李亞平劉振勝黃冠男姜相君

作者單位：265400 山東招遠1招遠市人民醫(yī)院消化內(nèi)科；266000 山東青島2青島大學醫(yī)學院附屬青島市立醫(yī)院藥學科，3消化內(nèi)二科

臨床經(jīng)驗

NF-κB、IκBα在胃癌組織中的表達及臨床意義

李亞平1劉振勝2黃冠男3姜相君3

作者單位：265400 山東招遠1招遠市人民醫(yī)院消化內(nèi)科；266000 山東青島2青島大學醫(yī)學院附屬青島市立醫(yī)院藥學科，3消化內(nèi)二科

目的 探討核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）、抑制蛋白IκBα在慢性淺表性胃炎組織、慢性萎縮性胃炎組織、胃癌組織和正常胃黏膜組織中的表達水平，分析其在不同胃黏膜組織中的表達差異及其臨床意義。方法 收集胃癌組織40例（胃癌組），慢性淺表性胃炎組織20例（慢性淺表性胃炎組）、慢性萎縮性胃炎組織20例（慢性萎縮性胃炎組）及正常胃黏膜組織20例（正常胃黏膜組）。采用免疫組化SABC法對各種胃黏膜組織標本中NF-κB、IκBα的表達進行測定并分析其與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 胃癌組NF-κB、IκBα的表達均顯著高于慢性萎縮性胃炎組、慢性淺表性胃炎組與正常胃黏膜組（P均<0.05）。NF-κB、IκBα的表達與胃癌患者性別、年齡、腫瘤病理類型、腫瘤最大直徑等的差異均無統(tǒng)計學意義（P均>0.05），與胃癌細胞分化程度、TNM分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等的差異均有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）。結(jié)論 隨著胃黏膜損傷程度的加重，NF-κB、IκBα的陽性表達逐漸升高，其高表達可能參與胃癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。

胃腫瘤；慢性萎縮性胃炎；慢性淺表性胃炎；核轉(zhuǎn)錄因子-κB；IκBα

胃癌是嚴重威脅人類健康的消化道腫瘤［1］，我國胃癌發(fā)病人數(shù)占全球發(fā)病總數(shù)的42%［2］。我國胃癌死亡率居高不下，其原因與早期診斷率低有關(guān)。因此，尋找并建立能夠在胃癌早期確診的方法是提高胃癌早診率、降低死亡率的關(guān)鍵。

核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）是從B細胞中提取的能與免疫球蛋白κ鏈基因特異性結(jié)合并促進κ輕鏈表達的核蛋白因子，涉及細胞的生長、分化、凋亡的調(diào)節(jié)、細胞因子的產(chǎn)生等。NF-κB通常與其抑制蛋白IKB形成復合物，以非活性形式存在于細胞質(zhì)中。IKB在NF-κB調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄方面起重要作用。NF-κB在各種刺激信號的作用下被激活［2］，從而參與調(diào)控眾多炎癥因子基因的表達。Wu等［3］用Hp刺激人胃癌細胞株，發(fā)現(xiàn)Hp感染、NF-κB的活化和環(huán)氧化酶（COX-2）的表達在胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用。Hahm等［4］研究發(fā)現(xiàn)Hp感染可以激活NF-κB，從而誘導COX-2和IL-8的表達，這可能是Hp感染導致胃癌發(fā)生的機制之一。

本課題通過比較NF-κB、IκBα在慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、胃癌組織和正常胃黏膜組織中的表達差異，并分析與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系，探討NF-κB信號轉(zhuǎn)導通路在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，為胃癌的早期診斷提供實驗佐證。

1 資料與方法

1.1 組織標本

收集2010年2月至2013年11月在我院手術(shù)切除并經(jīng)病理組織學證實的胃癌組織40例（胃癌組），胃鏡下活檢的慢性淺表性胃炎組織20例（慢性淺表性胃炎組）、慢性萎縮性胃炎組織20例（慢性萎縮性胃炎組）、正常胃黏膜組織標本20例（正常胃黏膜組）。詳細記錄胃癌患者的性別、年齡、腫瘤病理類型、腫瘤最大直徑、TNM分期等資料。

胃癌組織取自癌灶中央非壞死區(qū)域，正常胃黏膜組織取自與之配對的距離癌組織5cm以上區(qū)域，組織標本置于10%福爾馬林溶液，固定24h，用于免疫組化染色。胃癌診斷均經(jīng)組織病理學確診，患者術(shù)前均未接受放療和化療。

1.2 實驗方法

免疫組化法檢測：將各種胃組織標本經(jīng)4%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，HE染色，光鏡觀察，采用免疫組化SABC法。染色步驟和抗體稀釋均按產(chǎn)品說明書進行。DAB顯色劑，蘇木精復染，PBS代替一抗作陰性對照，以已知陽性切片作陽性對照。結(jié)果判定：細胞結(jié)構(gòu)清晰，著色明顯高于背景，NF-κB、IκBα免疫組化染色以細胞質(zhì)和（或）細胞核內(nèi)呈棕黃色為陽性表達。根據(jù)著色深淺程度及陽性染色部位，使用Imagepro-plus圖像分析系統(tǒng)測量每個標本積分光密度值，即每個標本陽性表達的光密度值和面積乘積之和進行定量分析［5］。

1.3 統(tǒng)計學處理

使用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件分析實驗數(shù)據(jù)，計量資料用均數(shù)±標準差（±s）表示，兩個樣本均數(shù)的比較用t檢驗。計數(shù)資料兩個樣本率的比較用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各種胃黏膜組織NF-κB、IκBα的免疫組化測定

正常胃黏膜組及慢性淺表性胃炎組胃黏膜組織中NF-κB呈弱陽性表達，主要分布在細胞質(zhì)中，兩者差異比較無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。慢性萎縮性胃炎組（尤其是重度慢性萎縮性胃炎）有較強的NF-κB表達，主要分布在細胞質(zhì)和（或）細胞核中，顯著高于正常胃黏膜組及慢性淺表性胃炎組（P均<0.05）。

胃癌組NF-κB的表達量較正常胃黏膜組、慢性淺表性胃炎組及慢性萎縮性胃炎組明顯增多，染色強度增強，與其他3組比較差別均有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）。IκBα在正常胃黏膜組及慢性淺表性胃炎組的細胞質(zhì)中有少量表達，兩者差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；慢性萎縮性胃炎組IκBα的表達增多，顯著高于正常胃黏膜組及慢性淺表性胃炎組（P均＜0.05）；胃癌組有較強的IκBα表達，與正常胃黏膜組、慢性淺表性胃炎組及慢性萎縮性胃炎組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）。見表1、圖1。

表1 NF-κB、IκBα在各種胃黏膜組織中的表達情況（積分光密度值，±s）

表1 NF-κB、IκBα在各種胃黏膜組織中的表達情況（積分光密度值，±s）

與正常胃黏膜組比較，#P＞0.05；分別與正常胃黏膜組、慢性淺表性胃炎組比較，*P均＜0.05；分別與正常胃黏膜組、慢性淺表性胃炎組、慢性萎縮性胃炎組比較，**P均＜0.05。

組別 n NF-κB IκBα正常胃黏膜組 20 0.105±0.034 0.098±0.041慢性淺表性胃炎組 20 0.211±0.071#0.304±0.063#慢性萎縮性胃炎組 20 0.686±0.088*0.651±0.079*胃癌組 40 0.865±0.081**0.844±0.077**

圖1 NF-κB、IκBα在各種胃黏膜組織中的表達（SP×200）

2.2 NF-κB、IκBα的表達與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系

NF-κB、IκBα的表達與胃癌患者性別、年齡、腫瘤病理類型、腫瘤最大直徑的差異均無統(tǒng)計學意義（P均>0.05）。而與胃癌的細胞分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等的差異均有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）。見表2。

表2 NF-κB、IκBα的陽性表達與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系（n）

3 討論

NF-κB系統(tǒng)由NF-κB家族及其抑制物IκBα共同組成。NF-κB是一種極其重要的轉(zhuǎn)錄激活因子，IκBα是一類NF-κB的抑制蛋白。NF-κB是炎癥的中心環(huán)節(jié)，也是癌變過程的關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白，在腫瘤生長過程的信息傳遞中起重要作用，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。最近研究表明，NF-κB的不恰當活化在腫瘤細胞抗凋亡機制中起重要作用［6］。目前已證明在乳腺癌、甲狀腺癌、T淋巴細胞或B淋巴細胞白血病、結(jié)腸癌等病毒誘導的腫瘤中，均存在NF-κB活性的高表達［7，8］。近年研究表明，NF-κB在胃癌、結(jié)腸癌、肝癌等多種腫瘤中有較高的表達。在NF-κB與胃癌關(guān)系的研究中，發(fā)現(xiàn)NF-κB活化后可促進多種基因表達從而參與胃癌進展。Wu等［3］的研究發(fā)現(xiàn)Hp感染、NF-κB的活化和COX-2的表達在胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用。Sasaki等［9］應用免疫組化法檢測RelA（p65）在胃癌細胞質(zhì)和細胞核中的表達，發(fā)現(xiàn)其明顯高于鄰近正常上皮細胞（P＜0.05）。該實驗還顯示NF-κB的活性與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、腹膜轉(zhuǎn)移、腫瘤大小等臨床病理特點具有相關(guān)性（P＜0.05）。許多實驗顯示NF-κB在胃癌細胞和組織中的表達激活，與胃癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，并在某種程度上決定患者預后。

本實驗研究結(jié)果顯示，隨著胃黏膜病變的加重，NF-κB的表達增加，并且隨著胃癌細胞分化程度越低、TNM分期越高，NF-κB、IκBα表達的陽性率越高。提示NF-κB可能通過某些途徑參與胃癌的發(fā)生和發(fā)展，深入研究NF-κB將有助于揭示胃癌發(fā)病的機制。將NF-κB作為胃癌治療的新靶點，有針對性地選擇其活化途徑的不同水平進行選擇性調(diào)控NF-κB的活性，有望從基因水平對防治胃癌和抗癌藥物設(shè)計一個較好的靶點，為臨床治療胃癌提供一條新的途徑。

［1］ Yang L.I nci d ence an d m ort a l i t y of ga str ic cance r in C hina［J］.Word J Ga stro en t e rol，2006，12（1）：17-20.

［2］ M a r pegan L，B e k in s ch t ein T A，F(xiàn) r eu d en t ha l R，e t a l.P a rt icipa t i o n of tr an s c r ip t i o n f ac tors fro m t he R e l/NF-k appa B f ami l y in t he ci r ca d ian s y st em in ham st e rs［J］.N eu ros ci L e tt，2004，358（1）：9-12.

［3］ W u C Y，W ang C J，T s eng CC，e t a l.H e l ic ob ac t e r py lor i p ro m ot e ga str i cance r ce lls in v a s i o n t h ro ugh a NF-k appa B an d C OX-2-me d ia t e pa t h w ay［J］.World J Ga stro en t e rol，2005，11（21）：3197-3203.

［4］ H ahm KB，So ng Y J，O h T Y，e t a l.C hem o p r e v en t i o n of H e l ic ob ac t e r py lor i-a sso cia t e d ga str ic ca r cin o gene s i s in a m o u s e m od e l：i s i t p oss i bl e?［J］.J B i o chem M ol B i ol，2003，36（1）：82-94.

［5］ W ang C J，Z h o u Z G，H ol m q v i st A，e t a l.S u rv i v in e x p r e ss i o n q uan t i f ie db y image Pro-Pl u s c o mpa r e d w i t h v i s ua l a ss e ss men t［J］.A pp l I mmun o hi sto chem M ol M or ph ol，2009，17（6）：530-535.

［6］ H a o Q，Z hang C，Ga o Y，e t a l.FOX P3 inhi b i ts NF-κB ac t i v i t y an d hence C OX-2 e x p r e ss i o n in ga str ic cance r ce lls［J］.C e ll S igna l，2014，26（3）：564-569.

［7］ P i otrowsk a A，I z y kowsk a1，Pod h orsk a-O kolów M，e t a l.T he str uc t u r e of NF-k appa B f ami l y p rot ein s an d t hei r rol e in ap o p tos i s［J］.Post epy H ig M e d D osw（O n l ine），2008，15（62）：64-74.

［8］ K wo n O H，K im J H，K im S Y，e t a l.T W EAK/F n14 s igna l ingme d ia t e s ga str ic cance r ce ll r e s i st ance to 5-fl u oro u r aci l v ia NF-κB ac t i v a t i o n［J］. I n t J O nc ol，2014，44（2）：583-590.

［9］S a s a k i N，M or i s a k i T，H a s hi z ume K，e t a l.N uc l ea r f ac tor-k appa B p65（R e l A）tr an s c r ip t i o n f ac tor i s c o n st i t u t i v e l y ac t i v a t e d in human ga str ic ca r cin o ma t i ss ue［J］.C l in C ance r R e s，2001，7（12）：4136-4142.

［2014-09-15收稿］［2014-12-25修回］［編輯 阮萃才］

R735.2

A

1674-5671（2015）01-04

10.3969/j.issn.1674-5671.2015.01.10

青島市公共領(lǐng)域科技支撐計劃基金資助項目［2012-1-3-1-（10）-nsh］

姜相君。E-mail：drjxj@163.com