吳占慶，馬強(qiáng)，高玉風(fēng)

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院 腹部外科，青海 西寧 810001)

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重組人血管內(nèi)皮抑制素聯(lián)合肝動(dòng)脈化療栓塞后肝癌患者血清VEGF、HIF-1α、OPN、CTGF水平變化

吳占慶，馬強(qiáng)，高玉風(fēng)

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院 腹部外科，青海 西寧 810001)

目的 探討肝癌患者重組人血管內(nèi)皮抑制素聯(lián)合肝動(dòng)脈化療栓塞后血清血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、乏氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha，HIF-1α)、骨橋蛋白(osteopontin，OPN)及結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor，CTGF)的變化及臨床意義。方法 選取青海大學(xué)附屬醫(yī)院收治的中晚期原發(fā)性肝癌患者90例，隨機(jī)分為對(duì)照組和觀察組，每組各45例，對(duì)照組實(shí)施常規(guī)肝動(dòng)脈化療栓塞治療，觀察組實(shí)施重組人血管內(nèi)皮抑制素注射液聯(lián)合肝動(dòng)脈化療栓塞治療；于治療前、術(shù)后3、5 d，用酶聯(lián)免疫吸附法動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)分析血清中VEGF、HIF-1α、OPN、CTGF的水平，并分析相關(guān)性。結(jié)果 對(duì)照組和觀察組術(shù)后3、5 d與術(shù)前比較，VEGF、HIF-1α、OPN、CTGF水平均明顯升高(P<0.05)。2組術(shù)后5 d與術(shù)后3 d比較，VEGF、HIF-1α、OPN、CTGF水平均顯著下降(P<0.05)。觀察組患者術(shù)后5 d除HIF-1α外，VEGF、OPN、CTGF水平均顯著低于同期對(duì)照組(P<0.05)。90例肝癌患者外周血清中VEGF與HIF-1α、OPN、CTGF濃度水平顯著正相關(guān)(r=0.985、0.995、0.959，P<0.05)，HIF-1α與OPN、CTGF濃度水平高度正相關(guān)(r=0.842、0.874，P<0.05)，OPN與CTGF濃度水平中度正相關(guān)(r=0.755，P<0.05)。結(jié)論 重組人血管內(nèi)皮抑制素聯(lián)合肝動(dòng)脈化療栓塞治療原發(fā)性肝癌的臨床療效明顯，肝癌患者外周血清VEGF、HIF-1α、OPN及CTGF密切相關(guān)，可以反映臨床療效。

重組人血管內(nèi)皮抑制素；肝癌；化療栓塞；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；乏氧誘導(dǎo)因子-1α；骨橋蛋白；結(jié)締組織生長(zhǎng)因子

肝癌是肝臟部位的惡性腫瘤，其中原發(fā)性肝癌是起源于肝臟上皮或間葉組織的肝臟惡性腫瘤，發(fā)病率很高，其預(yù)后較差，對(duì)患者的生命健康造成重大威脅[1]。手術(shù)是治療肝癌的首選，也是最有效的治療方法，而對(duì)不能手術(shù)直接切除的肝癌可根據(jù)患者疾病的具體情況，采用術(shù)中肝動(dòng)脈結(jié)扎、肝動(dòng)脈化療栓塞、射頻、冷凍等治療方法[2]。近年來，相關(guān)報(bào)道[3]指出重組人血管內(nèi)皮抑制素聯(lián)合動(dòng)脈化療栓塞術(shù)的臨床療效顯著，但是國(guó)內(nèi)關(guān)于此方面的研究還不夠明確[4]，故本研究對(duì)常規(guī)肝動(dòng)脈化療栓塞治療與重組人血管內(nèi)皮抑制素聯(lián)合肝動(dòng)脈化療栓塞治療進(jìn)行比較?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年4月～2014年4月期間，青海大學(xué)附屬醫(yī)院收治的90例中晚期原發(fā)性肝癌患者，隨機(jī)分為對(duì)照組與觀察組。對(duì)照組45例，其中男23例，女22例，年齡34～77歲，平均年齡(55.78±6.23)歲，實(shí)施常規(guī)肝動(dòng)脈化療栓塞治療；觀察組45例，其中男21例，女24例，年齡33～76歲，平均年齡(56.32±6.03)歲，實(shí)施重組人血管內(nèi)皮抑制素聯(lián)合肝動(dòng)脈化療栓塞治療。本次臨床研究由本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意，符合倫理要求，準(zhǔn)予實(shí)施，并且所有患者均簽署知情同意書。

1.2 診斷及排除標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)肝癌專業(yè)委員會(huì)《原發(fā)性肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)和原發(fā)性肝癌分期標(biāo)準(zhǔn)(2001年修訂)》，所有患者均經(jīng)B超、CT、MRI等影像學(xué)相關(guān)檢測(cè)以及血清甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)檢測(cè)或組織病理活檢等確診，且均為首次入院治療患者；排除合并患有門靜脈完全栓塞、肝功能嚴(yán)重受損、腫瘤廣泛轉(zhuǎn)移、肝性腦病等其他重大臟器嚴(yán)重疾病[5]。

1.3 治療方法 觀察組實(shí)施重組人血管內(nèi)皮抑制素聯(lián)合肝動(dòng)脈化療栓塞手術(shù)：采用Seldingers法通過右側(cè)大腿股動(dòng)脈進(jìn)行穿刺，沿著導(dǎo)絲置入5F鞘和5F肝管，插管直到肝固有動(dòng)脈或肝固有動(dòng)脈分支以后進(jìn)行數(shù)字減影血管造影(digital subtraction angiography，DSA)，通過造影確定肝腫瘤供血?jiǎng)用}分布情況、腫瘤的大小及數(shù)目。在情況明確之后進(jìn)行超選擇性插管，首先灌注重組人血管內(nèi)皮抑制素注射液(煙臺(tái)麥得津生物工程股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S20050088)15 mg、5-氟脫氧尿核苷(5’-deoxy-5-fluorouridine，5’-DFUR，上海羅氏制藥有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H19990343)0.5～1.0g、羥基喜樹堿(hydroxycamptothecin，HCPT，費(fèi)森尤斯卡比醫(yī)藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20030314)20～40 mg，再把吡柔比星(浙江海正藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20045983)20～50 mg與碘化油(浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠，國(guó)藥準(zhǔn)字H33021061)3～20 mL 2者充分混勻，制成乳劑緩慢注入，充分栓塞瘤灶，直到出現(xiàn)血管鑄型為止，最后再加少量明膠海綿顆粒栓塞供血?jiǎng)用}[6]。

對(duì)照組實(shí)施肝動(dòng)脈化療栓塞手術(shù)：只進(jìn)行肝動(dòng)脈化療栓塞治療，碘化油乳化時(shí)不聯(lián)合重組人血管內(nèi)皮抑制素注射液治療，其他手術(shù)操作以及藥物與觀察組相同。

1.4 采血及檢測(cè)指標(biāo) 在患者知情同意的情況下于肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)前、術(shù)后3 d及術(shù)后5 d采集患者外周血5 mL，放于4 ℃條件下24 h，之后1000 r/min離心20 min，取上清于EP管內(nèi)保存于-8 ℃條件下，用酶聯(lián)免疫吸附法(318-MICROPLATE READER酶標(biāo)儀，上海三科儀器有限公司)檢測(cè)患者血清中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelial growth factor，VEGF)、乏氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1alpha，HIF-1α)、骨橋蛋白(osteopontin，OPN)、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor，CTGF)的水平，并進(jìn)行相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 2組患者一般資料比較 觀察組與對(duì)照組患者在性別、年齡、肝炎病史、腫瘤大小、腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)量、轉(zhuǎn)移情況、術(shù)前AFP水平、肝功能等一般情況方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 2組患者一般資料比較Tab.1 Comparison of general information between two groups

2.2 對(duì)照組與觀察組不同階段血清VEGF、HIF-1α、OPN及CTGF水平比較 對(duì)照組和觀察組術(shù)后3 d、術(shù)后5 d與術(shù)前比較VEGF、HIF-1α、OPN、CTGF水平均明顯升高(P<0.05)，對(duì)照組和觀察組術(shù)后5 d與術(shù)后3 d相比較VEGF、HIF-1α、OPN、CTGF水平均顯著下降(P<0.05)，觀察組患者術(shù)后5 d除HIF-1α外，VEGF、OPN、CTGF水平均顯著低于同期對(duì)照組(P<0.05)，見表2。

表2 2組患者不同階段血清VEGF、HIF-1α、OPN、CTGF水平比較Tab.2 Comparison of serum VEGF, HIF-1α, OPN and CTGF levels between two groups at different ±s，ng/L)

*P<0.05，與同組術(shù)前比較，compared with preoperation in same group；#P<0.05，與術(shù)后3 d比較，compared with postoperative day 3；△P<0.05，與對(duì)照組同期比較，compared with control group at same stage

表3 肝癌患者中血清VEGF、HIF-1α、OPN、CTGF水平相關(guān)性分析Tab.3 Correlations of serum VEGF, HIF-1α, OPN, CTGF levels in patients with liver ±s，ng/L，n=90)

3 討論

原發(fā)性肝癌的致病因素與分子機(jī)制目前未十分明確，目前醫(yī)學(xué)界認(rèn)為肝癌的病因是多方面的，其致病過程也是漫長(zhǎng)復(fù)雜的，受遺傳基因與環(huán)境雙重因素影響[7]。從目前已經(jīng)掌握的流行病學(xué)資料以及實(shí)驗(yàn)相關(guān)研究表明[8]，導(dǎo)致肝癌的主要致病因素包括乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染、黃曲霉素、酒精、肝硬化等。早期肝癌無明顯特異性癥狀與體征，中晚期肝癌的臨床癥狀相對(duì)較多，主要出現(xiàn)的是消化系統(tǒng)癥狀或全身性癥狀，以及明顯的進(jìn)行性肝大或上腹部包塊等體征[9]。因此應(yīng)根據(jù)肝癌患者所處的階段不同以及個(gè)體差異制定個(gè)體化綜合治療方案，治療方法包括手術(shù)、肝動(dòng)脈結(jié)扎、肝動(dòng)脈化療栓塞以及化療和放療等一系列有效的治療手段。相關(guān)報(bào)道表明[10]，重組人血管內(nèi)皮抑制素聯(lián)合肝動(dòng)脈化療栓塞治療原發(fā)性肝癌的療效明顯，重組人血管內(nèi)皮抑制素注射液為血管抑制類新生物制品。重組人血管內(nèi)皮抑制素的分子機(jī)制主要是作用于VEGF的受體，抑制形成血管的內(nèi)皮細(xì)胞遷移，阻止VEGF與內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合，抑制腫瘤新生血管的生成，從而阻斷了腫瘤的營(yíng)養(yǎng)供給，進(jìn)而達(dá)到抑制腫瘤增殖或轉(zhuǎn)移的目的[11]。HIF-1α在人體內(nèi)廣泛存在，只有缺氧時(shí)才能穩(wěn)定表達(dá)，因此當(dāng)肝動(dòng)脈化療栓塞時(shí)即形成了一種缺氧的局部環(huán)境，其表達(dá)會(huì)顯著增高[12]。OPN是骨基質(zhì)中分離出來的一種磷酸化糖蛋白，分子中包含有RDG序列，通過粘附功能改變相關(guān)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能，從而促進(jìn)細(xì)胞的遷移，廣泛存在于各組織中，在病理狀態(tài)下其表達(dá)會(huì)顯著升高。CTGF由349個(gè)氨基酸組成，是富含半胱氨酸的分泌肽，目前該家族共有CTGF/fisp-12、cef10/Cyr61和Nov 3個(gè)成員；CTGF對(duì)成纖維細(xì)胞具有趨化及促有絲分裂作用，同時(shí)還具有促細(xì)胞增殖、遷移及分化等作用[13]。

本次臨床研究結(jié)果表明：對(duì)照組和觀察組術(shù)后3 d、術(shù)后5 d與術(shù)前相比較VEGF、HIF-1α、OPN、CTGF水平均明顯升高(P<0.05)，對(duì)照組和觀察組術(shù)后5 d與術(shù)后3 d相比較VEGF、HIF-1α、OPN、CTGF水平均顯著下降(P<0.05)，說明重組人血管內(nèi)皮抑制素聯(lián)合肝動(dòng)脈化療栓塞治療原發(fā)性肝癌可以有效降低患者術(shù)后VEGF、HIF-1α、OPN、CTGF水平，效果優(yōu)于單純肝動(dòng)脈化療栓塞，重組人血管內(nèi)皮抑制素通過作用于VEGF的受體，阻止VEGF 與內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合，達(dá)到抑制腫瘤新生血管生成的目的，治療腫瘤的療效顯著，這與國(guó)外學(xué)者Farris等[14]的研究結(jié)果相一致。觀察組患者術(shù)后5 d除HIF-1α外，VEGF、OPN、CTGF水平均顯著低于同期對(duì)照組(P<0.05)，說明當(dāng)肝動(dòng)脈化療栓塞時(shí)即形成了一種缺氧的局部環(huán)境，因此HIF-1α表達(dá)會(huì)顯著增高且在缺氧環(huán)境持續(xù)存在條件下將持續(xù)表達(dá)，這與國(guó)外學(xué)者Dufour等[15]報(bào)道的結(jié)果相近。90例肝癌患者外周血清中VEGF與HIF-1α、OPN、CTGF濃度水平顯著正相關(guān)(r≥0.95，P<0.05)，HIF-1α與OPN、CTGF濃度水平高度正相關(guān)(r≥0.8，P<0.05)，OPN與CTGF濃度水平中度正相關(guān)(0.5≤r<0.8，P<0.05)。說明VEGF的表達(dá)上升，可調(diào)控一系列基因的表達(dá)，其中HIF-1α又是腫瘤細(xì)胞缺氧調(diào)節(jié)的重要因子，其表達(dá)增強(qiáng)后與受體結(jié)合可促進(jìn)下游基因的轉(zhuǎn)錄，因此VEGF、HIF-1α、OPN、CTGF之間存在密切相關(guān)性，臨床上可以通過檢測(cè)相關(guān)因子反映臨床療效，在臨床上具有重要參考意義。

綜上所述，重組人血管內(nèi)皮抑制素聯(lián)合肝動(dòng)脈化療栓塞治療原發(fā)性肝癌的臨床療效明顯、效果良好，可以通過檢測(cè)相關(guān)因子反映臨床療效，該方法治療原發(fā)性肝癌值得在臨床上進(jìn)一步推廣。

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(編校：王儼儼)

Changes of VEGF, HIF-1α, OPN and CTGF levels in serum of HCC patients after recombinant human endostatin combined with transcatheter arterial chemoembolization

WU Zhan-qing, MA Qiang, GAO Yu-feng

(Abdominal Surgery, The Affiliated Hospital of Qinghai University, Xining 810001, China)

ObjectiveTo explore the effect of recombinant human endostatin combined with transcatheter arterial chemoembolization on vascular endothelial growth factor (VEGF), hypoxia inducible factor-1 alpha(HIF-1α), osteopontin (OPN) and connective tissue growth factor (CTGF) levels in serum of HCC patients.Methods90 cases of primary liver cancer patients were randomly divided into control group and observation group, 45 cases in each group.The control group received the routine chemotherapy of hepatic artery embolization, and the observation group received recombinant human vascular endostatin combined with hepatic arterial chemoembolization.The serum levels of VEGF, HIF-1α, OPN, and CTGF were detected by enzyme-linked immunosorbent assay before treatment, 3 days and 5 days after operation, then the correlations were analyzed.ResultsThe VEGF, HIF-1α, OPN, CTGF levels after 3 days and 5 days were higher than those before surgery in control group and observation group (P<0.05), the above indexes after 5 days were lower than those after 3 days in both groups (P<0.05), and VEGF, OPN and CTGF levels except for HIF-1α in observation group were significantly lower than those in control group after 5 days (P<0.05).There existed significant positive correlation between serum VEGF and HIF-1α, OPN, CTGF concentration levels(r=0.985, 0.995, 0.959，P<0.05) in 90 cases of liver cancer patients, highly positive correlation between HIF-1α and OPN, CTGF levels (r=0.842,0.874,P<0.05), and moderately positive correlation between OPN and CTGF concentrations (r=0.755，P<0.05).ConclusionThe efficacy of recombinant human vascular endostatin combined with transcatheter arterial chemotherapy and embolization in the treatment of primary hepatocellular carcinoma is good.There exsits closely correlation of VEGF, HIF-1α, OPN and CTGF levels in serum, which could reflect clinical efficacy.

recombinant human vascular endostatin; liver neoplasms; chemoembolization; vascular endothelial growth factor; hypoxia inducible factor-1 alpha; osteopontin; connective tissue growth factor

吳占慶，男，本科，副主任醫(yī)師，研究方向：腹部急診、腫瘤、嚴(yán)重創(chuàng)傷，E-mail：wuzq281@126.com。

R735.7

A

1005-1678(2015)06-0098-04