胡 茜，劉 昆

(1.四川省成都市婦女兒童中心醫(yī)院產(chǎn)科 610081；2.四川省抗生素研究所，成都 610052)

論著·臨床研究

CIP2A及c-Myc在宮頸癌組織中的表達及相關(guān)性分析

胡 茜1，劉 昆2

(1.四川省成都市婦女兒童中心醫(yī)院產(chǎn)科 610081；2.四川省抗生素研究所，成都 610052)

目的 檢測蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(CIP2A)和c-Myc蛋白在宮頸癌組織中的表達水平并分析二者表達的相關(guān)性。方法 運用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測CIP2A和c-Myc蛋白在72例宮頸癌和12例正常宮頸組織中的表達水平，分析CIP2A和c-Myc與宮頸臨床病理特征的相關(guān)性以及二者表達的相關(guān)性。結(jié)果 CIP2A和c-Myc蛋白在宮頸癌組織中的陽性率分別為52.8%(38/72)和56.9%(41/72)，而二者在正常宮頸組織中的陽性率分別為8.3%(1/12)和25.0%(3/12)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.169,P=0.004；χ2=4.208,P=0.040)。CIP2A和c-Myc蛋白表達與腫瘤組織病理分化和臨床分期顯著相關(guān)(P<0.05)，而與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤病理類型無明顯相關(guān)性。Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示宮頸癌組織中CIP2A與c-Myc蛋白表達呈顯著正相關(guān)(r=0.673，P=0.001)。結(jié)論 宮頸癌組織中CIP2A高表達與惡性臨床病理特征密切相關(guān)，并與c-Myc蛋白表達呈顯著正相關(guān)。

CIP2A；c-Myc；宮頸癌

蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A，CIP2A)最近新發(fā)現(xiàn)的一個癌蛋白，CIP2A通過抑制蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A，PP2A)對c-Myc S62的脫磷酸化作用，從而遏制PP2A介導(dǎo)的c-Myc降解，穩(wěn)定腫瘤細胞中c-Myc蛋白水平[1]。之前報道稱CIP2A在胃癌組織中表達升高，干擾其表達導(dǎo)致腫瘤細胞集落生成受損、細胞衰老和腫瘤分化[2]。另外，在人頭頸部腫瘤、結(jié)腸癌、乳腺癌和口腔鱗狀細胞癌中均發(fā)現(xiàn)CIP2A高表達[3-6]，但CIP2A在人宮頸癌組織中的表達及其與c-Myc的相關(guān)性少有報道。本課題應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測CIP2A和c-Myc在宮頸癌及正常宮頸組織中的表達水平，分析CIP2A和c-Myc與宮頸癌臨床病理特征的相關(guān)性及二者表達的相關(guān)性，初步探討CIP2A在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機收集成都市婦女兒童中心醫(yī)院病理科2009年1月至2012年12月保存的宮頸癌組織標(biāo)本，共72例，年齡29～68歲，平均(42.3±3.4)歲。其中，鱗癌60例，腺癌12例；分化程度：高、中分化39例，低分化33例；臨床分期(FIGO，2009)：Ⅰ～Ⅱ期35例，Ⅲ～Ⅳ期37例。12例正常宮頸組織標(biāo)本來源于因慢性宮頸炎或子宮纖維瘤行全子宮切除術(shù)的患者，年齡30～65歲，平均(41.7±2.5)歲。兩組患者年齡具有可比性。本研究通過本院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 CIP2A和c-Myc蛋白的免疫組織化學(xué)染色 采用標(biāo)準(zhǔn)生物素-鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶(streptavidin-peroxidase-biotin，SP)法對4 μm石蠟切片進行染色。切片在60 ℃烤箱中烘烤60 min，然后經(jīng)二甲苯脫蠟和再水化，0.01 mmol/L檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0)抗原熱修復(fù)，室溫冷卻20 min，0.3% Trixon-X100處理30 min，3%雙氧水-甲醇封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性，正常血清封閉非特異性結(jié)合，切片經(jīng)CIP2A(1∶250，Novus Biologicals公司)和c-Myc(1∶400，Cell Signaling Technology公司)抗體4 ℃孵育過夜。沖洗后滴加生物素標(biāo)記的二抗(SP試劑盒，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)，室溫孵育30 min。滴加辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，室溫孵育30 min。滴加DAB顯色，蘇木素輕度復(fù)染。乙醇梯度脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。PBS代替一抗作為陰性對照。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色評估 所有切片由2位研究人員進行評估，染色強度評分：0分，陰性；1分，弱陽性；2分，中度；3分，強陽性。陽性細胞百分比評分：無陽性細胞，0分；≤25%，1分；26%～50%，2分；51%～75%，3分；>75%，4分。染色強度和陽性細胞百分比評分相乘大于或等于1分則認(rèn)為CIP2A或c-Myc蛋白陽性表達[7]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行分析處理，分類資料運用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)系數(shù)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌及正常宮頸組織中CIP2A和c-Myc的表達水平比較 應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測72例宮頸癌及12例正常宮頸組織中CIP2A和c-Myc表達水平，CIP2A和c-Myc蛋白陽性反應(yīng)為棕黃色或棕褐色，CIP2A蛋白主要定位在細胞質(zhì)和細胞膜，而c-Myc蛋白主要定位于細胞質(zhì)和細胞核(圖1)。CIP2A和c-Myc蛋白在宮頸癌組織中的陽性率分別為52.8%(38/72)和56.9%(41/72)，而二者在正常宮頸組織中的陽性率分別為8.3%(1/12)和25.0%(3/12)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.169,P=0.004；χ2=4.208,P=0.040)。

2.2 CIP2A和c-Myc蛋白表達與宮頸癌臨床病理特征的相關(guān)性 應(yīng)用χ2檢驗分析CIP2A及c-Myc蛋白表達與宮頸癌臨床病理特征的相關(guān)性，結(jié)果見表1。CIP2A和c-Myc蛋白表達與腫瘤組織病理分化和臨床分期有關(guān)(P<0.05)，而與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤病理類型無顯著相關(guān)性。

2.3 宮頸癌組織中CIP2A與c-Myc蛋白表達相關(guān)性 應(yīng)用免疫組織化學(xué)評分對72例宮頸癌組織中CIP2A和c-Myc蛋白表達行半定量分析，Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示宮頸癌組織中CIP2A與c-Myc蛋白表達呈顯著正相關(guān)(r=0.673，P=0.001)。

A：宮頸鱗癌組織中CIP2A陽性染色；B：宮頸腺癌組織中CIP2A陽性染色；C：正常宮頸組織中CIP2A陰性染色；D：宮頸鱗癌組織中c-Myc陽性染色；E：宮頸腺癌組織中c-Myc陽性染色；F：正常宮頸組織中c-Myc陰性染色。

圖1 CIP2A和c-Myc蛋白在宮頸癌及正常宮頸組織中的免疫組織化學(xué)染色(SP，×400)

表1 CIP2A和c-Myc蛋白表達與宮頸癌臨床病理特征的相關(guān)性(n=72)

續(xù)表1 CIP2A和c-Myc蛋白表達與宮頸癌臨床病理特征的相關(guān)性(n=72)

3 討論

宮頸癌是導(dǎo)致婦科腫瘤患者死亡的第2位因素，每年全世界約有500 000新確診病例，超過1/3的患者死亡[8]。人乳頭瘤病毒(human papilloma virus，HPV)在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。目前，HPV疫苗的應(yīng)用一定程度減少了宮頸癌發(fā)病率[9]。CIP2A由于具有轉(zhuǎn)化人永生化細胞的能力而被證實為一種癌蛋白，最近CIP2A過表達在多種人類腫瘤中被報道，更重要的是許多研究發(fā)現(xiàn)CIP2A可以充當(dāng)不同實體腫瘤和血液系統(tǒng)腫瘤的預(yù)后分子標(biāo)志物，如非小細胞肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、卵巢癌、腎癌、舌癌、食管腺癌、膀胱癌和慢性髓樣白血病[10]。本研究發(fā)現(xiàn)CIP2A在宮頸癌組織中的陽性表達率顯著高于正常宮頸組織，既往有學(xué)者也證實了CIP2A在宮頸鱗癌組織中的表達水平高于正常宮頸和CIN Ⅰ～Ⅲ組織[11]，與本研究結(jié)果一致。進一步研究發(fā)現(xiàn)CIP2A蛋白表達與宮頸癌臨床分期和分化程度呈顯著相關(guān)，而Liu等[11]研究發(fā)現(xiàn)CIP2A與宮頸癌臨床病理特征無明顯相關(guān)。本研究納入了宮頸鱗癌和腺癌2種病理類型，而Liu等[11]只納入了宮頸鱗癌一種病理類型，不能代表宮頸癌整體，這可能是導(dǎo)致出現(xiàn)不同結(jié)論的原因。

c-Myc作為一個經(jīng)典的促癌蛋白參與許多生物學(xué)功能(如細胞增殖、分化、衰老、凋亡和轉(zhuǎn)化)，而在宮頸癌組織中已經(jīng)證實存在c-Myc蛋白過表達[12-14]。本研究也發(fā)現(xiàn)c-Myc蛋白在宮頸癌組織中表達水平顯著高于正常宮頸組織。另外，統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)在高臨床分期和低分化的腫瘤組織中c-Myc陽性率更高。CIP2A是一個細胞PP2A抑制因子，通過抑制PP2A介導(dǎo)的c-Myc絲氨酸62號位脫磷酸化作用從而限制c-Myc蛋白水解。進一步評估宮頸癌組織中CIP2A和c-Myc蛋白表達相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CIP2A與c-Myc蛋白表達呈顯著正相關(guān)。既往研究證實在宮頸癌細胞系中干擾CIP2A表達可以導(dǎo)致c-Myc蛋白表達水平降低和細胞增殖[11]，提示CIP2A可能通過穩(wěn)定c-Myc蛋白促進宮頸癌惡性生物學(xué)行為。

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The expression of CIP2A and c-Myc and their correlation analysis in cervical carcinoma tissues

HuQian1,LiuKun2

(1.Obstetrics,WomenandChildren′sHospitalCenterinChengdu,Chengdu610081,China;2.InstituteofAntibioticsofSichuanProvincial,Chengdu610052,China)

Objective To investigate the expression of CIP2A and c-Myc and their correlation in cervical carcinoma.Methods We detected CIP2A and c-Myc expression using immunohistochemistry in 72 samples of cervical carcinoma and 12 samples of normal cervix tissues.Correlation between proteins and clinicopathologic features and relation between CIP2A and c-Myc expression were analyzed.Results The positive expression of CIP2A and c-Myc in cervical carcinoma tissues were 52.8% and 56.9%,respectively.While their positive expression in normal cervix tissues were 8.3% and 25.0%,respectively.The differences had statistical significance(χ2=8.169,P=0.004;χ2=4.208,P=0.040,respectively).Clinicopathological analysis suggested that CIP2A and c-Myc protein expression were associated with histopathological differentiation and clinical stage(P<0.05) in cervical carcinoma,but the protein expression was not related to age,lymph node metastasis and pathological type.CIP2A was significantly positive correlated with c-Myc protein in cervical carcinoma(r=0.673，P=0.001).Conclusion The high-expression of CIP2A is correlated with malignant clinicopathologic characteristics,and CIP2A is positively associated with c-Myc,suggesting that CIP2A may promote tumor initiation and development through maintaining c-Myc protein in cervical carcinoma.

CIP2A；c-Myc;cervical carcinoma

胡茜(1980-)，主治醫(yī)師,本科,主要從事臨床婦產(chǎn)科工作。

10.3969/j.issn.1671-8348.2015.08.020

R711.74

A

1671-8348(2015)08-1072-03

2014-10-08

2014-12-17)