黃孟啟，陳愛增，蔡文品

(1.蒼南縣第三人民醫(yī)院 檢驗科，浙江 溫州 325804；2.溫州市中醫(yī)院 檢驗科，浙江 溫州 325000)

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博寧霉素對宮頸人乳頭瘤病毒感染患者L1殼蛋白表達及血清免疫因子水平的影響

黃孟啟1，陳愛增1，蔡文品2Δ

(1.蒼南縣第三人民醫(yī)院 檢驗科，浙江 溫州 325804；2.溫州市中醫(yī)院 檢驗科，浙江 溫州 325000)

目的 探討博寧霉素對宮頸人乳頭瘤病毒感染L1殼蛋白的表達及其免疫效果。方法 選取宮頸人乳頭瘤病毒感染患者60例，根據(jù)用藥不同分為實驗組和對照組，每組各30例，對照組患者給予重組人干擾素α2b，10萬IU/次，隔天1次，經(jīng)期停用；實驗組患者給予博寧霉素300 mg肌肉注射，隔天1次。治療10次為1個療程，連續(xù)2個療程。治療結(jié)束后比較患者HPVL1殼蛋白，血清TNF-α、IL-2、IFN-α水平以及HPV的陽性率。結(jié)果 治療后，與對照組比較，實驗組患者 HPVL1殼蛋白百分比明顯上升(P<0.05)，實驗組患者TNF-α、IFN-α水平升高(P<0.05)，IL-2水平降低(P<0.05)，實驗組患者HPV的陽性率降低(P<0.05)。結(jié)論 博寧霉素能夠降低宮頸人乳頭瘤病毒感染患者L1殼蛋白百分比，升高血清TNF-α、IFN-α水平，降低IL-2水平，降低HPV的陽性率。

博寧霉素；人乳頭瘤病毒；L1殼蛋白；免疫功能

人乳頭瘤病毒(human papilloma virus，HPV)只能以人類為宿主，是一種在自然界廣泛存在，與皮膚以及粘膜的增生性病變均有密切關(guān)系的無包膜雙鏈環(huán)狀DNA病毒，分子呈雙鏈環(huán)狀，屬乳頭多瘤空泡病毒科[1]。有報道顯示[2]，近年來宮頸HPV感染的發(fā)病率逐年上升，且被感染患者的年齡趨于年輕化。研究表明[3]，HPV感染是宮頸癌發(fā)生的必要條件，因此受到了廣泛關(guān)注，預(yù)防HPV感染已經(jīng)升級為宮頸癌預(yù)防的二級措施。目前對于HPV感染的治療手段主要包括冷凍、藥物干預(yù)以及手術(shù)等方法，但這些方法治療造成的并發(fā)癥以及副作用較多，且應(yīng)用手術(shù)治療對人體必然有一定的侵襲性，患者不易接受[4]。博寧霉素[5]是分離爭光霉素的復合物得到的新化合物，其主要成分在臨床上被廣泛用作抗腫瘤藥，在臨床上主要用于HPV感染的治療。有研究表明[6]，其在治療尖銳濕疣等疾病的療效顯著，但其機制尚不明確，且對于宮頸HPV感染的研究尚少，因此本研究通過探討博寧霉素對宮頸人乳頭瘤病毒感染L1殼蛋白的表達及其免疫效果，對臨床博寧霉素的廣泛應(yīng)用提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集蒼南縣第三人民醫(yī)院2014年6月～2015年1月收治的宮頸人乳頭瘤病毒感染女性患者60例，按照隨機數(shù)字表隨機分為2組，即實驗組和對照組，每組各30例。所有患者均符合宮頸HPV感染診斷標準。2組患者一般資料相比差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。所有患者均同意進行試驗措施，并簽署知情同意書。

1.2 納入標準 所有患者符合《婦產(chǎn)科抗生素使用指南》解讀[7]中宮頸人乳頭瘤病毒的亞臨床感染診斷標準：宮頸病理組織及陰道鏡檢查可見組織發(fā)生改變；TCT結(jié)果為HPV陽性；所有患者均為女性，年齡在18～45歲之間；所有患者均為已有性生活；患者在進行試驗措施前2周均未進行過相關(guān)治療。

1.3 排除標準 排除病理檢查為重度非典型增生或?qū)m頸癌者；排除合并有嚴重的霉菌性、滴蟲性陰道炎的患者；排除有心腦血管疾病以及肝腎功能不全的患者；排除哺乳期及妊娠期女性；排除有精神疾病的患者；排除不接受實驗措施的患者。

1.4 方法

1.4.1 治療方法:按照臨床用藥指南，給予對照組患者重組人干擾素α2b，規(guī)格為10萬IU/枚，1次1枚，隔天1次，經(jīng)期停用；給予實驗組患者給予博寧霉素300 mg肌肉注射，隔天1次。治療均以10次為1個療程，連續(xù)2個療程。

1.4.2 HPVL1殼蛋白檢測:分別于實驗前后，患者采用截石位，使用窺陰器暴露宮頸，擦去宮頸表面及穹窿分泌物，以宮頸外口為中心，用子宮頸刷在鱗柱狀上皮交界處均勻地刷3～5下，取出宮頸刷立即置于細胞保存液中。嚴格按照制片說明書進行制片，染色，采用美國Advanced Medical Science公司的HPV L1試劑盒，嚴格按照說明書操作，HPVLl殼蛋白表達陽性以顯微鏡下閱片有1個被紅染的細胞核即可診斷，計算HPVLl殼蛋白陽性率。

1.4.3 血清TNF-α、IL-2、IFN-α水平檢測:所有患者分別于治療前后清晨空腹采集靜脈血5 mL，離心分離血清，-20℃條件下保存待檢，采用酶聯(lián)免疫吸附分析方法(ELISA)，檢測患者血清TNF-α、IFN-α以及IL-2水平(試劑盒購買于武漢博士的生物技術(shù)有限公司)，嚴格按照說明書進行操作。

1.4.4 液基薄層細胞檢測(thinprep cytology test，TCT):統(tǒng)計治療前后2組患者的HPV的陽性率。根據(jù)2001年的子宮頸/陰道細胞學診斷的TBS(The Bethesda System)系統(tǒng)，細胞學結(jié)果：①陰性：正常細胞以及組織細胞的良性改變；②陽性：各種程度的鱗狀上皮細胞異常，包括非典型鱗狀上皮細胞(atypical squamous cells of undetermined signification，ASCUS)陽性、低級別鱗狀上皮內(nèi)病變(low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL)陽性，高度鱗狀上皮內(nèi)病變(high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL)陽性 ；腺上皮的異常包括非典型腺細胞(atypical glandular cells，AGC)、非典型腺細胞(不能明確意義)(AGC-NOS)、宮頸腺原位癌(adenocarcinoma in situ，AIS)以及腺癌(adenocarcinoma，AC)。

2 結(jié)果

2.1 患者一般情況比較 2組患者的一般資料相比，差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性，見表1。

表1 2組患者一般情況Tab.1 Comparison of the baseline between two ±s)

2.2 HPVL1殼蛋白水平比較 與治療前相比，2組患者治療后HPVL1殼蛋白陽性百分比顯著升高(P<0.05)。治療后，與對照組相比，實驗組的HPVL1殼蛋白陽性百分比升高較為(P<0.05)，見表2。

表2 治療前后2組患者HPVL1殼蛋白陽性百分比比較±s，%)Tab.2 Comparison of positive rate HPVL1 between two ±s，%)

*P<0.05，與治療前相比，compared with before treatment；#P<0.05，與對照組相比，compared with control group

2.3 血清TNF-α、IL-2、IFN-α水平比較 與治療前相比，2組患者治療后血清TNF-α、IFN-α水平顯著升高，IL-2水平顯著降低(P<0.05)。治療后，與對照組相比，實驗組患者的TNF-α、IFN-α水平顯著升高，IL-2水平顯著降低(P<0.05)，見表3。

表3 治療前后2組患者TNF-α、IL-2、IFN-α水平比較Tab.

*P<0.05，與治療前相比，compared with before treatment；#P<0.05，與對照組相比，compared with control group

2.4 治療前后HPV的陽性率比較 與治療前相比，治療后2組患者的HPV陽性率明顯下降(P<0.05)。治療后，與對照組相比，實驗組患者的HPV陽性率下降較明顯(χ2=4.28，P<0.05)，見表4。

表4 治療前后2組患者HPV陽性率比較Tab.4 Comparison of HPV positive rate between two ±s，%)

3 討論

人乳頭瘤病毒與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)。根據(jù)統(tǒng)計，50 %的宮頸癌與HPV感染相關(guān)。持續(xù)慢性的HPV感染與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)[8]。研究表明，全世界每年約有6億女性感染HPV，其中部分患者能夠通過自身的免疫系統(tǒng)自愈，約10%的患者最終發(fā)展為宮頸癌[9]。因此，免疫系統(tǒng)功能的正常對HPV患者的康復尤為重要。找到能夠抑制HPV感染有關(guān)的免疫因子對于抑制其感染具有重要意義[10]。有研究表明[11-12]，TNF-α、IL-2、IFN-α等的水平與HPV感染患者的預(yù)后關(guān)系密切。同時，HPVL1殼蛋白作為HPV病毒的衣殼， 在病毒感染過程中也起到了重要作用。

本研究表明，治療后，2組患者的HPVL1殼蛋白陽性百分比明顯下降，與對照組相比，實驗組的HPVL1殼蛋白陽性百分比下降較為明顯(P<0.05)。HPVL1殼蛋白[13]是HPV病毒主要的衣殼蛋白，在病毒感染過程中，可精確的識別宿主細胞表面的蛋白受體。有研究表明[14]，HPVL1殼蛋白表達的強弱與患者宮頸損傷程度相關(guān)。當宮頸上皮的瘤變級別較低時，宮頸上皮處于良好的分化狀態(tài)，促使L1殼蛋白的表達；當宮頸組織處于嚴重損傷狀態(tài)時，上皮分化狀態(tài)較差，從而抑制Ll蛋白表達，使其表達缺失。L1殼蛋白的缺失可導致機體免疫功能的下降， 促進了疾病的發(fā)生。還有的研究表明[15]，在慢性的HPV感染過程中，病毒基因整合會伴有Ll基因的缺失，導致其表達量下降。此外，HPVL1殼蛋白對宮頸疾病的預(yù)后判斷也具有重要意義。

本研究表明，治療后，2組患者的血清TNF-α、IFN-α水平明顯升高，IL-2水平明顯降低，與對照組相比，實驗組患者的TNF-α、IFN-α水平明顯升高，IL-2水平明顯降低(P<0.05)。IL-2和INF-γ都是Thl細胞分泌的細胞因子，能夠介導細胞的免疫應(yīng)答[16]。Th2細胞參與體液免疫應(yīng)答，與Thl細胞互相制約，處于動態(tài)平衡狀態(tài)，當Thl向Th2偏移時，機體的免疫功能下降，促進腫瘤以及其他疾病的發(fā)生。故IL-2與TNF-α在宮頸HPV感染的發(fā)生起到了一定作用。IFN-α由白細胞分泌，能夠造成一系列干擾素調(diào)控基因表達，促進機體獲得抗病毒的能力[17]。因此，TNF-α、IL-2、IFN-α水平對于本病的轉(zhuǎn)歸具有非常重要的意義。

本研究通過探討博寧霉素對宮頸HPV感染患者HPVL1殼蛋白、血清TNF-α、IFN-α、IL-2水平以及患者HPV病毒陽性率的變化情況，證實了博寧霉素能夠抑制宮頸HPV感染的發(fā)展，且作用安全。在下一步研究中，本課題組將對本實驗得出的結(jié)論進行更加深入的研究和探討，為本實驗所得出的結(jié)論做出進一步論證。

[1] zur Hausen H,De Villiers EM.Human papilloma viruses[J].Ann.Rev.Micobiol,1994,48(1):427-447.

[2] 陳昕華，虞永麟.宮頸HPV感染，CIN及宮頸癌3年發(fā)生情況分析[J].中國婦幼保健，2011，26(13)：1945-1946.

[3] 鄧國華，張洵.人乳頭狀瘤病毒與宮頸癌[J].診斷病理學雜志，2009，16(6)：469-472.

[4] 趙小迎.藥物結(jié)合物理療法治療宮頸HPV感染臨床觀察[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，19(12)：737-739.

[5] 高寧.博寧霉素抗腫瘤和抗人乳頭瘤病毒作用機制的研究[D].北京協(xié)和醫(yī)學院，2011.

[6] 李新宇，高紀偉，徐蘭芳，等.鹽酸博寧霉素對人表皮角質(zhì)形成細胞，宮頸鱗癌細胞和表皮癌細胞增殖的影響[J].中國麻風皮膚病雜志，2009，25(4)：249-251.

[7] 劉朝暉.《婦產(chǎn)科抗生素使用指南》解讀[J].中國實用婦科與產(chǎn)科雜志，2012(7)：483-484.

[8] 王薇，馬丁.人乳頭狀瘤病毒持續(xù)感染與宮頸癌變相關(guān)的危險因素[J].中國腫瘤，2007，16(5)：316-319.

[9] 陳仲波.宮頸癌人乳頭瘤病毒基因型分布及與臨床病理關(guān)系的研究[D].浙江大學醫(yī)學院，2009.

[10] 楊友道，石建鳳.特異性生物治療對HPV患者免疫功能的影響及療效初探[J].實用醫(yī)技雜志，2006，13(3)：376-376.

[11] 焦立群，戴大江，張虎.檢測HBV和HCV重疊感染患者血清中TNF-α及IFN-γ水平的意義[J].標記免疫分析與臨床，2009，16(4)：261-262.

[12] 黃蓉.尖銳濕疣患者血清IL-8、IL-12、TNF-α、IFN-γ水平研究[D].四川大學，2004.

[13] 張海燕，歐雪峰，唐華貴，等.HPVL1衣殼蛋白，P16在宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變組織中的表達及其意義[J].海南醫(yī)學院學報，2012，18(5)：607-609.

[14] 梁媛哲.新疆婦女宮頸癌前病變中HPVL1殼蛋白表達與高危HPV型別的相關(guān)性研究[D].石河子大學，2014.

[15] 隋霜，尼牙孜瑪依努爾，朱開春.人乳頭狀瘤病毒DNA甲基化與宮頸癌的研究進展[J].中國病毒病雜志，2014(2)：155-160.

[16] 袁林，徐又先，陳靜，等.中藥二黃散對伴有HPV感染的CINⅠ患者宮頸局部微環(huán)境的影響[J].中藥藥理與臨床，2013，29(3)：187-189.

[17] Michelin MA,Montes L,Nomelini RS,et al.Helper T Lymphocyte Response in the Peripheral Blood of Patients with Intraepithelial Neoplasia Submitted to Immunotherapy with Pegylated Interferon-α[J].Int J Mol Sci,2015,16(3):5497-5509.

(編校：王儼儼)

Effect of boningmycin on expression of capsid protein L1 and serum immune factors in cervical HPV infection patients

HUANG Meng-qi1, CHEN Ai-zeng1,CAI Wen-jing2Δ

(1. Department of Inspection, Third People’s Hospital of Cangnan County, Wenzhou 325804, China; 2.Department of Laboratory, Wenzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine, Wenzhou 325000, China)

ObjectiveTo investigate the effect of boningmycin on expression of capsid protein L1 and serum immune factors in cervical HPV infection patients. Methods60 patients with cervical HPV infection were divided into experimental group and control group, 30 cases in each group. The control group were given recombinant human interferon α2b suppository, 100 000 IU, once every other day, and the experiment group were given boningmycin 300 mg intramuscular injection,once every other day.Treatment of 10 times for a course,2 consecutive courses After treatment, the HPV capsid protein L1, serum TNF-α, IL-2, IFN-α and HPV were compared.ResultsCompared with control group after treatment, the percentage of HPV capsid protein L1 increased (P<0.05), serum TNF-α, IFN-α levels increased(P<0.05), IL-2 decreased (P<0.05), and HPV positive rate decreased(P<0.05).ConclusionBoningmycin could reduce the percentage of capsid protein L1 in patients with cervical human papilloma virus infection, elevate serum TNF-α and IFN-α levels, reduce the level of IL-2 and HPV positive rate.

boningmycin; human papillomavirus; capsid protein L1; immune function

蒼南縣科技計劃項目(2013823)

黃孟啟，男，本科，主管檢驗師，研究方向：臨床檢驗，E-mail:hmqjyyx@163.com；蔡文品，通訊作者，男，本科，副主任技師，研究方向：醫(yī)學檢驗，E-mail:wenzhoucaiwjing@126.com。

R737.3

A

1005-1678(2015)06-0059-03