吳秋波
(內(nèi)蒙古化工職業(yè)學(xué)院,內(nèi)蒙古呼和浩特010010)
西瓜(Watermelon)在全世界廣泛種植,尤其我國是西瓜栽培面積最大的國家[1]。但西瓜種植的季節(jié)性強,集中上市難以儲存,每年損失嚴(yán)重。將西瓜進(jìn)行深加工從而增加附加值是今后發(fā)展必然趨勢[2]。食用天然色素來源于天然植物的根、莖、葉、花、果實和動物、微生物等,資源非常豐富而且最大的優(yōu)點就是安全性高。食用全天然原料的產(chǎn)品必將成為今后食品消費的主流[3]。西瓜中富含番茄紅素,西瓜果實中番茄紅素鮮重平均含量為4.87 mg/100 g,而鮮食番茄果實中的番茄紅素鮮重平均含量為3.1 mg/100 g,可見西瓜果實中番茄紅素的含量超過番茄[4-5]。常規(guī)的提取法存在實驗設(shè)備復(fù)雜、不便操作、提取時間長、產(chǎn)率低、需加熱等缺點。與常規(guī)的提取法相比,超聲輔助提取法具有實驗設(shè)備簡單、操作方便、提取時間短、產(chǎn)率高、無需加熱等優(yōu)點,極大的節(jié)省了時間,節(jié)省了溶劑,避免了溫度過高使有效成分受熱分解或改變結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。本試驗采用超聲波震蕩方法進(jìn)行西瓜中番茄紅素的提取工藝研究[6-7]。
超聲波清洗器(SE-600);打漿機(jī):飛利浦公司;真空干燥機(jī):美國奧立龍公司;紫外分光光度計(UV-240Graphtcor):日本日立公司;高速冷凍離心機(jī)(CR20B2型):日本日立公司。
試劑:乙酸乙酯。
西瓜(京欣一號):北京市農(nóng)林科學(xué)院蔬菜研究中心。
將植物材料和提取溶劑放入超聲波發(fā)生器中,在超聲波的作用下,原料細(xì)胞部分被破壞,有效成分可很容易地擴(kuò)散到提取液中,加之超聲波振蕩也可使原料顆粒不停運動,并使浸提溫度升高,有利于擴(kuò)散,提高浸提效率。
番茄紅素在不同的有機(jī)溶劑里均有類似的吸收峰,番茄紅素最大吸收峰的波長均為472 nm~484 nm,雖然在較短波區(qū)和較長波區(qū)的吸收也很強,但比最高峰弱,所以人們經(jīng)常將樣品溶解在有機(jī)溶劑中,在最大吸收波長下,用分光光度計測定溶液的吸光度,以此來表征番茄紅素的濃度,用摩爾消光系數(shù)來計算番茄紅素含量,此法不需要昂貴的番茄紅素標(biāo)準(zhǔn)品,而且操作簡便,適宜番茄紅素粗提階段的濃度測定。
將提取樣品稀釋至一定容積后,在350 nm~570 nm下,進(jìn)行掃描,測472 nm處的吸收值。
番茄紅素含量/(mg/100 g)=A×B×V×10÷3 450M
式中:A為吸光值;B為稀釋倍數(shù);V為稀釋后容積,mL;M 為樣品質(zhì)量,g。
選用的西瓜品種為京欣一號,以1∶10(g/mL)的固液比在35℃提取20 min,472 nm處測定吸收值,得出京欣一號品種的西瓜番茄紅素平均含量為3.75mg/100g。
西瓜去籽取瓤→果肉打漿→紗布過濾→4 000 r/min離心15 min→沉淀真空干燥→添加溶劑(乙酸乙酯)[8-9]→超聲波清洗儀中浸提→提取液
由于儀器本身限制,選用的超聲強度最大為3W/cm2。因此超聲強度選擇 2、2.5、3 W/cm2。
理論上隨著提取溶液量的加大,提取率也逐漸升高。但考慮到產(chǎn)品的經(jīng)濟(jì)效益及溶劑回收問題,正交試驗選用固液比為 1 ∶5、1 ∶6、1 ∶7(g/mL)3 個水平。
最初起始溫度為室溫20℃,過程中測得每5 min后儀器內(nèi)溫度會自動上升5℃,所以20 min后即達(dá)到40℃。番茄紅素在高溫下會降解,所以溫度控制在40℃以下。試驗溫度設(shè)為35℃以內(nèi),即提取時間設(shè)定為5、10、15 min。
根據(jù)單因素試驗確定的條件范圍,設(shè)計三因素三水平正交試驗。
單因素彈度試驗見表1、表2、表3。
超聲為 2W/cm2時,固液比分別為 1∶5、1∶6、1∶7(g/mL)時,提取率較高的為提取時間為15min的79.62%。
超聲強度為2.5W/cm2時,固液比分別為1∶5、1∶6、1∶7(g/mL)時,提取率較高的為提取時間為15 min的95.70%。
超聲強度為3 W/cm2時,固液比分別為1∶5、1∶6、1∶7(g/mL)時,提取率較高的為提取時間為15 min的98.23%。
表1 超聲為2 W/cm2時各提取率Table 1 Ratio of extraction on ultrasonic intensity of 2 W/cm2
表2 超聲為2.5 W/cm2時各提取率Table 2 Ratio of extraction on ultrasonic intensity of 2.5 W/cm2
表3 超聲為3W/cm2時各提取率Table 3 Ratio of extraction on ultrasonic intensity of 3 W/cm2
超聲強度、固液比、超聲時間均對番茄紅素的提取有一定影響。根據(jù)單因素試驗結(jié)果,選擇合理的因素水平進(jìn)行正交試驗,以確定最佳的提取條件,正交試驗因素水平見表4。試驗結(jié)果見表5。
表4 超聲提取西瓜番茄紅素L9(33)正交試驗因素水平Table 4 Ultrasonic extraction of watermelon lycopene L9(33)orthogonal experiment factors level
表5 正交試驗結(jié)果Table 5 Results of orthogonal experiments
續(xù)表5 正交試驗結(jié)果Continue table 5 Results of orthogonal experiments
通過正交設(shè)計法對超聲波輔助提取西瓜中番茄紅素的最優(yōu)條件進(jìn)行了分析,由極差分析可知,各因素對番茄紅素提取率的影響,主次順序依次為為C>A>B,即時間>超聲強度>固液比。最佳水平的組合為A3B3C3,即超聲強度為 3 W/cm2、固液比為 1 ∶7(g/mL)、提取時間為15 min。按此最佳的條件進(jìn)行驗證試驗,測得番茄紅素相對提取率為98.23%,由此可確定A3B3C3為最優(yōu)組合。
采用超聲輔助提取法進(jìn)行西瓜中的番茄紅素提取,對各因素采用正交試驗進(jìn)行了優(yōu)化,結(jié)果表明,時間是影響提取率的一個重要影響因素,其次為超聲強度和固液比。但超聲時間過長,儀器自動升溫會影響番茄紅素的穩(wěn)定性,因此提取時間控制為15 min以內(nèi)。超聲提取西瓜中番茄紅素的最佳條件為:超聲強度3W/cm2、固液比為 1 ∶7(g/mL)、提取時間為 15 min。在最佳條件下,超聲提取法提取番茄紅素的相對提取率為98.23%。
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