吳明霞,劉瑞芳,方小淋
(寧德師范學(xué)院生物系,福建寧德352100)
蘋果酒以蘋果為原料發(fā)酵而成[1],含大量營(yíng)養(yǎng)成分,口味柔和,是一種老少皆宜的飲品,成為蘋果深加工產(chǎn)業(yè)中的寵兒。利用蘋果生產(chǎn)出不同口味、不同系列的蘋果酒,從外觀、營(yíng)養(yǎng)、穩(wěn)定性方面符合消費(fèi)者選擇度,滿足不同消費(fèi)群體的需求,成為今后幾年我國(guó)果酒開發(fā)的主要方向。
我國(guó)大規(guī)模生產(chǎn)蘋果酒起步較晚,正處于發(fā)展階級(jí),技術(shù)水平與發(fā)達(dá)國(guó)家成熟的釀造行業(yè)相比相對(duì)薄弱,存在一些急待解決的問題。其中澄清處理直接關(guān)系到蘋果酒的穩(wěn)定性和貯存時(shí)間,也很大程度上影響蘋果酒的品質(zhì)風(fēng)味,如何獲得理想的澄清效果又不減少其營(yíng)養(yǎng)成分是影響蘋果酒發(fā)展的一個(gè)重要問題,需不斷進(jìn)行探索研究。
采用殼聚糖、皂土、蛋清、果膠酶四種不同單一澄清劑及復(fù)合澄清劑處理蘋果酒,確定最佳澄清劑添加量,并對(duì)其理化指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè),以期獲得合適的澄清劑和維持蘋果酒澄清穩(wěn)定性的方法。
殼聚糖:青島潛光生物工程有限公司;皂土:齊齊哈爾臺(tái)龍食品有限公司;果膠酶:天津市利華酶制劑廠;安琪酵母:安琪酵母股份有限公司;VC:大同市云崗制藥有限公司;考馬斯亮藍(lán)G250:上?;瘜W(xué)試劑站分裝廠。
T6新世紀(jì)紫外可見分光光度計(jì):北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;GR60DA高壓滅菌鍋:致微(廈門)儀器有限公司;PK-DB電熱恒溫水槽:上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;L550臺(tái)式低速離心機(jī):湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司;JYZ-B550九陽榨汁機(jī)。
1.3.1 蘋果酒制作工藝流程
1.3.2 澄清劑的配制
1%殼聚糖:稱取1 g檸檬酸,加入98 mL蒸餾水加熱溶解,再加入1 g殼聚糖,攪拌溶解,配成1%殼聚糖溶液,冷卻備用[2]。
1%皂土:稱取1 g皂土,加入100 mL蒸餾水浸泡24 h,攪拌均勻,皂土吸水膨脹后形成膠體懸浮液備用[3]。
20%蛋清液:取一新鮮雞蛋的蛋清20 mL,加1 g NaCl后用蒸餾水調(diào)勻,定容至100 mL,備用。
1%果膠酶:稱取1 g果膠酶,先用50 mL 40℃溫水溶解后,再加入到50 mL溫水中稀釋,搖勻攪拌,配制成1%的果膠酶溶液,放置1 h~2 h后備用[4]。
1.3.3 單一澄清劑的澄清試驗(yàn)
1.3.3.1 殼聚糖的澄清試驗(yàn)
取蘋果原酒20mL5份于小燒杯中,分別加入1%、2%、3%、4%、5%(體積分?jǐn)?shù))配制好的1%殼聚糖溶液,充分?jǐn)嚢瑁帽ur膜封口,在冷處理(0℃)和非冷處理(20℃)條件下靜置24 h后,取其上清液離心(4 000 r/min,15 min),以蒸餾水為空白,不添加任何澄清劑的蘋果酒為對(duì)照,測(cè)定透光率和吸光值。
1.3.3.2 皂土的澄清試驗(yàn)
取蘋果原酒20 mL 5份于小燒杯中,分別加入2%、4%、6%、8%、10%(體積分?jǐn)?shù))配制好的1%皂土溶液,充分?jǐn)嚢?,用保鮮膜封口,在冷處理(0℃)和非冷處理(20℃)條件下靜置24 h后,取其上清液離心(4 000 r/min,15 min),以蒸餾水為空白,不添加任何澄清劑的蘋果酒為對(duì)照,測(cè)定透光率和吸光值。
1.3.3.3 蛋清的澄清試驗(yàn)
取蘋果原酒20 mL 5份于小燒杯中,分別加入0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%(體積分?jǐn)?shù))配制好的蛋清液,充分?jǐn)嚢?,用保鮮膜封口,在冷處理(0℃)和非冷處理(20℃)條件下靜置24 h后,取其上清液離心(4 000 r/min,15 min),以蒸餾水為空白,不添加任何澄清劑的蘋果酒為對(duì)照,測(cè)定透光率和吸光值。
1.3.3.4 果膠酶的澄清試驗(yàn)
取蘋果原酒20mL5份于小燒杯中,分別加入1%、2%、3%、4%、5%(體積分?jǐn)?shù))配制好的1%果膠酶溶液,充分?jǐn)嚢?,用保鮮膜封口,在冷處理(0℃)和非冷處理(20℃)條件下靜置24 h后,取其上清液離心(4 000 r/min,15 min),以蒸餾水為空白,不添加任何澄清劑的蘋果酒為對(duì)照,測(cè)定透光率和吸光值。
1.3.4 復(fù)合澄清劑的澄清試驗(yàn)
在以上單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,選取澄清效果較好的3種澄清劑進(jìn)行兩兩復(fù)合,按相同比例添加量,對(duì)蘋果酒進(jìn)行復(fù)合澄清處理,以冷處理和非冷處理?xiàng)l件下澄清后的蘋果酒透光率為檢測(cè)指標(biāo)。
1.3.5 蘋果酒非生物穩(wěn)定性試驗(yàn)
1.3.5.1 蛋白質(zhì)穩(wěn)定性試驗(yàn)[5]
1.3.5.2 酒石酸氫鉀穩(wěn)定性試驗(yàn)[5]
1.3.5.3 鐵穩(wěn)定性試驗(yàn)[5]
1.3.5.4 銅穩(wěn)定性試驗(yàn)[5]
1.3.5.5 氧化穩(wěn)定性試驗(yàn)[5]
1.3.6 理化指標(biāo)的檢測(cè)方法
1.3.6.1 透光率T
采用分光光度計(jì)法,以蒸餾水作空白,取澄清分離后的酒液,在波長(zhǎng)720 nm的光波處測(cè)定透光率T[6]。
1.3.6.2 吸光度A
采用分光光度計(jì)法,以蒸餾水作空白,取澄清分離后的酒液,在波長(zhǎng)450 nm的光波處測(cè)定吸光度A[7]。
1.3.6.3 蛋白質(zhì)含量
考馬斯亮蘭G250法[8-9]。
1.3.6.4 總酚含量
福林-肖卡法[10]。
1.3.6.5 酒精度
酒精計(jì)法[11]。
1.3.6.6 殘?zhí)橇?/p>
斐林試劑滴定法[12]。
1.3.6.7 總酸
酸堿中和滴定法[13]。
2.1.1 殼聚糖對(duì)蘋果酒的澄清效果
殼聚糖對(duì)蘋果酒的澄清效果見圖1、圖2。
圖1 殼聚糖添加量對(duì)透光率的影響Fig.1 The content of chitosan effect on light transmittance
圖2 殼聚糖添加量對(duì)吸光值的影響Fig.2 The content of chitosan effect on the absorbance values
由圖1可知,在冷處理和非冷處理?xiàng)l件下,隨著殼聚糖添加量的增加,蘋果酒透光率的變化趨勢(shì)都是先增加后下降。當(dāng)常溫添加量達(dá)4%時(shí),澄清效果最好,透光率高達(dá)99.79%;當(dāng)添加量小于等于3%時(shí),冷處理的效果比非冷處理的效果好。這是因?yàn)闅ぞ厶窃谒嵝跃埔褐行纬烧姾煞肿?,與酒中帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)、果膠等微粒相互作用,使引起酒液混濁的膠形顆粒絮凝沉淀下來。若再增加用量,過量的殼聚糖部分溶解于酒中,帶入新的渾濁,再加上其本身凝膠作用,反而使透光率下降。由圖2中可知,加入殼聚糖澄清劑后,蘋果酒的吸光度明顯降低,說明殼聚糖吸附了酒中的色素,使得酒液色澤變淺。添加量高達(dá)5%時(shí)吸光值的增高,也許是過量的殼聚糖使酒液返渾引起的。因此,殼聚糖最佳添加量為冷處理3%。
2.1.2 皂土對(duì)蘋果酒的澄清效果
皂土對(duì)蘋果酒的澄清效果見圖3、圖4。
圖3 皂土添加量對(duì)透光率的影響Fig.3 The content of bentonite effect on light transmittance
圖4 皂土添加量對(duì)吸光值的影響Fig.4 The content of bentonite effect on the absorbance values
由圖3可知,皂土能使蘋果原酒透光率增大,同時(shí)冷處理比未冷處理的透光率高。常溫處理時(shí),皂土添加量為8%時(shí)透光率最高為98.99%;但隨著添加量的增加,透光率下降,可能是因?yàn)榫浦械牡鞍踪|(zhì)被皂土沉淀完全,過量的皂土懸浮液本身會(huì)引起酒的渾濁。冷處理時(shí),透光率隨添加量增加也緩慢提高,當(dāng)添加量達(dá)到6%時(shí),透光率最高為99.32%。這可能是蘋果酒里含有的蛋白質(zhì)比較多,皂土懸浮液中帶負(fù)電荷的膠體細(xì)粒和酒中帶正電荷的蛋白質(zhì)等物質(zhì)相互作用,產(chǎn)生絮凝沉淀,從而達(dá)到澄清目的。由圖4可知,和原酒相比,皂土澄清后的蘋果酒吸光值明顯下降,表明皂土還可以吸收蘋果酒中的色素。因此,皂土最佳添加量為冷處理的6%。
2.1.3 蛋清對(duì)蘋果酒的澄清效果
蛋清對(duì)蘋果酒的澄清效果見圖5、圖6。
圖5 蛋清液添加量對(duì)透光率的影響Fig.5 The content of egg white effect on light transmittance
圖6 蛋清液添加量對(duì)吸光值的影響Fig.6 The content of egg white effect on the absorbance values
由圖5可知,蛋清冷處理的澄清效果明顯優(yōu)于未冷處理,透光率都在97.5%以上。冷處理中,在添加量為2%時(shí),蛋清溶液透光率升至98.92%,比原酒透光率提高3.89%,而未冷處理時(shí),最佳蛋清添加量為1.5%,透光率97.01%,這可能是因?yàn)槔涮幚硎拱l(fā)酵后酒中殘留的蛋白質(zhì)、死酵母、果膠等物質(zhì)加速沉淀使透光率升高,同時(shí)能與蘋果酒中的酚類物質(zhì)結(jié)合,吸附酒中混濁微粒使其成為小片狀物而被除去,因而透光率增高。當(dāng)添加量再增大,透光率有下降的趨勢(shì),原因可能是吸附達(dá)到飽和狀態(tài)后,酒液中游離清蛋白增加影響透光率。由圖6可知,冷處理的吸光值比未冷處理的吸光值低,說明冷處理有利于色素析出,能夠改善酒體的色澤。因而,蛋清液的最佳添加量為冷處理的2%。
2.1.4 果膠酶的澄清效果
果膠酶對(duì)蘋果酒的澄清效果見圖7、圖8。
圖7 果膠酶添加量對(duì)透光率的影響Fig.7 The content of pectinase effect on light transmittance
圖8 果膠酶添加量對(duì)吸光值的影響Fig.8 The content of pectinase effect on the absorbance values
由圖7可知,用果膠酶處理的蘋果酒,澄清效果不理想,最高的透光率才97.89%。當(dāng)果膠酶添加量為2%時(shí),冷處理和常溫處理的透光率都達(dá)到最高值。果膠酶添加量小于等于2%時(shí),果酒透光率迅速提高,原因可能是果膠酶能使不溶性大分子物質(zhì)和果肉微粒失去膠體保護(hù)作用而發(fā)生共聚沉淀,達(dá)到澄清目的。但當(dāng)添加量大于2%時(shí),透光率開始下降,也許是果膠降解所得的低分子物質(zhì)改變了酒的pH,從而影響果膠酶的效用。由圖8可知,冷處理的吸光度明顯小于未冷處理吸光度,說明冷處理的果膠酶可以吸附酒中的色素,使得酒的色澤相對(duì)變淺。因此果膠酶添加量2%為最適添加量。
2.1.5 單一澄清劑的比較
4種單一澄清劑對(duì)蘋果酒的澄清效果見圖9。
圖9 4種單一澄清劑對(duì)透光率的影響Fig.9 Four single clarifying agent's influence on light transmittance
由圖9可知,4種澄清劑都一定程度地提高了蘋果酒的透光率,其中殼聚糖的澄清效果最好,皂土次之,果膠酶最差。從成本上考慮,殼聚糖雖然澄清效果很好,但是成本高;皂土價(jià)格便宜,但是配制麻煩。因此可以選擇效果好的3種澄清劑進(jìn)行兩兩復(fù)合試驗(yàn),以期得到成本低、澄清好、用量少的新型復(fù)合澄清劑。
2.2.1 同比例添加量的3種復(fù)合澄清劑澄清效果
根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果分析,殼聚糖和皂土單獨(dú)使用時(shí)有較好的澄清效果,結(jié)合成本的考慮,選用殼聚糖、皂土和蛋清3種澄清劑復(fù)合澄清使用,以達(dá)到互相補(bǔ)充提高澄清效果的作用見表1。
表1 復(fù)合澄清劑添加量對(duì)透光率的影響Table 1 The amount of compound clarifying agent influence on light transmittance
由表1可知,冷處理可加速蘋果酒的澄清。冷處理時(shí),殼聚糖-皂土的透光率最高,達(dá)到99.79%,高于皂土單一澄清劑的最佳透光率。雖然低于殼聚糖冷處理時(shí)3%添加量的透光率(為99.90%),不過殼聚糖-皂土復(fù)合澄清劑可以減少殼聚糖添加量,降低了成本而又能達(dá)到良好的澄清效果。未冷處理時(shí),殼聚糖-蛋清復(fù)合澄清劑比蛋清澄清效果好,但是比殼聚糖澄清效果差,可能是殼聚糖和蛋清在發(fā)生吸附和電性中和作用時(shí)相互影響的原因。因此殼聚糖-皂土復(fù)合澄清劑為最佳復(fù)合澄清劑。
2.2.2 殼聚糖-皂土復(fù)合澄清劑澄清效果
殼聚糖-皂土復(fù)合澄清劑對(duì)蘋果酒透光率的影響見表2。
表2 殼聚糖-皂土復(fù)合澄清劑對(duì)透光率的影響Table 2 The compound clarifying agent of Chitosan-bentonite effect on light transmittance
由表2可知,當(dāng)添加殼聚糖1%-皂土3%時(shí),透光率最高,冷處理時(shí)為99.88%,未冷處理時(shí)為99.56%,比未冷處理的單一澄清效果都好。說明皂土帶負(fù)電的膠體微粒有效地吸附了帶正電荷的混濁物,而殼聚糖形成帶正電荷分子沉淀酒體帶負(fù)電荷的混濁顆粒,與皂土互補(bǔ)作用,因而在合適添加量下可以達(dá)到比單一澄清劑更好的效果。另外,冷處理對(duì)于澄清度的提高具有顯著的作用,可以加速混濁物質(zhì)的凝聚沉淀,從而使酒體更加清澈透明。同時(shí),添加殼聚糖1%-皂土5%比添加殼聚糖1%-皂土3%的澄清效果差,這是因?yàn)樵硗恋拇嬖谑固O果酒出現(xiàn)返渾。
此外,采用不同添加比例的殼聚糖-皂土-蛋清復(fù)合澄清劑的澄清試驗(yàn),透光率較原酒有一定提高,但是遠(yuǎn)不及單一澄清劑和兩種澄清劑復(fù)合的效果,這可能是因?yàn)?種澄清劑將酒體變成更為復(fù)雜的膠體溶液,反而嚴(yán)重影響絮凝渾濁成分,因而對(duì)3種澄清劑復(fù)合不進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
為防止蘋果酒的澄清試驗(yàn)對(duì)蘋果酒成分的影響,測(cè)定蘋果酒澄清后的酒精度、殘?zhí)?、總酸等基本指?biāo)結(jié)果見表3。
表3 不同澄清劑澄清處理對(duì)蘋果酒基本指標(biāo)的影響Table 3 Different clarifying agent clarify deals effect on basic indicators of cider
續(xù)表3 不同澄清劑澄清處理對(duì)蘋果酒基本指標(biāo)的影響Continue table 3 Different clarifying agent clarify deals effect on basic indicators of cider
由表3可知,澄清劑處理后的蘋果酒的酒度、總糖和總酸基本變化不大,保持了蘋果原酒的風(fēng)味。試驗(yàn)得出的含酸量為2.4 g/L~2.5 g/L,符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。添加了殼聚糖的蘋果酒,其總酸含量有所增加,可能是因?yàn)榕渲茪ぞ厶菚r(shí)有用檸檬酸處理過,但不會(huì)影響蘋果酒的風(fēng)味。果膠酶處理蘋果酒的含酸量比有少量提高,這可能是因?yàn)楣z酶在軟化果酒中的果膠質(zhì)將其分解為半乳糖醛酸和果膠酸。經(jīng)澄清劑處理后的蘋果酒,糖量變化不大,其中殼聚糖的殘?zhí)橇繒?huì)高一些,可能和殼聚糖本質(zhì)是氨基葡萄糖的直鏈多聚糖有關(guān)。因此,可以采用澄清劑澄清蘋果酒不會(huì)影響果酒的風(fēng)味。
研究[14]證明,用果實(shí)釀造而成的酒品中會(huì)含有較多的蛋白質(zhì)和多酚類物質(zhì),在一定條件下,多酚類物質(zhì)會(huì)與蛋白質(zhì)形成絡(luò)合物而沉淀,從而引起非生物性渾濁,嚴(yán)重影響蘋果酒色澤及風(fēng)味。研究不同澄清劑在冷處理?xiàng)l件下降酚及降蛋白效果見表4。
表4 不同澄清劑對(duì)蘋果酒的降酚及降蛋白效果Table 4 Different clarifying agent of the amount of phenol and protein reduction effect of cider
由表4可知,澄清劑的添加都能使酒中的酚類物質(zhì)含量比原酒有所降低,也降低了果酒的蛋白質(zhì)含量。其中,殼聚糖的降蛋白效果最為顯著,從處理前的290 mg/L下降到69 mg/L,而蛋清的降蛋白效果最差。這可能是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)的下降與澄清劑的吸附作用有關(guān)。皂土的降酚效果最好,表明皂土吸附酚類物質(zhì)的作用比吸附蛋白質(zhì)要強(qiáng)。而殼聚糖分子鏈上的羥基和氨基官能團(tuán),對(duì)蛋白質(zhì)的強(qiáng)結(jié)合作用大于對(duì)酚類物質(zhì)的作用。
蘋果酒穩(wěn)定性是其保持品質(zhì)的關(guān)鍵性質(zhì)。因此,需考察澄清劑對(duì)蘋果酒的非生物穩(wěn)定性的作用,見表5。
表5 蘋果酒的穩(wěn)定性Table 5 The stability test result of cider
由表5可知,單一澄清劑和復(fù)合澄清劑處理過的蘋果酒的非生物穩(wěn)定性各項(xiàng)結(jié)果均呈陰性。酒石酸氫鉀表現(xiàn)穩(wěn)定,是因?yàn)樘O果酒中的有機(jī)酸為蘋果酸,酒石酸含量較低;鐵、銅穩(wěn)定性試驗(yàn)呈陰性,說明發(fā)酵過程中使用玻璃瓶,起到了防止鐵性破敗和銅性破敗的作用,氧化穩(wěn)定性試驗(yàn)呈陰性,表明酒液中的多酚類物質(zhì)被澄清劑吸附減少,使被氧化聚合改變結(jié)構(gòu)而絮凝析出,同時(shí)還可以說明在原料預(yù)處理中添加VC不但起到了護(hù)色作用,還起到了防止蘋果酒發(fā)生氧化的效果。皂土可以吸附沉淀鐵離子,提高抗鐵破敗的能力,這些物質(zhì)的減少提高了蘋果酒的穩(wěn)定性。因此,添加澄清劑能提高蘋果酒非生物穩(wěn)定性。
1)單一澄清劑
殼聚糖、皂土、蛋清有良好的澄清效果,其中殼聚糖的澄清效果最理想,添加量為3%并經(jīng)過冷處理時(shí),透光率可達(dá)到99.90%,果膠酶效果最差。經(jīng)過澄清處理后的蘋果酒理化指標(biāo)變化不大。
2)復(fù)合澄清劑
復(fù)合澄清劑的澄清效果殼聚糖-皂土復(fù)合澄清劑澄清效果最好,能優(yōu)于單一澄清劑,最佳添加量比例為殼聚糖1%~皂土3%。這種復(fù)合澄清劑既節(jié)省了成本,又能達(dá)到好的澄清效果,適合生產(chǎn)中使用。經(jīng)復(fù)合澄清劑處理后的蘋果酒的理化指標(biāo)變化不大,果酒顏色變透明,有利于蘋果酒的穩(wěn)定與保存。
3)非生物穩(wěn)定性
殼聚糖降蛋白效果最好,皂土的降酚效果最好。澄清后的蘋果酒蛋白質(zhì)、酒石酸氫鉀、鐵、銅以及氧化穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果均呈陰性,表明單一和復(fù)合澄清劑能提高蘋果酒的非生物穩(wěn)定性。另外,冷處理有助于澄清和吸附色素,其澄清效果明顯優(yōu)于未冷處理。
[1] 阮仕立,李華.蘋果酒-極具潛力的酒中新貴[J].中國(guó)酒,2000(4):54-55
[2] 吳長(zhǎng)青.殼聚糖在果汁澄清工藝上的應(yīng)用[J].飲料工業(yè),2001,4(3):9-10
[3] 彭德華,王作仁.果酒渾濁的克星—皂土及其應(yīng)用[J].釀酒,1994(6):5-10
[4] 蔡薈梅,侯如燕,宛志滬.果膠酶澄清西洋參果酒的影響因素與效果評(píng)價(jià)[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2008,34(11):86-90
[5] 范艷麗,陳彥霖.不同澄清劑對(duì)枸杞酒的澄清效果及非生物穩(wěn)定性的影響[J].中國(guó)釀造,2008(18):27-29
[6] 吳翔,祝穎,吳光忠.刺梨發(fā)酵酒(原酒)澄清劑及澄清方法的篩選[J].釀酒,2003,30(6):41-44
[7] Elena Roura,Cristina Andrés-Lacueva,Ramon Estruch,et al.Total Polyphenol Intake Estimated by a Modified Folin-Ciocalteu Assay of Urine[J].ClinicalChemistry,2006(52):749-752
[8] 黃淑霞,余俊紅,史緩英,等.考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定啤酒中的高分子量蛋白質(zhì)[J].啤酒科技,2006(8):59-62
[9] 郭敏亮,姜涌明.考馬斯亮藍(lán)顯色液組分對(duì)蛋白質(zhì)測(cè)定的影響[J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展,1996,23(6):558-561
[10]管建良.啤酒中多酚物質(zhì)的來源、作用、變化及其控制[J].啤酒科技,2001(10):8-10
[11]中華人民共和國(guó)質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局,中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 15038-2006,葡萄酒、果酒通用分析方法[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2006
[12]朱寶鋪.葡萄酒工業(yè)手冊(cè)[M].北京:中國(guó)輕工業(yè)出版社,1995:33-39
[13]柯以侃,董慧茹.分析化學(xué)手冊(cè)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,1998:21-23
[14]錢中華,朱永利.應(yīng)用魚膠澄清劑提高啤酒非生物穩(wěn)定性的研究[J].啤酒科技,2003(1):37