性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，不同診斷方法SPN以及SPE的比較采用配對χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PPD皮試診斷骨結(jié)核的臨床價值分析 PPD皮試診斷骨結(jié)核的SEN、SPE、PPV、NPV、DA分別為59.33%、75.79%、79.46%、54.14%、65.71%，見表2。

表2 PPD皮試診斷骨結(jié)核的臨床價值分析

2.2 抗結(jié)核抗體檢測診斷骨結(jié)核的臨床價值分析抗結(jié)核抗體檢測診斷骨結(jié)核的SEN、SPE、PPV、NPV、DA分別為48.67%、86.32%、84.88%、51.57%、63.27%，見表3。

表3 抗結(jié)核抗體檢測診斷骨結(jié)核的臨床價值分析

2.3 T－SPOT.TB診斷骨結(jié)核的臨床價值分析 TSPOT.TB診斷骨結(jié)核的SEN、SPE、PPV、NPV、DA分別為84.67%、94.74%、96.21%、79.65%、88.57%，見表4。

表4 T－SPOT.TB診斷骨結(jié)核的臨床價值分析

2.4 三種方法診斷骨結(jié)核的性能比較 T－SPOT.TB診斷骨結(jié)核的SEN顯著高于PPD皮試、抗結(jié)核抗體（χ2值分別為8.3493、12.7992，P＜0.05）。TSPOT.TB診斷骨結(jié)核的SPE均顯著高于PPD皮試、抗結(jié)核抗體（χ2值分別為6.3745、5.8311，P＜0.05）。

3 討論

結(jié)核病是一種感染結(jié)核分枝桿菌的傳染性疾病，主要經(jīng)呼吸道吸入病原菌而感染，因此臨床上以肺結(jié)核最為常見。值得注意的是，結(jié)核分枝桿菌感染肺以后可以隨著血液傳播至全身各個組織、器官，進(jìn)而導(dǎo)致機(jī)體其他組織、器官發(fā)生結(jié)核菌感染，如骨結(jié)核、腎結(jié)核、腸結(jié)核等等。

如前所述，結(jié)核分枝桿菌相關(guān)檢查在各種結(jié)核病確診過程中有著舉足輕重的作用。目前臨床上檢測結(jié)核分枝桿菌的主要方法有結(jié)核菌涂片、結(jié)核菌培養(yǎng)、PPD皮試、抗結(jié)核抗體檢測等。與結(jié)核菌涂片一樣，結(jié)核菌培養(yǎng)診斷結(jié)核病的主要優(yōu)點(diǎn)就是SPE強(qiáng)，但是其不足之處除SEN不甚理想、某些類型結(jié)核病患者標(biāo)本采集困難以外，還存在營養(yǎng)要求高、檢測周期長等問題［4，5］，因此在本研究并未選用這兩種方法作為研究方法。

PPD皮試在目前臨床上主要用于結(jié)核病的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查、卡介苗接種效果觀察等。與其他方法相比，PPD皮試的主要優(yōu)點(diǎn)就是對標(biāo)本采集無要求，只要注射部位無損傷即可，但是該方法的不足之處較多，如檢測結(jié)果受患者免疫功能狀態(tài)影響，結(jié)核感染早期、血行播散型肺結(jié)核等重癥結(jié)核等情況結(jié)果呈陰性［6］，這些因素導(dǎo)致PPD皮試診斷結(jié)核病的SEN、SPE均不甚理想。隨著研究的深入，抗結(jié)核抗體檢測逐步應(yīng)用于臨床，該方法只需要采集患者血清標(biāo)本即可進(jìn)行測定，適用于各種類型結(jié)核病的診斷，因此臨床應(yīng)用范圍得到顯著擴(kuò)大。盡管如此，由于交叉免疫反應(yīng)、隱性結(jié)核菌感染、機(jī)體體液免疫缺陷、特異性抗體與結(jié)核抗原形成免疫復(fù)合物、試劑質(zhì)量等因素的存在［7－8］，導(dǎo)致抗結(jié)核抗體檢測診斷結(jié)核病的SEN、SPE仍然有進(jìn)一步提升的空間。

T－SPOT.TB是目前臨床上診斷結(jié)核病的新方法之一，其主要原理就是應(yīng)用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)對患者體內(nèi)是否產(chǎn)生結(jié)核效應(yīng)T淋巴細(xì)胞進(jìn)行檢測，從而對患者是否感染結(jié)核桿菌進(jìn)行判斷［9］。在實際操作過程中，盡管該方法的操作稍顯復(fù)雜，但是本研究顯示其診斷骨結(jié)核的SEN、SPE均顯著高于PPD皮試、抗結(jié)核抗體（均P＜0.05）。分析其原因，TSPOT.TB具有不受患者免疫狀態(tài)影響，并且只對結(jié)核分枝桿菌敏感，與其他類型分枝桿菌無交叉反應(yīng)等特點(diǎn)［10］，從而使得該方法SEN、SPE得到大幅度提高。綜上所述，T－SPOT.TB診斷骨結(jié)核的可靠方法，值得臨床推廣應(yīng)用。

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李建華（1981－），女，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：骨關(guān)節(jié)疾病、骨關(guān)節(jié)結(jié)核。

2015－03－09）

1007－4287（2015）10－1770－03