蔡先軍

摘 要：通過高效液相色譜法，對(duì)添加劑進(jìn)行分離和檢測，以建立一種可以同時(shí)測定飲料中多種添加劑的檢測方法。在被測樣品經(jīng)過處理進(jìn)樣后，各組分離完全，相關(guān)系數(shù)均超過了0.999，加標(biāo)回收率在96%～108%之間。這種方法方便、迅速，重現(xiàn)性好，工作效率高，9min內(nèi)就能夠檢測出一種樣品中的這4種添加劑含量。

關(guān)鍵詞：液相色譜 苯甲酸 山梨酸 糖精鈉 胭脂紅

常用的食品添加劑有防腐劑、著色劑、人工合成甜味劑等。目前，食品種類越來越多，同時(shí)各類食品也大量使用了食品添加劑，長期的過量攝入會(huì)對(duì)人體健康產(chǎn)生不良影響，在實(shí)際的操作過程中相應(yīng)的食品檢驗(yàn)面對(duì)著很大的分析任務(wù)，因此需要研究切實(shí)可行、行之有效的食品檢測方法，進(jìn)而達(dá)到對(duì)眾多樣品快速分析的目的。本文通過高效液相色譜法，分析了食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、胭脂紅4種添加劑的色譜分離條件，并成功地將該方法用于測定飲品中的添加劑含量。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

Shimadzu LC10_Avp液相色譜儀，色譜工作站；上海BRANSON SB2200超聲振蕩器，津騰GM_0.20隔膜真空泵，0.45μm微孔濾膜.

1.1.2 試劑

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)貯備液或固體標(biāo)準(zhǔn)均來自于國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心；乙腈為色譜純，其它的試劑均為分析純；試驗(yàn)用水為市售小瓶裝娃哈哈純凈水。

1.2 色譜條件分析

色譜柱：Hypersil ODS柱（5μm，125mm×4.00mm）；乙腈+0.02moL/L NH4AC=3%+97%，5min時(shí)乙腈+0.02 moL/L NH4AC=15%+85%；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：20μL；檢測波長：230nm。以保留時(shí)間及吸收光譜特性進(jìn)行定性，以色譜峰高會(huì)峰面積進(jìn)行定量。

1.3 試樣制備

稱取碳酸飲料、果汁以及茶飲料等飲品各20.0g于50mL的容量瓶中，然后加純凈水稀釋至50mL，混勻，再經(jīng)0.45μm微孔濾膜進(jìn)行過濾，濾液上機(jī)測定；對(duì)于含碳酸的飲品需要先進(jìn)行加熱，時(shí)間20min，或是通過攪拌的方法，進(jìn)而除去二氧化碳，然后用氨水（1+1）調(diào)pH值約為7。

2 結(jié)果與討論

2.1 分離條件的選擇

選擇Hypersil ODS柱作為分離柱，以醋酸銨—乙腈為流動(dòng)相，對(duì)流動(dòng)相中乙腈和醋酸銨溶液的比例和梯度進(jìn)行調(diào)節(jié)，進(jìn)而確立以下幾點(diǎn)分離條件：進(jìn)行分離前，乙腈和0.02moL/L醋酸銨的比例為3∶97，在進(jìn)樣后，在5min內(nèi)乙腈比例以2.4%/min的速度升至15%，同時(shí)緩沖液比例降到85%，并維持至分析結(jié)束。選定流速為1.0mL/min，9min內(nèi)可以完全分離4種添加劑，而且分離度都超過了1.5，表明分離情況良好。4種添加劑的分離情況，如圖1所示。

2.2 柱溫的選擇

柱溫對(duì)分離效果的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在20℃、30℃和40℃的溫度下，在溫度持續(xù)上升的情況下，柱壓會(huì)逐步下降，被分析物的保留時(shí)間也會(huì)隨之縮短，而在柱溫為30℃時(shí)，全部的被分析物都可以得到較好的分離，因此選擇30℃為檢測溫度。

2.3 測定波長的選擇

將混合標(biāo)準(zhǔn)液在190～370nm的波長下進(jìn)行光譜掃描，可以知道所測定的4種添加劑的最大吸收波長分別為：苯甲酸225nm，山梨酸258nm，糖精鈉207nm，胭脂紅220nm。苯甲酸、糖精鈉在254nm相對(duì)于230nm吸收小，相反山梨酸則吸收比較大，因此如果選擇254nm作為檢測波長，山梨酸將會(huì)對(duì)苯甲酸和糖精鈉的定量造成很大的影響；另外，所測定的4種添加劑在230nm的波長下吸收都超過了254nm，選擇230nm時(shí)這幾種添加劑測定靈敏度是接近的，均具有較強(qiáng)的吸收特性。雖然考慮到LC10_Avp系統(tǒng)能切換波長，從綜合情況考慮，最終選定檢測波長為230nm。

2.4 方法考察

2.4.1 線性范圍

如表1所示，以4種添加劑的峰面積（Y）對(duì)其質(zhì)量濃度（X）進(jìn)行線性回歸，并且四種添加劑存在良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)都超過了0.999。

2.4.2 方法檢出限

采用3倍信噪比時(shí)所對(duì)應(yīng)的濃度，4種添加劑在230nm波長下，可以計(jì)算得出的檢出限為：苯甲酸0.06mg/L，山梨酸0.05mg/L，糖精鈉0.09mg/L，胭脂紅0.06mg/L。

2.4.3 干擾實(shí)驗(yàn)

在實(shí)驗(yàn)條件下，食品中可能存在其他常見添加劑，如檸檬黃、靛藍(lán)、亮藍(lán)、日落黃、甜蜜素、莧菜紅、誘惑紅、酒石酸等并不干擾測定，可滿足監(jiān)測工作的需要。

2.4.4 準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn)

用濃度均為0.01g/L的混合溶液進(jìn)樣10μl，重復(fù)進(jìn)行6次分析，各成分測得的峰面積的RSD分別為苯甲酸1.0%，山梨酸1.0%，糖精鈉1.8%，胭脂紅0.7%。這四種添加劑測定的變異系數(shù)均小于1.9%，表明具有良好的重復(fù)性。

本法以某品牌橙汁飲料為本底，測定了苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、胭脂紅這4種添加劑的含量，并分別從高、中、低三個(gè)添加水平測定加標(biāo)回收率，每個(gè)水平重復(fù)5次，其結(jié)果如表2所示，從結(jié)果可以看出，高效液相色譜法具有較好的重現(xiàn)性以及再現(xiàn)性，回收率范圍為96%～108%。

2.4.5 幾種樣品測定

運(yùn)用本方法對(duì)市場上所購買的橙汁、可樂、碳酸飲料等多種液體樣品進(jìn)行檢測，結(jié)果令人滿意。例如，從一份橙汁樣品中檢出苯甲酸、胭脂紅的含量，其結(jié)果就是加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)中用的本底結(jié)果。

3 結(jié)論

從以上結(jié)果來看，采用高效液相色譜法，可以同時(shí)測定和分析食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、胭脂紅的含量，并且該方法操作簡單，具有較高的靈敏度和準(zhǔn)確性，可滿足對(duì)液體樣品進(jìn)行快速檢測的需要，為在廣大的基層實(shí)驗(yàn)室實(shí)施食品質(zhì)量安全監(jiān)測提供了行之有效的檢測方法。

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