楊紅梅，王聰穎，曹 蕾，賀寶瑩，宋 英，唐安玲

1成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都610075;2成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院

益母草壓制飲片的藥學(xué)研究*

楊紅梅1，王聰穎1，曹 蕾1，賀寶瑩1，宋 英2△，唐安玲1

1成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都610075;2成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院

目的：比較益母草飲片壓制前后的煎出效果。方法：以鹽酸益母草堿含量和干膏率為指標(biāo)，通過復(fù)方煎煮，溶出曲線，單味煎煮比較兩者水煎液的指標(biāo)性成分的含量，比較兩者差異。結(jié)果：壓制飲片與傳統(tǒng)飲片的水煎液的指標(biāo)性成分的含量、煎出物等檢測指標(biāo)無明顯差異。結(jié)論：壓制飲片不影響有效成分的煎出，可保證湯劑煎煮質(zhì)量。

益母草壓制飲片；傳統(tǒng)飲片；鹽酸益母草堿；干膏收率

壓制飲片是將傳統(tǒng)飲片壓制成規(guī)定劑量的幾何體。從制備原理上看，用機(jī)械壓制成規(guī)定質(zhì)量的立方體，不需添加任何輔料，無潤濕、干燥等其他工藝過程［1］，在一定程度上代替了傳統(tǒng)的中藥飲片，由益母草、當(dāng)歸、川芎、大薊、赤芍、白茅根、牡丹皮組成的我院多年經(jīng)驗(yàn)方，具有補(bǔ)益調(diào)經(jīng)功效，用于月經(jīng)不調(diào)等，療效突出。益母草為全草類藥材，由于密度較小、流動(dòng)性差，普通飲片不利于定量包裝和藥房調(diào)劑。本實(shí)驗(yàn)選用益母草為研究對象，比較益母草壓制飲片與傳統(tǒng)飲片的煎煮質(zhì)量及有效成分溶出，為壓制飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供參考。

1 材料

1.1 試驗(yàn)儀器 HP 1100高效液相色譜儀(配有DAD檢測器、自動(dòng)進(jìn)樣器、四元梯度泵、在線脫氣裝置，美國惠普公司提供)，Agilent Chem Station色譜工作站(美國安捷倫公司提供)；BP211D分析天平(十萬分之一型，德國賽多利斯公司提供)。

1.2 試藥 益母草傳統(tǒng)飲片(由四川省中藥飲片有限公司提供，批號：120514)；益母草壓制中藥飲片(由四川省中藥飲片有限提供，批號：120514)；鹽酸益母草堿對照品 (由中國藥品生物制品檢定所提供，批號：111823-201202，含量以94.1%計(jì)算)；乙腈色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2. 方法與結(jié)果

2.1 益母草壓制中藥飲片含量測定

2.1.1 色譜條件 色譜柱為ComatexC18(250mm× 4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.025 mol/L KH2PO4溶液(pH 3.5～4.0)(86.5∶13.5)；流速：1 mL/min；檢測波長：277nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10 μL。理論塔板數(shù)按鹽酸益母草堿計(jì)應(yīng)不低于6 000。

2.1.2 對照品的制備 精密稱取鹽酸益母草堿1.55 mg，置25mL量瓶中，加70%乙醇至刻度搖勻，即得(0.058 3 mg/mL)；精密吸取5 mL，置10 mL量瓶中加70%乙醇至刻度，搖勻，即得(0.02915mg/mL)；精密稱取鹽酸益母草堿1.48mg，置25mL量瓶中，加70%乙醇至刻度搖勻，即得(0.055 71 mg/mL)。

2.1.3 供試品溶液制備 取本品粉末(過3號篩)約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，稱定重量，加熱回流2小時(shí)，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 樣品含量測定 按照上述色譜條件，精密吸取供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，由測定結(jié)果可知，益母草中藥飲片鹽酸益母草堿含量為0.97 60 mg/g，均符合《中國藥典》2010年版一部272頁“益母草”含量測定項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。

2.1.5 線性范圍考察 按上述色譜條件，分別精密吸取鹽酸益母草堿對照品溶液(0.058 3 mg/mL) 1，3，5，10，11μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以峰面積(Y)對進(jìn)樣量(X)進(jìn)行回歸，經(jīng)計(jì)算，得線性回歸方程Y=1 359.5X+43.115，r2=0.991 2，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在0.058 3～0.874 5 μg范圍內(nèi)，鹽酸益母草堿峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。

2.2 復(fù)方飲片煎煮質(zhì)量比較

2.2.1 鹽酸益母草堿含量測定

2.2.1.1 傳統(tǒng)飲片復(fù)方樣品溶液制備 按照處方比例分別稱取益母草600 g，當(dāng)歸200 g，川芎200 g，大薊400 g，赤芍400 g，白茅根400 g，牡丹皮400 g，稱取6份，其中3份分別加15倍量水，浸泡30分鐘，第一次煎煮保持微沸15分鐘，第二次煎煮保持沸騰10分鐘，濾過，濾液濃縮并定容至7 000 mL，作為傳統(tǒng)煎煮組；另3組分別加水10 000 mL，浸泡30分鐘，煎煮15分鐘，濾過，藥液定容至7 000 mL，作為機(jī)器煎煮組。見圖1。

圖1 益母草復(fù)方煎煮液色譜圖

2.2.1.2 定量壓制復(fù)方樣品溶液制備 按照處方比例稱取除益母草外傳統(tǒng)飲片當(dāng)歸200 g，川芎200 g，大薊400 g，赤芍400 g，白茅根400 g，牡丹皮400 g，益母草壓制中藥飲片600 g，稱取6份，按照上述方法分別制備機(jī)器煎煮樣品與傳統(tǒng)煎煮樣品。

2.2.1.3 復(fù)方陰性樣品溶液 按處方比例稱取除益母草外藥材200 g，同法制備缺益母草陰性樣品溶液。見圖2。

圖2 復(fù)方煎煮(陰性)

2.2.2 專屬性實(shí)驗(yàn) 按上述色譜條件，精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，結(jié)果供試品中鹽酸益母草堿色譜峰與相鄰色譜峰分離度＞1.5，理論塔板數(shù)按鹽酸益母草堿峰計(jì)算不低于6 000，陰性無干擾。

2.2.3 方法學(xué)考察

2.2.3.1 精密度實(shí)驗(yàn) 按照上述色譜條件，精密吸取鹽酸益母草堿對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄測定，結(jié)果鹽酸益母草堿對照品峰面積均值為449.95，RSD為0.63%，表明精密度良好。見圖3。

圖3 鹽酸益母草堿對照品

2.2.3.2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 按照上述色譜條件，精密吸取供試品溶液10 μL，分別于0、2、4、6、8、10小時(shí)，注入液相色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果鹽酸益母草堿峰面積均值為 171，RSD為2.90%，表明供試品溶液在10小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.2.3.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 按“2.1.3”項(xiàng)下，分別制備供試品溶液6份，按照上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄鹽酸益母草堿色譜峰峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果樣品中鹽酸益母草堿含量均值為0.0111，RSD為1.38%，表明實(shí)驗(yàn)重復(fù)性較好。

2.2.3.4 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品溶液1.5 mL(0.036 99 mg/mL)，共6份，分別精密加入鹽酸益母草堿對照品溶液(0.05571mg/mL) 1 mL，按供試品制備方法及色譜條件，測定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果鹽酸益母草堿的加樣回收率平均值為98.65%，加樣回收率在95%～105%之間，RSD=2.16%，表明該方法的加樣回收率較好。

2.2.4 干膏收率測定 精密吸取樣品溶液25mL，置已恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時(shí)，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，結(jié)果傳統(tǒng)煎煮與機(jī)器煎煮方法，益母草傳統(tǒng)飲片與壓制中藥飲片復(fù)方水煎液中鹽酸益母草堿含量及干膏收率均相近，無明顯差異。

2.3 單味飲片煎煮質(zhì)量比較 分別稱取益母草壓制前后飲片各6份，每份600 g，分別加水煎煮2次，其中3份分別加15倍量水，浸泡30分鐘，第一次煎煮保持微沸15分鐘，第二次煎煮保持沸騰10分鐘，濾過，濾液濃縮并定容至7 000 mL，作為傳統(tǒng)煎煮組。另3組分別加水8 000 mL，浸泡30分鐘，煎煮15分鐘，濾過，藥液定容至7 000 mL，作為機(jī)器煎煮組。

精密吸取上述樣品溶液3 mL，置10 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，經(jīng)微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密吸取供試液10 μL，注入液相色譜儀，計(jì)算鹽酸益母草堿含量另精密吸取樣品溶液25 mL，置已恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時(shí)，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定質(zhì)量，結(jié)果表明益母草傳統(tǒng)飲片與壓制中藥飲片單味水煎液中鹽酸益母草堿含量及干膏收率相近，無明顯差異。

2.4 溶出曲線比較 分別稱取益母草壓制前后飲片各100 g，加水1 000 mL(補(bǔ)加吸水量)，浸泡30分鐘，分別于煎煮5，10，15，20，30，40，50，60分鐘取樣100 mL，并補(bǔ)充水體積，藥液濾過，備用。精密吸取上述樣品溶液3 mL，置10 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，經(jīng)微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密吸取供試液10 μL，注入液相色譜儀，計(jì)算鹽酸益母草堿含量另精密吸取煎煮不同時(shí)間點(diǎn)樣品溶液各25 mL，置已恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時(shí)，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定質(zhì)量，結(jié)果見表1。

Pharmaceutical Research on YiMuCao Pressed Decoction Pieces

YANG Hongmei1,WANG Congying1,CAO Lei1,HE Baoying1,SONG Ying2△,TANG Anling11 Chengdu University of TCM,Chengdu 610075,China;
2 Teaching Hospital of Chengdu University of TCM

Objective:To compare the decoction effects of YiMuCao[Leonurus artemisia(Laur.)S.Y.Hu F] before and after pressing.Methods:By taking the contents of leonurine hydrochloride and dry extract yield as the indexes,the contents of indicative components in the decoctions were compared by decocting the compound,stripping curve and single decoction,to compare the difference between them.Results:There was no obvious difference in the comparison of detection indexes including the contents of indicative components in the decoction of pressed decoction pieces and traditional drug pieces,the extracts and others.Conclusion:Pressed decoction pieces wouldn't affect the extract of active ingredients and it could ensure the quality of the decoction.

YiMuCao pressed decoction pieces;traditional drug pieces;leonurine hydrochloride; dry extract yield

表1 溶出曲線結(jié)果

R284.1

A

1004-6852(2015)10-0053-04