戴萬(wàn)生，趙聲蘭，朱智蕓，曹冠華，張鵬慧，許兆熙

(云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500)

不同輔料蒸制對(duì)滇黃精化學(xué)成分含量的影響*

戴萬(wàn)生，趙聲蘭，朱智蕓，曹冠華，張鵬慧，許兆熙

(云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500)

目的 研究不同輔料蒸制對(duì)滇黃精化學(xué)成分含量的影響，探討滇黃精蒸制的輔料。方法 采用紫外分光光度法測(cè)定滇黃精不同輔料蒸制(清蒸、酒蒸、黑豆蒸、熟地蒸、蜂蜜蒸、蔓荊蒸)品中還原糖、小分子總糖、多糖和總皂苷的含量，并按藥典方法測(cè)定其浸出物含量，以此綜合評(píng)分比較。結(jié)果 6個(gè)指標(biāo)綜合評(píng)分從大到小依次為：蜂蜜蒸(93.47)>熟地蒸(90.80)>酒蒸(89.86)>清蒸(89.59)>蔓荊蒸(79.67)>黑豆蒸(78.82)>生品(55.27)。結(jié)論 滇黃精蒸制時(shí)應(yīng)優(yōu)先選用蜂蜜、熟地汁和黃酒。

滇黃精；輔料；蒸制；綜合評(píng)價(jià)

黃精為百合科黃精屬植物滇黃精(Polygonatum kingianum Coll.Et Hemsl.)黃精(Polygonatum sibiricum Red.)或多花黃精(Polygonatum cyrtonema Hua.)干燥根莖，根據(jù)其形狀，分別習(xí)稱“大黃精”、“雞頭黃精”、“姜形黃精”。黃精為藥食兩用中藥，味甘，性平，歸脾、肺、腎經(jīng)。具有養(yǎng)陰潤(rùn)肺，補(bǔ)脾益氣，滋腎填精的功能。黃精主要含有多糖、低聚糖、皂苷、氨基酸、黃酮、蒽醌等活性成分，具有廣泛的藥理作用和保健功能，其中黃精多糖具有調(diào)節(jié)免疫、延緩衰老、降血糖、降血脂等藥理作用，黃精小分子糖有增強(qiáng)免的作用，黃精總皂苷具有降血糖、增強(qiáng)免疫、抗腫瘤、改善學(xué)習(xí)記憶等藥理作用[1-2]。黃精生用“刺人咽喉”，故多炮制后食用或藥用，通過(guò)炮制可消除其麻味，減輕對(duì)咽喉的刺激，增強(qiáng)補(bǔ)脾潤(rùn)肺益腎的功效，炮制過(guò)程中常加入一定量的輔料起解毒、增效、影響藥物藥性等作用。目前，主要的炮制方法為酒蒸法(2010版《中國(guó)藥典》收載法)，研究報(bào)道較多，但從歷代文獻(xiàn)和各省、市、自治區(qū)炮制法規(guī)看，應(yīng)用輔料除黃酒外，還有黑豆、蜂蜜、蔓荊子、熟地等多種輔料，其研究鮮有報(bào)道[3-4]。本文以滇黃精為原料，研究加不同輔料蒸制對(duì)其水浸出物、乙醇浸出物、還原糖、多糖、總皂苷等成分的影響，并對(duì)其進(jìn)行綜合評(píng)分比較，以優(yōu)選蒸制滇黃精的輔料，為滇黃精炮制方法和工藝的制定提供參考。

1 儀器和材料

UV-1800PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(翱藝儀器(上海)有限公司)，CP214電子天平(奧豪斯儀器(上海)有限公司)，SK3300型超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)，無(wú)水葡萄糖(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司)，人參皂苷Rbl(南京都萊生物技術(shù)有限公司，批號(hào)RSZGB2P20140712)，其余試劑均為分析純。

黃精(購(gòu)自云南綠生藥業(yè)有限公司，經(jīng)云南中醫(yī)學(xué)院趙榮華教授鑒定為滇黃精Polygonatum kingianum Coll.Et Hemsl.的根莖。)

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 樣品的炮制及制備

2.1.1 生黃精 取黃精片，除去雜質(zhì)，70 ℃干燥，粉碎，過(guò)40目篩，備用。

2.1.2 蒸黃精 取凈黃精片200 g 6份，分別置適宜的容器內(nèi)，加入不同輔料(水、黃酒、蜂蜜、黑豆汁、熟地汁、蔓荊汁，均按凈黃精片20%量加入)及適量水拌勻，浸潤(rùn)過(guò)夜，置蒸制容器內(nèi)蒸24 h，取出，70 ℃干燥，粉碎，過(guò)40目篩，備用。

2.2 浸出物的含量測(cè)定 取粉碎過(guò)篩后的黃精樣品約4 g，精密稱定，按《中國(guó)藥典》2010版一部附錄XA項(xiàng)下熱浸法[5]，用蒸餾水、稀乙醇作溶劑，測(cè)定水溶性浸出、醇溶性浸出物，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3 糖類成分的含量測(cè)定

2.3.1 葡萄糖對(duì)照溶液的配制 取經(jīng)105℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品55.0 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1mL中含無(wú)水葡萄糖1.1mg)。

2.3.2 苯酚溶液的配制[6]精密稱取2.5 g 苯酚，用蒸餾水溶解并定容于50 mL 棕色量瓶中。

2.3.3 DNS 溶液的配制[6]稱取0.650 g 3，5-二硝基水楊酸(DNS)，以50 mL蒸餾水溶解并轉(zhuǎn)移至100 mL棕色量瓶中，加入32.5 mL 的2 mol/L的NaOH 溶液，再加入4.5 g 丙三醇，以蒸餾水定容，即得。

2.3.4 供試品溶液的制備 精密稱取黃精粉末各1.0 g，置250 mL燒瓶中，加80 %乙醇100 mL，水浴回流提取1 h，過(guò)濾，濾渣用80 %乙醇洗2次(每次約10 mL)，合并濾液，揮盡乙醇，轉(zhuǎn)移至250 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻后用于還原糖和小分子總糖含量測(cè)定。

藥渣揮干乙醇后，用100 mL水回流提取1 h，過(guò)濾，殘?jiān)盟炊?，合并濾液，轉(zhuǎn)移至250 mL量瓶中，加水至刻度，用于總多糖的測(cè)定。

2.3.5 還原糖測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密量取1.1 mg/mL葡萄糖對(duì)照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mL，分別置10 mL具塞刻度試管中，加入蒸餾水至4 mL，再分別加入5 mL 的DNS 溶液，混勻后置沸水浴中煮沸6 min，冰水冷卻至室溫，加水至刻度，以空白管為對(duì)照，在540 nm 處測(cè)定吸光度[6-7]。以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸處理，得回歸方程：Y=0.0081X+0.0007(r=0.9995)，結(jié)果表明無(wú)水葡萄糖在22 ～ 132μg·mL-1范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，用于DNS 法測(cè)定還原糖。

2.3.6 總糖、多糖測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密量取1.1mg/mL 的葡萄糖對(duì)照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，分別置于50 mL量瓶中，加水至刻度，然后分別量取上述稀釋后的不同濃度的葡萄糖對(duì)照品溶液1mL于10 mL 具塞刻度試管中，加入蒸餾水至2 mL，混勻，再加入1 mL的5% 苯酚溶液和7 mL的濃硫酸溶液，搖勻，靜置5 min，水浴加熱20 min，冰水冷卻至室溫，以空白管為對(duì)照，在490 nm 測(cè)定吸光度[6-7]。以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸處理，得回歸方程：Y=0.0594X-0.0554(r=0.9995)，結(jié)果表明無(wú)水葡萄糖在2.2 ～ 13.2μg·mL-1范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，用于苯酚-硫酸法測(cè)定總糖、多糖。

2.3.7 樣品的測(cè)定 取滇黃精炮制品，按2.3.4項(xiàng)下方法制成供試品溶液，除生品不稀釋外，分別精密量取供試液1.0 mL稀釋到50 mL，精密量取4 mL，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的方法自“再分別加入5 mL 的DNS 溶液”起操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算還原糖含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

取滇黃精炮制品，按2.3.4項(xiàng)下方法制成供試品溶液，分別精密量取供試液1.0 mL稀釋到50 mL，精密量取1 mL，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的方法自“加入蒸餾水至2 mL”起，測(cè)定吸光度，計(jì)算小分子總糖含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

取滇黃精炮制品，按2.3.4項(xiàng)下方法制成供試品溶液，分別精密量取供試液0.5 mL，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的方法自“加入蒸餾水至2 mL”起操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算多糖含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同輔料炮制黃精糖類成分含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

注：非還原性低聚糖=小分子總糖-還原糖，總糖=小分子總糖+多糖。

2.4 總皂苷含量測(cè)定

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 稱取人參皂苷Rbl標(biāo)準(zhǔn)品11.3 mg于小燒杯中，加甲醇溶解并定容至10 mL，作為標(biāo)準(zhǔn)液。吸取該標(biāo)準(zhǔn)液40，80，120，160，200 μL，置于具塞刻度試管中，揮盡溶劑，加入0.2 mL5%香草醛一冰醋酸溶液(新鮮)，冰浴時(shí)加入0.8 mL高氯酸，搖勻，60 ℃水浴加熱15 min后，冰浴2 min，加入5 mL冰醋酸，搖勻，靜置5 min，于550 nm處測(cè)定吸光值(A)[8]。以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，人參皂苷Rbl的質(zhì)量(μg)為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸處理，得回歸方程：Y=0.0036X+0.0024(r=0.9992)，結(jié)果表明人參皂苷Rbl在45.2～ 226μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.4.2 供試液制備 稱取干燥黃精炮制品粉末1.00 g，加入14倍量水飽和正丁醇，40 ℃超聲提取50 min，提取2次，合并濾液至25 mL量瓶中，加水飽和正丁醇定容，搖勻，備用[9]。

2.4.3 樣品測(cè)定 吸取供試液100 μL，揮干溶劑，按2.4.1顯色，于550 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算總皂苷含量(%)，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.5 數(shù)據(jù)處理及綜合評(píng)分 以滇黃精浸出物、還原糖、小分子總糖、多糖、總皂苷含量為指標(biāo)，采用綜合評(píng)分法評(píng)定。評(píng)分時(shí)以各指標(biāo)的實(shí)驗(yàn)最大值為參照將數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化處理，再根據(jù)各指標(biāo)成分重要性和炮制工藝特性，給予浸出物含量加權(quán)系數(shù)為0.3，糖類成分含量加權(quán)系數(shù)為0.4，總皂苷含量加權(quán)系數(shù)0.3，以行歸一化處理后的數(shù)值加權(quán)求和后，即得綜合評(píng)分，其關(guān)系式：(水浸出物含量/水浸出物含量最大值+醇浸出物含量/醇浸出物含量最大值)/2×30+(還原糖含量/還原糖含量最大值+小分子總糖含量/小分子總糖含量最大值+多糖含量/多糖含量最大值)/3×40+(總皂苷含量/總皂苷含量最大值)×30。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同輔料炮制滇黃精綜合評(píng)分結(jié)果

注：括號(hào)內(nèi)為歸一化處理后數(shù)值。

3 結(jié)果與討論

浸出物含量測(cè)定結(jié)果表明不同輔料蒸制滇黃精水溶性浸出、醇溶性浸出物差異不大，但與生品比較，其增加明顯，說(shuō)明黃精蒸制后能增加有效成分的煎出，從而增強(qiáng)療效。

糖類成分是滇黃精中含量最高的成分，在相同條件下蒸制后，熟地蒸品和蜂蜜蒸品的總糖含量明顯增加，這可能與所用加輔料熟地汁和蜂蜜的糖含量較高有關(guān)，而其他制品與生品對(duì)照，總糖不變或略有增加；蒸制后多糖含量下降，但不同輔料蒸制品之間差別不明顯；還原糖含量增加，非還原性低聚糖含量下降，不同輔料蒸制品之間差別明顯。不同輔料蒸制后多糖、還原糖、非還原性低聚糖之間質(zhì)量比不同，不同炮制品之間是否存在一定的功效差異，有待于的進(jìn)一步深入研究。

甾體皂苷是滇黃精的主要活性成分之一，初步研究表明滇黃精蒸蒸制后總皂苷含量增加，酒蒸>清蒸>熟地蒸、蜂蜜蒸>黑豆蒸>蔓荊蒸，為生品的5～7倍，這可能是滇黃精炮制后補(bǔ)益作用增強(qiáng)的原因之一。

采用多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)，蜜蒸滇黃精得分最高為93.47，其它炮制品依次為：熟地蒸(90.80)>酒蒸(89.86)>清蒸(89.59)>蔓荊蒸(79.67)>黑豆蒸(78.82)>生品(55.27)。從滇黃精有效部位、有效成分及綜合得分考察，蜂蜜為蒸制滇黃精首選輔料，其次為熟地汁、黃酒，但不同輔料蒸制滇黃精方法的優(yōu)劣有待進(jìn)一步綜合其藥性-藥效的研究。

[1]陳興榮，王成軍，李龍星，等.滇黃精的化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2002，13(9)：560-561.

[2]楊云，王爽，馮云霞，等.黃精中小分子糖對(duì)小鼠免疫功能的影響[J].中國(guó)組織工程研究與臨床，2009，13(18)：3447-3450.

[3]鐘凌云，龔千鋒，張的鳳，等.黃精炮制研究現(xiàn)狀分析[J].中藥材，2007，30(12)：1618-1621.

[4]吳建華，張涓，崔於.黃精炮制工藝的研究進(jìn)展[J].川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，28(1)：27-30.

[5]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)中醫(yī)藥科技出版社，2010：288，附錄XA.

[6]張志君，孫偉，李永亮，等.3，5-二硝基水楊酸法聯(lián)合苯酚-濃硫酸法測(cè)定不同產(chǎn)地黃精中多糖含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18(6)：106-109.

[7]藍(lán)松.苯酚-硫酸法測(cè)定黃精多糖含量研究[J].廣東化工，2013，40(18)：132-133.

[8]尤新軍，郭蕊，王琳，等.黃精總皂苷超聲提取工藝研究[J].西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，25(3)：163-166.

[9]秦楓，劉靖，陳玉勇，等.三七總皂苷含量測(cè)定方法及超聲提取工藝研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36(8)：3062-3064.

Effect of Different Excipient Steamed Processes on Polygonatum Chemical Composition

DAI Wan Sheng, ZHAO Sheng-lan, ZHU Zhi-yun, CAO Guan-hua, ZHANG Peng-hui, XU Zhao-xi

(YunnanUniversityofTraditionalMedicine,Kunming650500,Yunnan)

Objective: To study the effect of different excipient steamed processes on Polygonatum chemical composition and to explore its steamed excipients. Methods: UV spectrophotometry was used to determine the contents of sugar, small molecule total sugars, polysaccharides and total saponins processed by different excipient steamed processes (steamed with clear water, wine, black beans, foxglove, honey and vitex trifolia) and the contents of its extractions were measured according to Pharmacopeia. On this account, composite scores were compared. Results: 6 index composite scores were graded in decreasing order: honey steaming (93.47)> foxglove steaming (90.80)> wine steaming (89.86)> clear water steaming (89.59)> vitex trifolia steaming (79.67)> black beans steaming (78.82)> crude product (55.27). Conclusion: Polygonatum should be steamed preferentially with honey, foxglove juice and wine.

Polygonatum, excipient, steaming, comprehensive evaluation

云南中醫(yī)學(xué)院重點(diǎn)學(xué)科資助項(xiàng)目(NO：XK201325)。

戴萬(wàn)生(1967-)，男，碩士研究生，副教授，研究方向：中藥炮制及功能食品研發(fā)，E-mail：daws1967@126.com。

R284.2

A

1007-2349(2015)07-0070-03

2015-03-16)