張 鋒 宋張駿 陸建榮 汪存濤 陳 楠 韓丕華

·基礎(chǔ)研究·

乳腺癌手術(shù)前后血液中Rab5a基因表達(dá)與其預(yù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)性

張 鋒 宋張駿 陸建榮 汪存濤 陳 楠 韓丕華

目的探討乳腺癌手術(shù)前后血液中Rab5a基因的表達(dá)與預(yù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)性。方法選擇乳腺癌患者100例，予乳腺單純切除術(shù)或乳腺癌改良根治術(shù)，檢測手術(shù)前后血液中Rab5a基因的表達(dá)情況，隨訪調(diào)查術(shù)后復(fù)發(fā)情況。結(jié)果100例患者術(shù)前Rab5a基因表達(dá)陽性67例，陽性率為67.0%。Rab5a基因陽性表達(dá)與術(shù)前乳腺癌患者的T分期、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有明顯相關(guān)性(P<0.05)。在術(shù)后6個(gè)月進(jìn)行隨訪，復(fù)發(fā)16例，復(fù)發(fā)率為16.0%。Spearman等級相關(guān)分析顯示Rab5a基因表達(dá)與預(yù)后復(fù)發(fā)存在明顯的正向相關(guān)性(γ=0.459,P<0.05)。多元回歸logistic分析顯示腫瘤T分期、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與Rab5a基因表達(dá)是影響乳腺癌患者預(yù)后復(fù)發(fā)的主要獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。結(jié)論Rab5a基因在乳腺癌中呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，與T分期、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性，能影響術(shù)后患者的復(fù)發(fā)。

乳腺癌；復(fù)發(fā)；Rab5a基因；相關(guān)性

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:1581～1583)

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，北方的發(fā)病率多于南方，近年來國內(nèi)乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升且發(fā)病年齡更趨年輕化的趨勢[1]。目前認(rèn)為乳腺癌的病因包括遺傳、 吸煙、飲酒、空氣污染等因素有關(guān)，隨著醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)的提高，乳腺癌多在早期就可以被檢出，但是死亡率一直沒有明顯降低[2-3]。研究顯示，早期乳腺癌治療后的五年生存率為75%左右，主要死亡原因是術(shù)后復(fù)發(fā)，從而影響患者生命健康和生活質(zhì)量[4-5]。任何腫瘤的發(fā)生與發(fā)展涉及多中心、多環(huán)節(jié)、多通路，目前乳腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制研究逐漸受到重視[6]。Rab5a蛋白是囊泡運(yùn)輸?shù)脑缙谛?yīng)蛋白，參與胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸、蛋白分選,與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、受體下調(diào)、病原體吞噬、細(xì)胞遷移及腫瘤侵襲性等密切相關(guān)[7-8]。本文旨在探討乳腺癌手術(shù)前后血液中Rab5a基因的表達(dá)與預(yù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)性，為乳腺癌的生物治療策略提供理論依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

2013年7月到2014年7月在我院接受治療的乳腺癌患者100例，納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前經(jīng)活組織病理學(xué)檢查確診為乳腺癌；年齡<70歲；預(yù)計(jì)生存期大于6個(gè)月；具有手術(shù)指征，行乳腺單純切除術(shù)或乳腺癌改良根治術(shù)；患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并嚴(yán)重內(nèi)外科疾病或多器官功能衰竭、重度營養(yǎng)不良；既往惡性腫瘤病史者；標(biāo)本損壞患者。年齡23～69歲，平均年齡(51.33±6.33)歲；病理類型：浸潤性導(dǎo)管癌73例，導(dǎo)管內(nèi)癌12例，髓樣癌5例，浸潤性小葉癌10例。T分期：T1 期34例，T2 期56例，T3 期10例；組織學(xué)分級：Ⅰ級(高分化)20例，Ⅱ級(中分化)60例，Ⅲ級(低分化)20例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：轉(zhuǎn)移40例，未轉(zhuǎn)移60例。

1.2 標(biāo)本取材

根據(jù)患者分期予乳腺單純切除術(shù)或乳腺癌改良根治術(shù)，據(jù)診療規(guī)范相應(yīng)的病例選擇術(shù)后化療及放療。選擇瘤體組織與瘤旁組織進(jìn)行取材，新鮮標(biāo)本立即用10%甲醛固定，石蠟包埋得到標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 血液中Rab5a基因的表達(dá)

所有患者在手術(shù)前后采集空腹靜脈血5～10 ml，4 ℃下3 000 rpm/min離心10 min，取上層血清。采用RT-PCR方法檢測Rab5a基因的表達(dá)情況，每次檢測均設(shè)陰性和陽性對照，陽性對照：用已知Rab5a基因的表達(dá)PCR實(shí)驗(yàn)作對照及做預(yù)試驗(yàn)。陰性對照：用不表達(dá)Rab5a基因的樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。嚴(yán)格按照RT-PCR試劑盒要求步驟進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS 14.00軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用χ2檢驗(yàn)分析Rab5a表達(dá)水平與乳腺癌患者相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系，相關(guān)等級資料對比采用軼和檢驗(yàn)，P<0.05代表差異顯著。單因素分析及多因素分析均采用Spearman等級相關(guān)分析與logistic回歸分析。

2 結(jié)果

2.1 Rab5a基因表達(dá)情況

經(jīng)過RT-PCR分析，100例患者術(shù)前Rab5a基因表達(dá)陽性67例，陽性率為67.0%。

2.2 Rab5a基因表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性

經(jīng)過判定，Rab5a基因陽性表達(dá)與術(shù)前乳腺癌患者的T分期、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性(P<0.05)，見表1。

表1 Rab5a基因陽性表達(dá)與乳腺癌病理特征的相關(guān)性/例

2.3 預(yù)后情況

所有患者都順利完成手術(shù)，在術(shù)后6個(gè)月進(jìn)行隨訪，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移16例，其中局部復(fù)發(fā)5例，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移11例，復(fù)發(fā)率為16.0%。同時(shí)在術(shù)后6個(gè)月對所有患者進(jìn)行Rab5a基因表達(dá)檢測，陽性12例，陽性率為12.0%，而復(fù)發(fā)患者中Rab5a基因表達(dá)陽性為11例，陽性率為68.9%。

2.4 Rab5a基因表達(dá)與預(yù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)性

經(jīng)過Spearman等級相關(guān)分析，Rab5a基因表達(dá)與預(yù)后復(fù)發(fā)存在明顯正向相關(guān)性(γ=0.459,P<0.05)，見表2。

表2 Rab5a基因表達(dá)與乳腺癌預(yù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)性/例

2.5 影響預(yù)后復(fù)發(fā)的多因素分析

在多元回歸logistic分析中，把乳腺癌患者的臨床資料、Rab5a基因表達(dá)情況作為自變量，把預(yù)后復(fù)發(fā)作為因變量，結(jié)果顯示T分期、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與Rab5a基因表達(dá)是影響其預(yù)后復(fù)發(fā)的主要獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表3。

3 討論

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率逐年提高[9]。具有局部浸潤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的能力是惡性腫瘤最重要的特點(diǎn)并且是其致患者死亡的主要原因，腫瘤的局部浸潤與轉(zhuǎn)移在腫瘤轉(zhuǎn)移的每一個(gè)環(huán)節(jié)上都有不同的作用因素，也涉及到不同基因的參與[10]。Rab5a是1種原癌基因，基因的突變或表達(dá)異常導(dǎo)致其編碼蛋白數(shù)量或功能異常可引起細(xì)胞生長調(diào)控紊亂，最終導(dǎo)致細(xì)胞癌變。目前發(fā)現(xiàn)Rab5a蛋白表達(dá)于肺臟、腦、肌肉、骨髓、胸腺、脾臟、胰腺心臟、肝臟、前列腺和腎臟等組織中[11]。Rab5a蛋白的一級結(jié)構(gòu)通過螺旋和片層相互折疊圍繞而形成近似球形的空間結(jié)構(gòu)，Rab5a蛋白的獨(dú)特結(jié)構(gòu)與其功能密切相關(guān)。

表3 影響預(yù)后復(fù)發(fā)的多因素分析

本研究中經(jīng)過RT-PCR分析，100例乳腺癌患者術(shù)前Rab5a基因表達(dá)陽性67例，陽性率為67.0%，也表明Rab5a基因在乳腺癌中呈現(xiàn)高表達(dá)狀況。而Rab5蛋白為RAB家族成員之一，作為細(xì)胞內(nèi)囊泡運(yùn)輸?shù)恼{(diào)控因子，結(jié)合GTP時(shí)表現(xiàn)出GTP酶的活性，調(diào)節(jié)早期囊泡的形成、運(yùn)輸，參與膜成分的運(yùn)輸及分選。Rab5a蛋白的功能異?？墒股L因子持續(xù)作用于細(xì)胞，引起細(xì)胞增生，形成腫瘤[12]。Rab5a基因已經(jīng)在多個(gè)其它腫瘤中證實(shí)為腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因，并且是與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。相關(guān)研究表明Rab5a在具有高轉(zhuǎn)移潛能的肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)nip973中高表達(dá)，并且在轉(zhuǎn)移的非小細(xì)胞肺癌組織和轉(zhuǎn)移灶中均有不同程度的表達(dá)，且轉(zhuǎn)移程度越高表達(dá)越強(qiáng)[13]。本研究顯示Rab5a基因陽性表達(dá)與術(shù)前乳腺癌患者的T分期、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有明顯相關(guān)性(P<0.05)。也有研究顯示Rab5a基因在宮頸良性病變組織中表達(dá)最低，隨著宮頸病變惡性程度的增加和浸潤轉(zhuǎn)移的發(fā)生，其表達(dá)量呈上升趨勢。

早期乳腺癌的治療效果均比較好，但是在術(shù)后6個(gè)月內(nèi)，有約10.0%的患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。而細(xì)胞癌變的多基因協(xié)同理論認(rèn)為至少有兩個(gè)或兩個(gè)以上功能不同的癌基因的激活才會(huì)引起細(xì)胞的癌變，乳腺癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素多步驟逐漸累積的過程。本研究所有患者都順利完成手術(shù)，在術(shù)后6個(gè)月進(jìn)行隨訪，復(fù)發(fā)16例，復(fù)發(fā)率為16.0%。Spearman等級相關(guān)分析，Rab5a基因表達(dá)與預(yù)后復(fù)發(fā)存在明顯的正向相關(guān)性(γ=0.459,P<0.05)。有學(xué)者研究顯示Rab5a基因在人大腸癌細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移特性的形成中具有重要的作用。在胃癌中也發(fā)現(xiàn)此基因的表達(dá)與胃癌的分化程度及轉(zhuǎn)移程度有關(guān)[14]。Rab5a蛋白可參與膜成分的分選，調(diào)節(jié)早期囊泡的形成、運(yùn)輸，Rab5a蛋白的激活依賴于EGFR羧基端的酪氨酸殘基，Rab5a蛋白可能是調(diào)控受體內(nèi)化和某些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的中間環(huán)節(jié)，從而對于術(shù)后復(fù)發(fā)有一定的影響[15-16]。本研究多元回歸logistic分析顯示T分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與Rab5a基因表達(dá)是影響乳腺癌患者預(yù)后復(fù)發(fā)的主要獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。也表明乳腺癌的復(fù)發(fā)與基因密切相關(guān)，癌基因的激活和抑癌基因的失活在乳腺癌的復(fù)發(fā)中起著重要的作用。

總之，Rab5a基因在乳腺癌中呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，T分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有明顯相關(guān)性，能影響術(shù)后患者的復(fù)發(fā)。

[1] 谷新悅,查尼爾,張 明,等.Rab5A與CD44v9在乳腺癌組織中的表達(dá)及其相關(guān)性〔J〕.實(shí)用腫瘤學(xué)雜志,2012,26(2):125-130.

[2] Frittoli E,Palamidessi A,Marighetti P,et al.A RAB5/RA- B4 recycling circuitry induces a proteolytic invasive program and promotes tumor dissemination〔J〕.J Cell Biol,2014,206(2):307-328.

[3] 劉 鉞,李志高.Rab5A與CXCR4在乳腺癌組織中的表達(dá)及其相關(guān)性〔J〕.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2012,19(5):2585-2586.

[4] 李慧慧,馬 飛,曾 瑄,等.乳腺癌HER-2的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系〔J〕.中華醫(yī)學(xué)雜志,2011，91(2):66-67.

[5] 楊志慧,李桂梅,曹曉卉,等.HER-2基因在乳腺癌中臨床意義的探討〔J〕.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2012,28(8):112-114.

[6] 張大川,耿敬姝,林 晶,等.RAB5A、CD44v9在乳腺癌中的表達(dá)及其關(guān)系〔J〕.實(shí)用腫瘤學(xué)雜志,2010,24(2):163-165.

[7] 徐 廣,王明玉.乳腺癌組織中FAK與Her-2的表達(dá)及臨床意義〔J〕.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2008,2(2):99-101.

[8] 查尼爾,李志高,谷新悅,等.RNAi沉默Rab5a基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞MCF-7侵襲能力的影響〔J〕.實(shí)用腫瘤學(xué)雜志,2010,24(3):212-216.

[9] 陳金璋,張繼平,殷憲剛,等.乳腺浸潤性大汗腺癌雌激素受體、孕激素受體和人表皮生長因子受體2的表達(dá)〔J〕.蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2011,36(8):67-68.

[10] Zwaenepoel O,Tzenaki N,Vergetaki A,et al.Functional C- SF-1 receptors are located at the nuclear envelope and activated via the p110δ isoform of PI 3-kinase〔J〕.FASEB J,2012,26(2):691-706.

[11] 陳 前,劉維燕,趙 縝,等.Rab5a和APPL1在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義〔J〕.中華腫瘤雜志,2012,34(11):838-841.

[12] Pan Y,Wang R,Zhang F,et al.MicroRNA-130a inhibits cell proliferation,invasion and migration in human breast cancer by targeting the RAB5A〔J〕.Int J Clin Exp Pathol,2015,8(1):384-393.

[13] 丁小崇,任書偉.早期乳腺癌保乳術(shù)與改良根治術(shù)的療效對比〔J〕.中國實(shí)用醫(yī)刊,2014,41(9):124-125.

[14] 孟令華,劉 巍,宋麗楠,等.BCSG1、C-erbB-2、VEGF表達(dá)與乳腺癌臨床病理因素相關(guān)性研究〔J〕.中華乳腺病雜志(電子版),2007,1(4):82-89.

[15] 徐 蕾,白中紅,許軟成,等.Her-2、EGFR、PS-2、ER在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2006，26(2):89-91.

[16] 袁 禮,吳煥文,任新瑜,等.三陰乳腺癌與非三陰乳腺癌臨床病理特征差異及與雌激素受體β和表皮生長因子受體表達(dá)的關(guān)系〔J〕.協(xié)和醫(yī)學(xué)雜志,2015,6(1):1-8.

(編輯：吳小紅)

Relation between Prognosis and Recurrence and Blood Rab5a Gene Expression in Breast Cancer before and after Surgery

ZHANGFeng,SONGZhangjun,LUJianrong,etal.

Objective To investigate the relation between prognosis and recurrence and blood Rab5a gene expression in breast cancer before and after surgery.Methods 100 cases of breast cancer

simple mastectomy or modified radical mastectomy,the expression of Rab5a gene in the blood before and after operation were detected and postoperative relapse was followed up.Results Before surgery,Rab5a gene positive expression were 67 cases,and positive rate was 67.0%.The positive expression of Rab5a gene had obvious relation with T stage,histological grade,lymph node metastasis of breast cancer before operation.After 6 months of followed-up,16 cases had recurrence,the recurrence rate was 16.0%.Spearman rank correlation analysis showed that the Rab5a gene expression was positively correlated with prognosis and recurrence (γ=0.459,P<0.05).Multivariate logistic regression analysis showed that T stage,histological grade,Rab5a gene expression and lymph node metastasis in breast cancer were the major independent risk factors for prognosis and recurrence (P<0.05).Conclusion Rab5a gene has high expression levels in breast cancer,it is related with T stage,histological grade,and lymph node metastasis,and it can affect recurrence after surgery.

Breast cancer;Recurrence;Rab5a gene;Correlation

社會(huì)發(fā)展攻關(guān)計(jì)劃(編號(hào)：2014k11-01-01-05)

710061 陜西省腫瘤醫(yī)院

10.3969/j.issn.1001-5930.2015.11.001

R737.9

A

1001-5930(2015)11-1581-03

2015-03-29

2015-08-31)

ShanxiTumorHospital,Xi'an,710061