武 濤，劉文雅，王 爭，王曙東

0 引 言

香卿止痛噴霧劑(簡稱XQ 噴霧劑)是擬按中藥五類研究的新藥，由紅茴香、徐長卿組成，具有止痛、消腫、抗炎等功能，可用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，跌打損傷，濕疹、皮炎、帶狀泡疹等皮膚病的治療［1-3］。紅茴香功能散瘀止痛，祛風(fēng)除濕，用于風(fēng)寒濕痹、關(guān)節(jié)痛、腰腿痛、跌打傷痛等。徐長卿功能祛風(fēng)化濕，止痛止癢，用于風(fēng)濕痹痛、胃痛脹滿、牙痛、腰痛、跌打損傷、蕁麻疹、濕疹等。本研究根據(jù)其功能主治，進(jìn)行了鎮(zhèn)痛、抗炎藥效試驗(yàn)，為研制復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑及其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 藥物與試劑 XQ 噴霧劑(南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科自制，0.1 g/mL，批號:20120802)，云南白藥氣霧劑(85 g/瓶，云南白藥集團(tuán)有限公司，批號:2012006)，角叉菜膠(Sigma 公司，批號:9000-07-1)，二甲苯(分析純，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，批號:050403)。

1.1.2 動(dòng)物 健康雄性SPF 級大鼠，180 ～220 g，60 只，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號:SYXK(蘇)2010-0027;健康SPF 級小鼠，雄性120 只，雌性60 只，18 ～22 g，由南京江寧青龍山動(dòng)物養(yǎng)殖場提供，動(dòng)物合格證號:SCXK(蘇)2010-0026。動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境:溫度(22±2)℃，濕度50%～60%，自由取食飲水，每日補(bǔ)充常規(guī)飼料，飲水為高溫高壓滅菌處理。

1.1.3 儀器 YLS-7B 大鼠足跖容積測量儀(濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司)，YSD-4G 型藥理生理多用儀(安徽蚌埠醫(yī)學(xué)院無線電二廠)，ZH-YLS-3E 型電子鼠尾壓痛儀(淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司)，YLS-Q4 型鼠耳打孔器(濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司)，F(xiàn)A1104N 型電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 XQ 噴霧劑的鎮(zhèn)痛作用試驗(yàn) ①XQ 噴霧劑對電刺激致痛痛閾值的影響，小鼠置多用儀中(設(shè)置參數(shù):連續(xù)B 脈沖、時(shí)間0.5 s、頻率8Hz)，調(diào)節(jié)電壓輸出鈕，記錄小鼠發(fā)出第1 聲嘶叫的電壓值，作為給藥前痛閾值［4-5］。隨機(jī)挑選60 只小鼠，雌雄各半，分成6 組(n=10)，即空白A 組(等體積0.5%CMC-Na 溶液)、云南白藥A 組(5 mL/足/kg)、XQ 噴霧劑低劑量A 組(0.125 g/足/kg)、XQ 噴霧劑中劑量A 組(0.25 g/足/kg)以及XQ 噴霧劑高劑量A 組(0.5 g/足/kg)。用微量注射器將藥物涂抹于小鼠足部(儀器通過足部導(dǎo)電)，5 mL/足/kg，四足均涂上藥物。分別于給藥后15、30 min 測定出現(xiàn)小鼠尖叫的動(dòng)物數(shù)和未尖叫的動(dòng)物數(shù)(即鎮(zhèn)痛動(dòng)物數(shù))，并計(jì)算鎮(zhèn)痛百分率，公式如下:

鎮(zhèn)痛百分率=［(鎮(zhèn)痛動(dòng)物數(shù)/動(dòng)物數(shù))×100%］

電壓由低到高，測定小鼠出現(xiàn)第1 聲尖叫的痛閾值(測2 次，每次間隔1 min，取均值)，計(jì)算Δ痛閾，公式如下:

Δ 痛閾=藥后痛閾值-藥前痛閾值

②XQ 噴霧劑對小鼠尾壓痛痛閾值的影響，小鼠尾置壓痛儀操作臺上，施壓時(shí)以引起小鼠嘶叫的最小壓力值作為痛閾值，連測2 次，取平均值作為對照值［6］。隨機(jī)挑選60 只小鼠，雌雄各半，分成6 組(n=10)，即空白B 組(等體積0.5%CMC-Na 溶液)、云南白藥B 組(5 mL/kg)、XQ 噴霧劑低劑量B組(0.125 g/kg)、XQ 噴霧劑中劑量B 組(0.25 g/kg)、XQ 噴霧劑高劑量B 組(0.5 g/kg)。給藥時(shí)用微量注射器將藥物涂抹于小鼠尾部受壓點(diǎn)，5 mL/kg，測定給藥后15 min、30 min 痛閾值，計(jì)算Δ 痛閾。

1.2.2 XQ 噴霧劑的抗炎作用試驗(yàn) ①對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響，隨機(jī)挑選雄性小鼠，分為6組(n=10)，即空白C 組(等體積0.5%CMC-Na 溶液)、云南白藥C 組(5 mL/kg)、XQ 噴霧劑低劑量C組(0.125 g/kg)、XQ 噴霧劑中劑量C 組(0.25 g/kg)、XQ 噴霧劑高劑量C 組(0.5 g/kg)。給藥時(shí)用微量注射器將藥物涂抹于小鼠左右耳廓，5 mL/kg。耳廓給藥30 min 后，利用微量注射器將0.05 mL 二甲苯分別滴于右耳兩側(cè)，保證所滴位置一致，左耳作對照。按文獻(xiàn)［7］方法求左右耳片重量之差作為腫脹度，與空白C 組比較組間差異。②XQ 噴霧劑對角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹的影響，取雄性大鼠，分為6 組(n=10)，即空白D 組(等體積0.5%CMC-Na溶液)、云南白藥D 組(1 mL/kg)、XQ 噴霧劑低劑量D 組(0.125 g/kg)、XQ 噴霧劑中劑量D 組(0.25 g/kg)、XQ 噴霧劑高劑量D 組(0.5 g/kg)。于右后足踝關(guān)節(jié)處標(biāo)記，利用足跖容積測量儀先測大鼠正常右后足跖體積。利用微量注射器將藥物涂抹于右后足跖部，1 mL/kg［8］。足趾給藥30 min 后，每只大鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜膠0.1 mL，并于給角叉菜膠后30、60、120、240、360 min 再測大鼠右后足跖體積(mL)，并計(jì)算腫脹度，公式如下:

足跖腫脹度=給角叉菜膠后不同時(shí)間足跖體積

-給角叉菜膠前同側(cè)足跖體積

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 18.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，以P ≤0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 XQ 噴霧劑的鎮(zhèn)痛作用試驗(yàn)

2.1.1 XQ 噴霧劑對電刺激致痛痛閾值的影響 與空白A 組比較，XQ 噴霧劑中、高劑量A 組，云南白藥A 組對電刺激致痛痛閾值有顯著的提高作用，在給藥后15 min 和30 min 均能顯著提高小鼠鎮(zhèn)痛百分率(P ＜0.05)。見表1。與云南白藥A 組比較，XQ 噴霧劑中、高劑量A 組致痛痛閾值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。見表2。

表1 XQ 噴霧劑對電刺激鎮(zhèn)痛百分率的影響(n=10)Table 1 Effects of xiangqingzhitong spray for analgesia percentage in electrical stimulation test(n=10)

2.1.2 XQ 噴霧劑對小鼠尾壓痛痛閾值的影響 與空白B 組比較，XQ 噴霧劑高劑量B 組、于給藥后15 min、30 min 均能顯著提高小鼠尾壓痛閾值，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。XQ 噴霧劑高劑量B 組對小鼠尾壓痛閾值高于云南白藥B 組(P ＜0.01)。見表3。

2.2 XQ 噴霧劑的抗炎作用試驗(yàn)

2.2.1 XQ 噴霧劑對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響 XQ 噴霧劑中劑量C 組小鼠耳廓腫脹度［(4.41±4.55)mg］較空白C 組小鼠［(9.15±3.94)mg］減輕(P ＜0.05);云南白藥C 組、XQ 噴霧劑高劑量C 組小鼠耳廓腫脹度［(3.68±2.62)、(3.59±2.25)、(3.62±3.56)mg］較空白C 組小鼠明顯減輕(P ＜0.01)。XQ 噴霧劑低劑量C 組小鼠耳廓腫脹度較空白C 組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。

2.2.2 XQ 噴霧劑對角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹的影響 與空白D 組比較，XQ 噴霧劑高劑量D 組給藥后30 min 可減輕大鼠足跖腫脹度(P ＜0.05);云南白藥D 組于給藥后240 min 可減輕大鼠足跖腫脹度(P ＜0.05)。與云南白藥D 組比較，XQ 噴霧劑中、高劑量D 組對大鼠足跖腫脹度影響差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。見表4。

表2 XQ 噴霧劑對電刺激致痛痛閾值的影響(x±s，n=10)Table 2 Effects of xiangqingzhitong spray for pain threshold in electrical stimulation test，n=10)

表2 XQ 噴霧劑對電刺激致痛痛閾值的影響(x±s，n=10)Table 2 Effects of xiangqingzhitong spray for pain threshold in electrical stimulation test，n=10)

與空白A 組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01

組別 給藥前痛閾值 痛閾值給藥后15 min Δ痛閾 痛閾值給藥后30 min Δ痛閾空白A 組 73.50±12.48 74.50±6.85 1.00±11.25 71.50±10.01 -2.00±17.67云南白藥A 組 69.00±8.76 91.00±14.87 22.00±14.38＊＊ 86.00±15.06 17.00±19.47*XQ 噴霧劑低劑量A 組 63.50±18.11 71.00±16.80 7.50±10.34 72.00±22.01 8.50±22.61 XQ 噴霧劑中劑量A 組 83.00±12.52 102.50±21.74 19.50±19.64* 105.50±22.29 22.50±23.60*XQ 噴霧劑高劑量A 組 66.50±7.84 93.50±21.35 27.00±17.98＊＊ 82.00±10.59 15.50±7.98*

表3 XQ 噴霧劑對小鼠壓痛痛閾值的影響，n=10)Table 3 Effects of xiangqingzhitong spray for pain threshold in tail pain tenderness test，n=10)

表3 XQ 噴霧劑對小鼠壓痛痛閾值的影響，n=10)Table 3 Effects of xiangqingzhitong spray for pain threshold in tail pain tenderness test，n=10)

與空白B 組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與云南白藥B 組比較，#P ＜0.01

組別 給藥前痛閾值 痛閾值給藥后15 min Δ痛閾 痛閾值給藥后30 min Δ痛閾空白B 組 1.42±0.35 1.47±0.16 0.05±0.36 1.55±0.30 0.12±0.20云南白藥B 組 1.55±0.24 1.49±0.20 -0.06±0.40 1.67±0.19 0.12±0.25 XQ 噴霧劑低劑量B 組 1.49±0.08 1.83±0.33 0.34±0.32 1.62±0.14 0.13±0.12 XQ 噴霧劑中劑量B 組 1.62±0.23 1.86±0.23 0.24±0.19 1.81±0.11 0.19±0.27 XQ 噴霧劑高劑量B 組 1.37±0.11 1.94±0.15 0.58±0.17＊＊# 1.85±0.27 0.48±0.24＊＊#

表4 XQ 噴霧劑對大鼠足跖腫脹的影響，n=10)Table 4 Effects of xiangqingzhitong spray for paw edema in rats，n=10)

表4 XQ 噴霧劑對大鼠足跖腫脹的影響，n=10)Table 4 Effects of xiangqingzhitong spray for paw edema in rats，n=10)

與空白D 組比較，*P ＜0.05

組別30 min 60 min給藥后不1同20時(shí) mi間n腫脹度240 min 360 min空白D 組 2.54±1.28 2.42±1.32 2.27±1.73 3.08±1.92 2.30±1.61云南白藥D 組 1.68±0.90 1.87±1.15 1.20±0.56 1.69±0.74* 1.51±0.88 XQ 噴霧劑低劑量D 組 2.21±0.74 1.55±1.23 2.36±1.12 2.57±1.35 2.80±1.19 XQ 噴霧劑中劑量D 組 2.05±0.81 1.88±1.30 1.77±1.01 2.06±1.09 1.66±1.17 XQ 噴霧劑高劑量D 組 1.19±0.94*1.79±0.90 1.85±0.72 1.69±1.32 1.96±1.07

3 討 論

疼痛是機(jī)體受到不良刺激或損害的一種保護(hù)性反應(yīng)，一般認(rèn)為在傷害性刺激作用下，組織釋放各種致痛因子，如H+、K+、組織胺等，刺激痛受體，在游離神經(jīng)末梢產(chǎn)生痛覺傳入沖動(dòng)，沖動(dòng)傳至中樞神經(jīng)系統(tǒng)而產(chǎn)生疼痛反應(yīng)。理論上，阻斷該過程的任一環(huán)節(jié)，均可產(chǎn)生鎮(zhèn)痛效應(yīng)。而炎癥反應(yīng)是多種疾病反應(yīng)的病理表現(xiàn)，是具有血管系統(tǒng)活體組織對損傷因子所發(fā)生的防御反應(yīng)，臨床表現(xiàn)為病變局部的紅、腫、熱、痛和功能障礙以及間或伴有不同程度的全身性反應(yīng)，并且炎癥反應(yīng)和疼痛常常相伴而生，互相影響。

XQ 噴霧劑具有止痛、消腫、抗炎等功能，本制劑中的紅茴香鎮(zhèn)痛活性成分為黃酮類化合物，文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)紅茴香具有改善局部組織的微循環(huán)得、加速滲出液的吸收，故而起到了消腫、止痛、散瘀作用［9］;紅茴香還具有使損傷的局部炎癥消退、組織粘連減輕作用，利于組織損傷的修復(fù)，預(yù)防瘢痕形成［10］。徐長卿鎮(zhèn)痛有效成分主要為丹皮酚，其鎮(zhèn)痛作用與影響腦內(nèi)單胺遞質(zhì)，多巴胺系統(tǒng)與5-羥色胺系統(tǒng)功能有關(guān)，還對局部的微循環(huán)有促進(jìn)作用，可使鼠腸系膜上微循環(huán)中的毛細(xì)血管管徑增粗，血管內(nèi)紅細(xì)胞的流速增快［11］。故我們推測，由兩者組方形成的“XQ 噴霧劑”可能綜合了兩種藥物的作用特點(diǎn)，其鎮(zhèn)痛、抗炎作用大大加強(qiáng)，但實(shí)際的作用機(jī)制仍待深入研究。

上述藥理作用也在本實(shí)驗(yàn)中得到體現(xiàn):XQ 噴霧劑中、高劑量A 組能顯著提高小鼠電刺激痛閾值，高劑量B 組能顯著提高小鼠尾壓痛閾值，表明XQ噴霧劑對不同致痛模型顯示了對抗作用，且其鎮(zhèn)痛作用以大劑量為好，且鎮(zhèn)痛效果與云南白藥相當(dāng)。另外，XQ 噴霧劑對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹及角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹有顯著的抑制作用，提示該藥對動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性炎癥具有一定的抑制效應(yīng)，且中、高劑量XQ 噴霧劑抗藥效果與云南白藥相當(dāng)。綜上所述，XQ 噴霧劑具有明顯的鎮(zhèn)痛抗炎作用，治療針對性強(qiáng)，有較好的開發(fā)前景，本研究結(jié)果為該產(chǎn)品的臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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