阮麗萍等

【摘 要】目的：觀察了解膝骨關(guān)節(jié)炎患者血清免疫球蛋白亞型的變化及其影響因素。方法：選取膝骨關(guān)節(jié)炎患者60例（膝骨關(guān)節(jié)炎組）及健康體檢者20例（正常對(duì)照組），采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)膝骨關(guān)節(jié)炎患者血清IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，并與年齡、病程、膝骨關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重程度指數(shù)（Lequesne MG）及紅細(xì)胞沉降率、超敏C-反應(yīng)蛋白等實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果：①膝骨關(guān)節(jié)炎患者血清IgG1、IgG2、IgG3水平較正常對(duì)照組升高（P < 0.05）；②相關(guān)性分析示，膝骨關(guān)節(jié)炎患者免疫球蛋白亞型與病程、年齡無(wú)明顯相關(guān)性；IgG1、IgG3、IgG4與癥狀量化積分呈正相關(guān)（P < 0.05或P < 0.01），IgG1、IgG4與Lequesne MG呈正相關(guān)（P < 0.05）；IgG1與IgA、IgM呈正相關(guān)（P < 0.05），IgG2與超敏C-反應(yīng)蛋白、IgM呈正相關(guān)（P < 0.01或P < 0.05），IgG4與IgM呈正相關(guān)（P < 0.01）。結(jié)論：免疫球蛋白亞型在膝骨關(guān)節(jié)炎患者血清中表達(dá)升高，免疫球蛋白的表達(dá)失調(diào)參與了膝骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病過(guò)程。

【關(guān)鍵詞】 骨關(guān)節(jié)炎，膝；免疫球蛋白亞型；血清；相關(guān)性分析

doi：10.3969/j.issn.2095-4174.2015.07.002

Changes of Immunoglobulin Subtypes in Patients with Knee Osteoarthritis and Correlation Analysis

RUAN Li-ping，LIU Jian，WAN Lei，WANG Ya-li，YE Wen-fang

【ABSTRACT】Objective：To observe the changes of immunoglobulin subtypes in patients with knee osteoarthritis and their influence factors.Methods：60 cases of knee osteoarthritis（the knee osteoarthritis group）and 20 healthy persons（the normal control group）were chosen，using Enzyme Linked Immunosorbent Assay（ELISA）to detect IgG1，IgG2，IgG3 and IgG4 and analyze their correlation with age，severe degree index （Lequesne MG），erythrocyte sedimentation rate and supersensitive C-reactive protein.Results：①Compared with the normal control group，levels of IgG1，IgG2 and IgG3 in patients with knee osteoarthritis increased（P < 0.05）；

②Correlation analysis showed that the immunoglobulin subtypes in patients with knee osteoarthritis had no significant correlation with the course of disease and age.IgG1，IgG3 and IgG4 were positively correlated with the quantifying score of symptom（P < 0.05 or P < 0.01），and IgG1 and IgG4 was positively correlated with Lequesne MG（P < 0.05）；IgG1 was positively correlated with IgA and IgM（P < 0.05） and IgG2 was positively correlated with supersensitive C-reactive protein and IgM（P < 0.01，P < 0.05），and IgG4 was positively correlated with IgM（P < 0.01）.Conclusion：The expression of immunoglobulin increased in patients with knee osteoarthritis，and its dysfunction was involved in the pathogenesis.

【Keywords】 osteoarthritis，knee；

immunoglobulin subtypes；serum；correlation analysis

骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）是一種最常見(jiàn)的關(guān)節(jié)疾病，全球約有3.35億患者，而中國(guó)患者總數(shù)已超過(guò)1.5億[1]，OA的核心病變是關(guān)節(jié)軟骨退變。在40歲以上人群中，膝骨關(guān)節(jié)炎（knee osteoarthritis，KOA）總患病率為15.6%[2]。

目前研究認(rèn)為，OA是力學(xué)與生物學(xué)因素共同作用的結(jié)果，主要涉及的機(jī)制是關(guān)節(jié)軟骨、細(xì)胞外基質(zhì)、軟骨下骨的合成和降解的紊亂以及全身及局部的免疫反應(yīng)[3-4]。這個(gè)過(guò)程涉及到全身及局部的體液免疫和細(xì)胞免疫[5-6]。免疫球蛋

白G（IgG）在臨床上有一定的價(jià)值，其升高與病程和疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)。既往研究也發(fā)現(xiàn)，IgG在OA中有升高的趨勢(shì)，且與部分炎癥指標(biāo)及抗體存在一定的相關(guān)性，表明體液免疫參與了OA的發(fā)病過(guò)程。本文旨在通過(guò)觀察OA患者免疫球蛋白亞型的表達(dá)以及外周血免疫球蛋白及紅細(xì)胞沉降率（ESR）等其他炎癥指標(biāo)的表達(dá)并進(jìn)行相關(guān)性分析，從而初步探討免疫球蛋白亞型在OA發(fā)病中的

機(jī)制。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2014年1月至2014年8月在安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科就診的

住院KOA患者60例，男18例，女42例；年齡40～75歲，平均（60.26±11.21）歲；病程0.1～30年，

平均（6.70±5.43）年。同時(shí)期體檢中心的健康體檢者20例為正常對(duì)照組，男6例，女14例；年齡42～73歲，平均（58.34±13.52）歲。兩組在性別、年齡等方面比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照2003年中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)分會(huì)起草的《骨關(guān)節(jié)炎診療指南（草案）》診斷

標(biāo)準(zhǔn)[7]。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) ①符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)；②患者均簽署知情同意書(shū)。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) ①合并有造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病的患者；②合并有類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或其他骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)疾病的患者；③年齡 < 40歲，> 75歲的患者；④妊娠或哺乳期婦女；⑤精神病患者或不能配合治療的患者；⑥研究者認(rèn)為其他不宜進(jìn)行此項(xiàng)臨床試驗(yàn)的受試者。

1.5 試驗(yàn)材料 人免疫球蛋白G1（IgG1）、人免疫球蛋白G2（IgG2）、人免疫球蛋白G3（IgG3）、人免疫球蛋白G4（IgG4）（批號(hào)：E-13085、E-

13086、E-13087、E-11731）。

1.6 設(shè) 備 酶標(biāo)儀（深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司，RT6000）；漩渦混合器（其林貝爾儀器制造公司，G-L88B）；移液器0.5～10 ?L、200 ?L、100 ?L（eppendorf）；排槍50～300 ?L（eppendorf）；電熱恒溫箱（上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司，DNP-9052BS-Ⅲ）；日立7060型全自動(dòng)生化分析儀。

2 方 法

2.1 采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)IgG1、IgG2、IgG3、IgG4 具體流程如下：①向已包被有特異抗體的塑料板凹孔內(nèi)加50 ?L血清；②加50 ?L生物素標(biāo)記的第二抗體，室溫下孵育1～2 h，

用洗板機(jī)洗3次；③加100 ?L鏈親合素標(biāo)記的辣根過(guò)氧化物酶，室溫下孵育0.5～1 h，用洗板機(jī)洗

3次；④加100 ?L終止液，室溫下孵育0.5～1 h；

⑤用酶標(biāo)儀測(cè)量光密度，換算為抗原的含量。

2.2 超敏C-反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、ESR測(cè)定 hs-CRP采用日立7060型全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)定；ESR采用魏氏法測(cè)定。

2.3 KOA嚴(yán)重程度指數(shù)（Lequesne MG）[8] 評(píng)分分組原則（輕度1～4分、中度5～7分、重度8分以上），分值越高，表示病情越重。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，正態(tài)性檢驗(yàn)不符合條件資料采用秩和檢驗(yàn)，指標(biāo)間相關(guān)性采用Spearman分析。以

P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 KOA患者免疫球蛋白亞型的變化 與正常對(duì)照組比較，KOA組患者IgG1、IgG2、IgG3水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），IgG4水平亦升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見(jiàn)表1。

3.2 KOA患者免疫球蛋白亞型與癥狀體征、積分之間的關(guān)系 KOA患者免疫球蛋白亞型與病程、年齡無(wú)明顯相關(guān)性；IgG1、IgG3、IgG4與癥狀量化積分呈正相關(guān)（P < 0.05或P < 0.01），IgG1、IgG4與Lequesne MG呈正相關(guān)（P < 0.05），IgG1與IgA、IgM呈正相關(guān)（P < 0.05），IgG2與hs-CRP、

IgM呈正相關(guān)（P < 0.01或P < 0.05），IgG3與IgA、IgM、IgG、ESR、hs-CRP無(wú)明顯相關(guān)性，IgG4與IgM呈正相關(guān)（P < 0.01）。見(jiàn)表2。

3.3 KOA患者免疫球蛋白亞型與生活質(zhì)量積分之間的關(guān)系 相關(guān)性分析顯示，IgG1與生理職能（RP）、情感職能（RE）、社會(huì)功能（SF）呈負(fù)相關(guān)（P < 0.05），IgG2與總體健康（GH）、精力（VT）負(fù)相關(guān)（P < 0.05），IgG3與各維度無(wú)明顯相關(guān)性，IgG4與情感職能（RE）、軀體疼痛（BP）呈正相關(guān)（P < 0.05）。見(jiàn)表3。

4 討 論

本研究結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，KOA患者血清IgG1、IgG2、IgG3水平升高（P < 0.05），說(shuō)明在KOA患者中，確實(shí)存在著免疫球蛋白的升高，以及體液免疫的亢進(jìn)。

相關(guān)性分析顯示，KOA患者免疫球蛋白亞型與病程、年齡無(wú)明顯相關(guān)性。說(shuō)明免疫球蛋白的升高以及免疫球蛋白亞型的分化與病程、年齡無(wú)明顯的關(guān)系，可能只與疾病的進(jìn)程以及機(jī)體的免疫狀態(tài)有關(guān)。

免疫球蛋白是指具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白[9]。免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu)是四條膚鏈的對(duì)稱(chēng)結(jié)構(gòu)，包括兩條相同的重鏈（heavy chain）及兩條相同的輕鏈（light chain）[10]。一般將人血清中的蛋白分為白蛋白，α1、α2、β、γ球蛋白5種，正常情況下各蛋白均占有一定的比例。在人體出現(xiàn)免疫紊亂時(shí)，各球蛋白作為免疫過(guò)程的重要參與者比例升高，從而降低了白蛋白含量，而總蛋白水平與IgG、IgA水平呈正相關(guān)。根據(jù)免疫球蛋白重鏈C區(qū)所含的抗原表位不同，免疫球蛋白分為5類(lèi)，即IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。在風(fēng)濕性疾病中臨床常監(jiān)測(cè)的主要有IgG、IgA、IgM，而其中以IgG的變化較為顯著。免疫球蛋白水平是機(jī)體體液免疫的重要衡量指標(biāo)。

IgG是一種糖蛋白，在血清中所占比例最高，IgG的特點(diǎn)是產(chǎn)生遲、維持久。依據(jù)其糖鏈的不同，分為IgG1-4型。而不同的糖鏈結(jié)構(gòu)對(duì)免疫球蛋白的生理作用及特性影響較大。其“雙天線”末端都具有半乳糖稱(chēng)為IgG2型，缺失一個(gè)稱(chēng)為IgG1型，兩個(gè)都缺失稱(chēng)為IgG0型。其中IgG0型在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的致病中研究較多，主要表現(xiàn)為量的增加和對(duì)Fc片段結(jié)合能力的下降。目前，對(duì)于OA免疫球蛋白的研究尚少，而在對(duì)免疫球蛋白的相關(guān)研究認(rèn)為，IgG糖鏈結(jié)構(gòu)的變化使IgG自身成為免疫中的異己成分被識(shí)別，與抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物，沉積于關(guān)節(jié)滑膜、軟骨，刺激活化補(bǔ)體，促發(fā)一系列的免疫反應(yīng)，產(chǎn)生多種細(xì)胞因子破壞侵蝕關(guān)節(jié)軟骨，刺激骨質(zhì)的增生。

本研究中相關(guān)分析亦顯示，各系免疫球蛋白與不同炎性指標(biāo)存在不同程度相關(guān)。其中hs-CRP是由肝臟合成的一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，在組織損傷或炎癥反應(yīng)時(shí)升高，具有激活補(bǔ)體促進(jìn)吞噬的作用。通過(guò)對(duì)OA中B細(xì)胞的無(wú)性分析發(fā)現(xiàn)，這些B細(xì)胞的激活是抗原刺激趨使，而浸潤(rùn)B細(xì)胞的單克隆及抗原驅(qū)動(dòng)的免疫反應(yīng)在OA的病理過(guò)程中發(fā)揮作用[11-12]。同時(shí)，針對(duì)滑液蛋白骨橋蛋白的升高，通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)的方法，Xiang等[13]發(fā)現(xiàn)了一種TPI，一種在OA中特異性較高的抗原抗體；其他還有馬OA模型以及狗OA模型中發(fā)現(xiàn)的抗體[14]。以上研究表明，針對(duì)關(guān)節(jié)軟骨的自身免疫抗體可能是OA發(fā)病的關(guān)鍵機(jī)制，OA體液免疫的變化可能與關(guān)節(jié)軟骨異常代謝過(guò)程中特殊蛋白的代謝暴露有關(guān)，其中涉及細(xì)胞免疫及體液免疫整個(gè)免疫系統(tǒng)的交叉參與。

1985年有日本學(xué)者發(fā)現(xiàn)了在RA中IgG的Fc區(qū)糖鏈的異常，提出了“糖病理學(xué)”的概念。因此在KOA中，也可能涉及免疫球蛋白水平及亞型的異常。本組研究提示，在OA患者中IgG1、IgG2、IgG3的變化較為顯著，IgG4無(wú)明顯變化。在OA的研究中，有關(guān)免疫球蛋白變化的研究較少，本組研究為入門(mén)探索性研究，對(duì)于免疫球蛋白變化的機(jī)理及影響尚需進(jìn)一步深入探討。

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收稿日期：2015-05-11；修回日期：2015-06-14