趙 杰 陳慧瑤 肖惠玲 葉依露 賴垚霖 黃總軍 楊金玉

廣東藥學(xué)院健康學(xué)院，廣東 廣州 510310

雞骨香提取物抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究

趙 杰 陳慧瑤 肖惠玲 葉依露 賴垚霖 黃總軍 楊金玉

廣東藥學(xué)院健康學(xué)院，廣東 廣州 510310

目的：研究雞骨香提取物的抗炎鎮(zhèn)痛作用。方法：采用二甲苯實(shí)驗(yàn)、毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)、角叉菜膠致大鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)觀察抗炎作用；采用醋酸扭體實(shí)驗(yàn)、熱板實(shí)驗(yàn)觀察鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果：雞骨香醇提物、水提物能抑制二甲苯致小鼠耳腫脹、醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加、角叉菜膠致大鼠足腫脹，醇提物作用顯著優(yōu)于水提物；醇提物能明顯延長醋酸致小鼠扭體反應(yīng)潛伏期，醇提物、水提物能減少醋酸致小鼠扭體次數(shù)、對(duì)小鼠熱板實(shí)驗(yàn)痛閾值無顯著影響。結(jié)論：雞骨香醇提物和水提物均有抗炎、抗外周性疼痛作用，醇提物的抗炎鎮(zhèn)痛作用優(yōu)于水提物。

雞骨香；抗炎；鎮(zhèn)痛

雞骨香為大戟科巴豆屬植物雞骨香Croton crassifolius Geisel.的干燥根，性溫、味苦，具有理氣止痛、祛風(fēng)除濕的功效。在嶺南民間常用雞骨香根水煎或泡酒治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、跌打損傷和黃疸等疾病［1－2］。迄今為止，雞骨香化學(xué)成分的研究較多，對(duì)活性部位的藥效學(xué)研究較少，本文對(duì)雞骨香不同提取物的抗炎鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行初步探討，為確定雞骨香活性部位／活性成分提供藥效學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥材及試劑 雞骨香購自廣東省藥材公司，經(jīng)廣東藥學(xué)院姜曉林副教授鑒定為雞骨香Croton crassifolius Geisel的干燥根；角叉菜膠（批號(hào)：132K1003：美國Sigma公司）；鹽酸噴他佐辛（批號(hào)：20110607，北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司）；吲哚美辛（批號(hào)20110215：廣東華南藥業(yè)集團(tuán)公司）；伊文思藍(lán)（批號(hào)：100118，美國Sigma公司，）。

1.2 動(dòng)物 SPF級(jí)ICR小鼠，體重18～22g；SPF級(jí)SD大鼠，體重180～220g，均由南方醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)2011－0054。

1.3 儀器 752N紫外可見分光光度計(jì)（上海菁華科技儀器有限公司）；201型酶標(biāo)儀（美國Sigma公司）；Almemo2390－5足腫脹度測(cè)定儀（深圳瑞沃德生命科技有限公司）；YLS－6A型智能熱板儀（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院）。

1.4 方法

1.4.1 雞骨香提取物制備 醇提物的制備：稱取雞骨香藥材1.5kg，粉碎后用10倍量的95%乙醇浸泡30min，回流提取3次，提取時(shí)間依次為2h、1h、45min，合并提取液，過濾，減壓濃縮回收溶劑，噴霧干燥，得醇提物干燥粉，用前用1%羧甲基纖維素鈉（CMC）溶液研磨、配制成所需濃度的混懸液。

水提物制備：醇提后剩余藥渣加10倍量水，加熱提取2次，分別為2h、1h，合并提取液，過濾，減壓濃縮，噴霧干燥，得水提物干燥粉，臨用前用1%CMC溶液研磨、配制成所需濃度的混懸液。

1.4.2 二甲苯實(shí)驗(yàn)［2］取小鼠60只，隨機(jī)分為六組：模型對(duì)照組、吲哚美辛組、雞骨香醇提物高、低劑量組、水提物高、低劑量組，每組10只，雌雄各半。按表1劑量灌胃給藥，模型對(duì)照組給予等容積1%CMC溶液，1次／d，連續(xù)給藥5d。末次給藥后30min，取二甲苯30μl均勻涂于小鼠右耳前后兩面，30min后將小鼠頸椎脫臼處死，剪下左右耳廓，用直徑7mm打孔器于左右耳同一部位打下圓耳片，稱重，以左右耳片質(zhì)量之差為腫脹度，計(jì)算腫脹度抑制率。1.4.3 毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)［2］取小鼠60只，隨機(jī)分為六組，每組10只，雌雄各半，動(dòng)物分組及給藥方法同“1.4.2”。末次給藥30min后給予小鼠尾靜脈注射0.6%伊文思藍(lán)溶液10ml／kg，隨即腹腔注射0.6%冰醋酸10ml／kg，30min后脫臼處死，打開腹腔，用5m l生理鹽水洗滌腹腔，吸出洗滌液，合并，3000r／min離心15min，取上清液于595nm波長處測(cè)定吸收度A值，計(jì)算抑制率。

1.4.4 角叉菜膠致大鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)［3］取大鼠48只，隨機(jī)分為六組，每組8只，雌雄各半，分組及給藥方法同“1.4.2”，末次給藥后30min，于右后足皮下注射1%角叉菜膠生理鹽水溶液0.1ml，分別在致炎前和致炎后1、4、6h用足腫脹儀測(cè)量足爪容積，以致炎前后足爪容積的差值表示腫脹度。

1.4.5 醋酸扭體實(shí)驗(yàn)［4］取小鼠60只，隨機(jī)分為六組，每組10只，雌雄各半，動(dòng)物分組給藥方法同“1.4.2”，末次給藥后30min，小鼠腹腔注射0.6%冰醋酸溶液10ml／kg，記錄小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的潛伏期以及20min內(nèi)小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)。

1.4.6 熱板實(shí)驗(yàn)［4］將雌性小鼠置于預(yù)熱（55±0.5）℃熱板儀，以小鼠舔后足潛伏期為痛閾指標(biāo)，實(shí)驗(yàn)前篩選出60只痛閾值在5～30s小鼠為合格小鼠，隨機(jī)分為六組，每組10只，雌雄各半，動(dòng)物分組給藥方法同“1.4.2”，按表5劑量灌胃給藥，空白對(duì)照組給予等容積1%CMC溶液，首次給藥前測(cè)痛閾值2次，間隔5min，取其平均值作為基礎(chǔ)痛閾值，為防止足部燙傷，設(shè)定60s為截止時(shí)間，超過60s記做痛閾值為60s，然后按表5給藥，記錄末次給藥后30、60min動(dòng)物熱板痛閾值。

1.4.7 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以 （）表示，均數(shù)比較用One－way ANOVA分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響 與模型對(duì)照組比較，醇提物、水提物高劑量能明顯抑制二甲苯致小鼠耳腫脹，醇提物高劑量作用與吲哚美辛相當(dāng)；醇提物高劑量組與水提物高劑量組比較，耳腫脹度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，醇提物低劑量組的耳腫脹抑制率高于水提物低劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.2 對(duì)醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加的影響 與模型對(duì)照組比較，醇提物能抑制小鼠毛細(xì)血管通透性的增加；水提物高劑量有明顯抑制作用（P＜0.05），但低劑量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與水提物組比較，醇提物組抑制作用更強(qiáng) （P＜0.05），見表2。

表1 雞骨香提取物對(duì)小鼠耳腫脹的影響s，n＝10）

表1 雞骨香提取物對(duì)小鼠耳腫脹的影響s，n＝10）

注：與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與水提物組比較，△P＜0.05。

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表2 雞骨香提取物對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加的影響 （，n＝10）

表2 雞骨香提取物對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加的影響 （，n＝10）

注：與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與水提物組比較，△P＜0.05。

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表3 雞骨香提取物對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響（，n＝8）

表3 雞骨香提取物對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響（，n＝8）

與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與水提物組比較，△P＜0.05。

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表4 雞骨香提取物對(duì)醋酸致小鼠扭體實(shí)驗(yàn)的影響 （，n＝10）

表4 雞骨香提取物對(duì)醋酸致小鼠扭體實(shí)驗(yàn)的影響 （，n＝10）

與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

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2.3 對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響 角叉菜膠致炎后，模型對(duì)照組、水提物組足腫脹度持續(xù)增加，醇提物組于4h時(shí)足腫脹度達(dá)到高峰，隨后開始下降。與模型對(duì)照組比較，致炎后1h，各組腫脹度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；4h時(shí)醇提物高劑量、水提物高劑量有明顯抑制作用；6h時(shí)，醇提物以及水提物高劑量能抑制足腫脹，醇提物作用比水提物強(qiáng)（P＜0.05），見表3。

2.4 對(duì)醋酸致小鼠扭體實(shí)驗(yàn)的影響 與模型對(duì)照組比較，醇提物高劑量能明顯延長醋酸致小鼠扭體潛伏時(shí)間；醇提物、水提物高劑量能減少小鼠扭體次數(shù)，醇提物、水提物作用比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表4。

2.5 對(duì)熱板實(shí)驗(yàn)的影響 各組基礎(chǔ)痛閾值比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與空白對(duì)照組比較，噴他佐辛在30，60min時(shí)痛閾值均明顯延長（P＜0.01），其余各實(shí)驗(yàn)組均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表5。

表5 雞骨香提取物對(duì)熱板實(shí)驗(yàn)小鼠痛閾值的影響 （，n＝10）

表5 雞骨香提取物對(duì)熱板實(shí)驗(yàn)小鼠痛閾值的影響 （，n＝10）

注：與空白對(duì)照組比較，**P＜0.01。

／sec空白對(duì)照組別 劑量／mg·kg－1 基礎(chǔ)痛閾值／sec 30min痛閾值／sec 60min痛閾值21.61±1.32 22.56±2.55 22.39±2.93噴他佐辛 10 21.52±0.89 30.06±5.15** 36.73±4.85**醇提物 180 21.20±1.46 24.61±5.57 23.71±1.49 90 21.26±1.20 23.71±3.90 23.70±3.83水提物 240 21.29±1.61 21.47±2.60 22.99±4.85－120 22.38±1.79 23.56±4.93 24.29±2.63

3 討論

炎癥是人類疾病最常見的病理過程，從民間的天然藥用資源中尋找抗炎藥物是發(fā)現(xiàn)與創(chuàng)制新藥的重要途徑之一。二甲苯致小鼠耳腫脹、醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加以及角叉菜膠致大鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)為三個(gè)經(jīng)典的急性炎癥模型；熱板實(shí)驗(yàn)用以評(píng)價(jià)中樞性鎮(zhèn)痛藥的效果，而醋酸扭體實(shí)驗(yàn)則常用以評(píng)價(jià)藥物外周性鎮(zhèn)痛作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明雞骨香醇提物、水提物確有抗炎、抗外周性疼痛作用，但醇提物抗炎鎮(zhèn)痛作用顯著優(yōu)于水提物，為雞骨香活性部位的篩選奠定了基礎(chǔ)，亦為其臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會(huì).中國植物志 （第一版）［M］.北京：科學(xué)出版社，2010：130.

［2］Xue M，Jiang ZZ，Liu JP，etal.Comparative study on the anti－inflammatory and immune suppressive effect of Wilforlide A［J］.Fitoterapia，2010，81（8）：1109－1112.

［3］Whittle BA.The use of changes in capillary permeability inmice to distinguish between narcotic and nonnarcotic analgesics［J］.Br J Pharmacol Chemother，1964，22（1）：246－253.

［4］Zhao Jie，F(xiàn)ang Fang，Yu Linzhong，et al.Anti－nociceptive and anti－inflammatory effects of Croton crassifolius ethanol extract［J］.J Ethno pharmacol，2012，142（2）：367－373.

Anti－inflammatory and anti－nociceptive effects of Croton crassifolius extract

ZHAO Jie CHEN Huiyao XIAO Huiling YE Yilu LAIYaolin HUANG Zhongjun YANG Jinyu
College of Health Science，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510310，China

Objective To observe the anti－inflammatory and anti－nociceptive effects of Croton crassifolius extract.M ethods Anti－inflammatory effectswere assessed by threemodels：xylene－induced ear swelling inmice，acetic acid－induced capillary permeability accentuation in mice and carrageenan－induced edema of the hind paw in rats.Anti－nociception was evaluated inmice using a hot－plate testand an acetic acid－induced writhing test.Results Compared with themodel group，C.crassifolius showed the inhibitory effecton xylene－induced ear swelling inmice，suppressed acetic acid－induced capillary permeability accentuation inmice and carrageenan－induced paw edema.C.crassifolius showed no significantanti－nociceptive activity in the hot－plate test，however，it significantly reduced acetic acid－induced writhing，the ethanol extract also prolonged writhing latency.Conclusion C.crassifolius demonstrates significant anti－inflammatory and peripheral anti－nociceptive effects，the effects of ethanol extractwere better than thatofwater extract.

Croton crassifolius；Anti－inflammatory；Anti－nociceptive

R285.5

A

1007－8517（2015）12－0008－03

2015.04.19）

廣東藥學(xué)院科技處－附屬第一醫(yī)院聯(lián)合自然科學(xué)培育基金項(xiàng)目（No：GYFYLH201327）；廣東省中醫(yī)藥局項(xiàng)目（No：20141161）；廣東藥學(xué)院2014年學(xué)生課外科技項(xiàng)目（No：13）。

趙杰，女，博士，研究方向：抗炎藥效研究，E-mail：zhaojie6389＠163.com.