湯雅玲，冉靜，趙巖

(1.廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院 婦產(chǎn)科，福建 廈門 361003；2.廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院 中心實(shí)驗(yàn)室，福建 廈門 361003)

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宮頸癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)因子ZEB1與microRNA-200c的關(guān)系

湯雅玲1，冉靜1，趙巖2

(1.廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院 婦產(chǎn)科，福建 廈門 361003；2.廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院 中心實(shí)驗(yàn)室，福建 廈門 361003)

目的 探討宮頸癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)因子ZEB1與microRNA-200c水平及其意義。方法 選取2013年7月～2015年1月于廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院普外科已確診為宮頸癌的患者50例，取其腫瘤部位組織作為實(shí)驗(yàn)組，同期選取50例在本院行子宮肌瘤切除手術(shù)患者的子宮頸正常組織作為對(duì)照組，檢測(cè)2組患者子宮組織的ZEB1與microRNA-200c水平。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組ZEB1平均水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，在宮頸癌中是否淋巴轉(zhuǎn)移及深肌層浸潤組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組microRNA-200c平均水平低于對(duì)照組(P<0.05)；在宮頸癌中不同腫瘤病理分級(jí)組、是否淋巴轉(zhuǎn)移及深肌層浸潤組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組ZEB1與microRNA-200c呈負(fù)相關(guān)(r=-0.270，P=0.001)。結(jié)論 ZEB1在宮頸癌中表達(dá)水平較高，microRNA-200c在宮頸癌中表達(dá)水平降低，提示2者在宮頸癌的浸潤和侵襲轉(zhuǎn)移中可能起重要作用，2者之間的相關(guān)性提示microRNA-200c可能通過ZEB1參與宮頸癌上皮間質(zhì)化過程。

宮頸癌；ZEB1；microRNA-200c；腫瘤標(biāo)記物

宮頸癌(cervical cancer)是女性常見的惡性腫瘤，發(fā)病率占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中首位，目前已明確其發(fā)病原因與高危型HPV持續(xù)感染有關(guān)[1]。國際癌癥研究機(jī)構(gòu)于2012年對(duì)全球范圍內(nèi)的婦女新發(fā)癌癥進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，結(jié)果證實(shí)全球女性新發(fā)子宮頸癌病例約有528,000例;死亡人數(shù)約為266,000例[2]。而這龐大的新發(fā)病例和死亡數(shù)中約有85%都處在發(fā)展中國家的女性患者中。我國也是子宮頸癌的高發(fā)國家之一，每年有13.15萬新發(fā)病例[3]。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展以及廣泛婦科病普查的開展，宮頸癌的發(fā)病率及死亡率已有所降低，但其發(fā)病人群呈逐漸年輕化趨勢(shì)，仍是醫(yī)療工作者急需解決的問題。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 (epithelial mesenchymal transition,EMT)是指上皮細(xì)胞獲得成纖維細(xì)胞特性后所具備侵襲鄰近組織的能力，在腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移過程中具有重要意義，而ZEB1是調(diào)節(jié)EMT的重要因子之一，在大多數(shù)腫瘤中均有表達(dá)。微小RNA(microRNA)[4]是一種能與靶mRNA進(jìn)行特異性結(jié)合從而達(dá)到靶mRNA降解、抑制或活化目的的RNA，且能作為原癌基因或抑癌基因參與腫瘤的發(fā)生過程，并在腫瘤增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等進(jìn)展過程中起到重要作用。臨床對(duì)于腫瘤患者ZEB1表達(dá)雖有報(bào)道，但是對(duì)于宮頸癌患者ZEB1與microRNA-200c 2者的關(guān)系卻較為少見，本研究通過觀察比較正常人和宮頸癌患者ZEB1及microRNA-200c的變化，探討2者在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用，為宮頸癌患者的治療提供新的思路和方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例來源選擇2013年7月～2015年1月于廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤科確診為宮頸癌而收入院的50例患者切除的腫瘤組織作為實(shí)驗(yàn)組，包括宮頸鱗癌39例，宮頸腺癌11例；根據(jù)FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)為宮頸癌Ⅰb1期到Ⅱb期之間，患者術(shù)前均無放、化療史。同期選取50例在我院行子宮肌瘤切除手術(shù)患者的子宮頸正常組織作為對(duì)照組，2組研究對(duì)象的年齡均在28～70歲。其中實(shí)驗(yàn)組年齡23～69歲，平均年齡(40.15±6.14)歲；對(duì)照組年齡22～70歲，平均年齡(41.72±5.23)歲。

診斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)第八版《婦產(chǎn)科學(xué)》[5]中有關(guān)于宮頸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)而擬定以下納入標(biāo)準(zhǔn)：①不規(guī)則陰道流血、血性陰道排液等宮頸癌癥狀；②病理檢驗(yàn)確診為宮頸癌；③術(shù)前未接受過放、化療等治療者；④患者或其家屬同意并自愿參與本實(shí)驗(yàn)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①不愿參與本研究或不符合納入標(biāo)準(zhǔn)者；②既往患有精神神經(jīng)障礙疾病者；③患有乙肝、艾滋病等具有傳染性較強(qiáng)疾病者；④合并有嚴(yán)重肝、腎功能不全疾病患者；⑤患有心肌梗死、心力衰竭、肺心病、呼吸衰竭、嚴(yán)重血液病等重大原發(fā)疾病者；⑥并發(fā)其他腫瘤者；⑦年齡低于20歲或超過70歲者。

1.2 方法 通過觀察行子宮癌切除術(shù)后患者ZEB1、microRNA以及腫瘤標(biāo)志物的情況進(jìn)行比較研究。

組織標(biāo)本采集：標(biāo)本于離體半小時(shí)內(nèi)迅速取材，將癌組織或正常組織放入液氮中并及時(shí)放入-80 ℃冰箱保存。

ZEB1和microRNA水平測(cè)定：將上述組織分別放入液氮冷凍后的研缽中迅速研磨至粉末狀(研磨過程中不斷加入液氮以保證組織低溫狀態(tài))，將粉末放入EP管中，室溫下孵育5 min以使組織完全裂解后，12000 r/min，冷凍離心15 min，取其上清液。一部分上清液行ELISA法測(cè)定ZEB1濃度水平(試劑盒由廣東通蔚實(shí)業(yè)有限公司提供，其操作方法完全按照試劑盒說明書嚴(yán)格執(zhí)行)。余下上清液行實(shí)時(shí)定量PCR法測(cè)定microRNA-200c濃度。

2 結(jié)果

2.1 2組患者宮頸組織ZEB1水平比較 本研究中，實(shí)驗(yàn)組ZEB1平均水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在宮頸癌中ZEB1在不同病理分級(jí)、腫瘤大小之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在是否淋巴轉(zhuǎn)移及深肌層浸潤之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組患者宮頸組織ZEB1水平比較Tab.

*P<0.05，與同組比較，compared with the same group；#P<0.05，與對(duì)照組比較，compared with control group

2.2 2組患者宮頸組織microRNA-200c水平比較 本研究中，實(shí)驗(yàn)組microRNA-200c平均水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；microRNA-200c在不同腫瘤大小之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在不同病理分級(jí)，是否淋巴轉(zhuǎn)移及深肌層浸潤組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組患者宮頸組織microRNA-200c水平比較Tab.2 Comparison of microRNA-200c levels between two groups ±s)

*P<0.05，與同組比較，compared with the same group；#P<0.05，與對(duì)照組比較，compared with control group

2.3 microRNA-200c與ZEB1相關(guān)性分析 采用Spearman秩相關(guān)分析，對(duì)照組microRNA-200c與ZEB1無相關(guān)性，r=0.125，P=0.384，實(shí)驗(yàn)組microRNA-200c與ZEB1呈負(fù)相關(guān)，r=-0.270，P=0.001。見表3。

表3 microRNA-200c與ZEB1之間的相關(guān)分析Tab.3 Comparison of relationship between microRNA-200c and ZEB1

3 討論

宮頸癌是一種具有高發(fā)病率、高死亡率特點(diǎn)的女性高發(fā)惡性腫瘤，是世界性較為重要的公眾衛(wèi)生問題之一。其在女性人群中的發(fā)病率僅次于乳腺癌，發(fā)展中國家高于發(fā)達(dá)國家。研究證實(shí)[6]，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移過程中具有重要意義，而上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化因子ZEB1在大多數(shù)腫瘤患者體內(nèi)均有表達(dá)。microRNA-200c在腫瘤增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等進(jìn)展過程中具有重要作用，且研究表明，microRNA-200c在腫瘤組織中的表達(dá)與ZEB1表達(dá)具有負(fù)相關(guān)關(guān)系[7]，但是2者在宮頸癌組織中變化的關(guān)系臨床少見報(bào)道。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組織中ZEB1的水平與腫瘤病理分級(jí)、腫瘤大小無關(guān)，在是否淋巴轉(zhuǎn)移及深肌層浸潤組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究顯示[8]，EMT在惡性腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移細(xì)胞形成過程中可能發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用，而ZEB1是調(diào)節(jié)EMT的重要因子。另有文獻(xiàn)報(bào)道[9]，ZEB1在正常上皮細(xì)胞及分化較好的癌組織中并不表達(dá)或水平較低，但在子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌等癌組織侵襲前的腫瘤干細(xì)胞中大量表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步的研究顯示[10]，ZEB1能夠通過調(diào)節(jié)EMT達(dá)到促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的作用，從表1中可以看出，宮頸癌組織中ZEB1水平高低與是否局部浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有較大關(guān)系，其原因可能與ZEB1的高度表達(dá)能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞EMT，進(jìn)而與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。

從表2中可以看出，實(shí)驗(yàn)組microRNA-200c平均水平明顯低于對(duì)照組， microRNA-200c在不同病理分級(jí)，是否淋巴轉(zhuǎn)移及深肌層浸潤組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。研究發(fā)現(xiàn)[11]，microRNAs表達(dá)譜在各種腫瘤中均不相同，提示microRNAs有可能成為新的腫瘤標(biāo)記物，并應(yīng)用于臨床。Barrett食管上皮細(xì)胞中microRNA-200c表達(dá)低于正常的胃黏膜上皮，microRNA-200c的異常低表達(dá)與食管上皮異型增生以及食管癌的發(fā)生具有密切聯(lián)系，由此可見microRNA-200c可能具有抑癌基因的作用從而抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展[12]。在本研究中，microRNA-200c水平在低分化組低于高中分化組，深肌層浸潤性子宮癌中低于非深肌層浸潤性子宮癌，有淋巴轉(zhuǎn)移組低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.05)，其原因可能與microRNA-200c抑制宮頸癌發(fā)生進(jìn)展的作用有關(guān)。表3中可以看出，在宮頸癌組織中microRNA-200c與ZEB1之間存在負(fù)相關(guān)，提示microRNA-200c可以負(fù)性調(diào)節(jié)ZEB1功能，進(jìn)而抑制宮頸癌的EMT過程，阻止宮頸癌的發(fā)生發(fā)展。

本研究通過對(duì)50例宮頸癌患者腫瘤組織內(nèi)microRNA-200c、ZEB1水平進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)了microRNA-200c、ZEB1水平與宮頸癌的關(guān)系，2者在宮頸癌中的負(fù)相關(guān)性，提示EMT過程在宮頸癌的浸潤和轉(zhuǎn)移中起到重要作用，而microRNA200c可能對(duì)EMT起調(diào)節(jié)作用，為宮頸癌的發(fā)病機(jī)制提供新思路，為宮頸癌治療提供可能的新靶點(diǎn)。在未來的研究中，我們將對(duì)擴(kuò)大樣本量，在體外實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中進(jìn)一步探究microRNA-200c和ZEB1影響宮頸癌EMT過程的具體分子機(jī)制，為本實(shí)驗(yàn)所得出的結(jié)果做出進(jìn)一步的論證和分析。

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(編校：譚玲)

Relationship between microRNA-200c and ZEB1 of epithelial mesenchymal transition factor in cervical cancer

TANG Ya-ling1, RAN Jing1, ZHAO Yan2

(1. Department of Obstetrics and Gynecology, The First Affiliated Hospital of Xiamen University, Xiamen 361003, China; 2. Center Laboratory, The First Affiliated Hospital of Xiamen University, Xiamen 361003, China)

ObjectiveTo investigate relationship between microRNA-200c and ZEB1 in cervical epithelial mesenchymal transition factor.Methods50 cases diagnosed with cervical cancer whose tumor tissue were taken to be the experiment group.50 cases diagnosed with uterine myoma whose normal tissue were taken to be the control group.ZEB1 and microRNA-200c of uterine tissue were were detected.ResultsThe average level of ZEB1 in the experimental group was significantly higher than that of the control group (P<0.05), and in cervical cancer, lymph node metastasis and the depth of myometrial invasion had statistically significant (P<0.05). In experimental group, microRNA-200c average was lower than control group(P<0.05), and in cervical cancer, different pathological grade group, lymph node metastasis and deep muscular layer infiltration had statistically significant(P<0.05). In experimental group, ZEB1 and microRNA-200c showed negative correlation(r=-0.270P=0.001). ConclusionThe expression level of ZEB1 in cervical cancer is higher, and the expression level of microRNA-200c in cervical cancer is lower, suggesting that the two factors may play an important role in the invasion and metastasis of cervical cancer. The correlation between the two factors suggests that microRNA-200c may be involved in the process of cervical cancer by ZEB1.

cervical cancer; ZEB1; microRNA-200c; tumor markers

湯雅玲，女，碩士，副主任醫(yī)師，研究方向：婦科腫瘤，E-mail：applesouphyl@sina.com。

R737.3

A

1005-1678(2015)06-0095-03