田朝陽，劉守桃，荊 韜，張 欣，楊穎珊

(1.海南金港生物技術股份有限公司,?？?571100;2.蘇州藥明康德新藥開發(fā)有限公司,江蘇蘇州 215104)

研究報告

中老年食蟹猴血液生理和生化指標測定與比較

田朝陽1，劉守桃2，荊 韜2，張 欣2，楊穎珊1

(1.海南金港生物技術股份有限公司,?？?571100;2.蘇州藥明康德新藥開發(fā)有限公司,江蘇蘇州 215104)

目的 提供中老年實驗食蟹猴的一般生理指標、血液生理生化指標的參考值。方法 選取119只11～16歲食蟹猴,雄性80只,雌性39只,分別檢測其一般生理指標(體重、體長和腰圍)、血液學指標和血液生化學指標,并進行性別間比較。結果 雌雄動物相比,一般生理指標包括體重、體長和腰圍差異有顯著性(P＜0.01);血常規(guī)指標中NEUT#、LYMPH#、EO#、BASO#、NEUT%、LYMPH%、EO%、BASO%、MCV、MCH、RDW-CV、PCT、MONO%、HGB、HCT、MCHC、RDW-SD、MPV差異有顯著性(P＜0.01或P＜0.05),其余差異無顯著性(P＞0.05);血生化指標中TBIL、ALB、GLO、A/G、ALP、GLU、UREA、CREA、TCH、TG、CK、ALT、GGT差異有顯著性(P＜0.01或P＜0.05),其余差異無顯著性(P＞0.05)。結論 本研究提供了中老年食蟹猴一般生理指標、血液學和血液生化學的背景數(shù)據(jù),為其在生物醫(yī)學領域的應用提供參考資料。

食蟹猴;體重;體長;腰圍;血液學;血液生化學

非人靈長類動物在親緣關系上和人最接近,與人類的遺傳物質有75%～98.5%的同源性[1],在組織結構、免疫、生理和代謝等方面與人類高度近似,是極其珍貴的實驗動物,其應用價值遠超過其他種屬的實驗動物[2]。近年來,國外對非人靈長類實驗動物的需求量逐年增加,國內(nèi)非人靈長類實驗動物養(yǎng)殖企業(yè)每年出口實驗猴約2萬只,約占美國市場份額的62%以上,歐洲市場份額的100%。此外,每年面向國內(nèi)銷售約1萬只。與此同時,我國的實驗猴養(yǎng)殖事業(yè)有了長足的發(fā)展,據(jù)中國實驗靈長類養(yǎng)殖開發(fā)協(xié)會(CLPA)2012年底統(tǒng)計顯示全國實驗獼猴和食蟹猴的總存欄量已超過29萬只,其中食蟹猴高達25萬多只[3]。伴隨著時間的推移,必將有大量的食蟹猴邁入中老年階段(年齡≥10歲為中年猴;年齡＞15歲為老年猴)[4],這就為人類慢性疾病研究所亟需的自發(fā)性靈長類動物疾病模型的篩選提供了豐富的資源基礎。

因而,建立中老年食蟹猴常規(guī)的臨床血液生理和生化指標不僅對其應用提供重要的參考意義,也為標準化的生產(chǎn)管理和日常疾病的診斷發(fā)揮著日益重要的作用。本研究對119只11～16歲的食蟹猴的一般生理指標(體重、體長和腰圍)、血液學和血液生化學指標進行了全面系統(tǒng)的測定,并進行了性別間的比較,為食蟹猴在生物醫(yī)學領域的應用提供參考信息。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

食蟹猴119只,雄性80只,雌性39只。級別:普通級;年齡:11～16歲;動物生產(chǎn)單位:海南金港生物技術股份有限公司【SCXK(瓊)2010-0001】。實驗于海南金港生物技術股份有限公司的普通級非人靈長類動物實驗室進行【SYXK(瓊)2014-0017】。飼養(yǎng)條件:單籠飼料,飼喂膨化飼料,動物自由飲水。1.2 測定方法

1.2.1 一般生理指標(體重/body weight、體長/ crown-rump length和腰圍/waist circum ference)測定:動物空腹時間＞16 h,上午8:00～11:00稱重,稱重前肌注舒泰50(0.1 mL/kg BW)進行麻醉,采用嬰兒秤進行稱量;體長和腰圍測定均采用皮尺,測定時把已麻醉好的動物側躺,自然伸直,體長測量是自頭頂部順著背部中線自然延伸至尾根部,腰圍測量是皮尺自肚臍處環(huán)繞一周,松緊適中即可。

1.2.2 血液生理指標測定:如1.2.1所述進行動物的空腹、麻醉和采集靜脈血2 mL。應用邁瑞B(yǎng)C-5500全自動血細胞分析儀及配套試劑進行血細胞計數(shù)檢測,檢測項目為:白細胞數(shù)(WBC)、中性粒細胞數(shù)目(NEUT#)、淋巴細胞數(shù)目(LYMPH#)、單核細胞數(shù)目(MONO#)、嗜酸性粒細胞數(shù)目(EO#)、嗜堿性粒細胞數(shù)目(BASO#)、中性粒細胞百分比(NEUT%)、淋巴細胞百分比(LYMPH%)、單核細胞百分比(MONO%)、嗜酸性粒細胞百分比(EO%)、嗜堿性粒細胞百分比(BASO%)、紅細胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細胞壓積(HCT)、RBC平均體積(MCV)、RBC平均血紅蛋白含量(MCH)、RBC平均血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細胞分布寬度變異系數(shù)(RDW-CV)、紅細胞分布寬度標準差(RDW-SD)、血小板總數(shù)(PLT)、平均血小板體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)、血小板壓積(PCT)。

1.2.3 血液生化指標測定:如1.2.1所述進行動物的空腹、麻醉和采集靜脈血3 mL,離心取血清,應用東芝120全自動生化儀及上?？迫A檢測試劑盒進行血液生化學檢測,檢測項目為:谷丙轉氨酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、總膽紅素(TBIL)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、白球比(A/G)、堿性磷酸酶(ALP)、谷氨酰轉肽酶(GGT)、葡萄糖(GLU)、尿素(UREA)、肌酐(CREA)、總膽固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)。

1.3 結果處理

應用SPSS統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行分析,結果以Mean±SD表示,采用t檢驗統(tǒng)計方法,比較各測定指標雌雄間差異,顯著性差異水平α=0.05。

2 結果

2.1 一般生理指標

雌、雄性動物的體重、體長和腰圍指標差異極顯著(P＜0.01),雄性高于雌性(表1)。

表1 中老年食蟹猴一般生理指標Tab.1 The general physiological index ofmiddle and old-aged cynomolgusmonkey

2.2 血液學指標

雄性動物的NEUT#、LYMPH#、EO#、BASO#、NEUT%、LYMPH%、EO%、BASO%、MCV、MCH、RDW-CV、PCT與雌性動物相比差異極顯著(P＜ 0.01),MONO%、HGB、HCT、MCHC、RDW-SD、MPV與雌性動物相比差異極顯著(P ＜0.05),僅有WBC、MONO#、RBC、PLT、PDW與雌性動物相比差異不顯著(P＞0.05)(表2)。

表2 中老年食蟹猴血液常規(guī)指標Tab.2 The hematology value ofmiddle and old-aged cynomolgusmonkey

2.3 血液生化學指標

雄性動物的 TBIL、ALB、GLO、A/G、ALP、GLU、UREA、CREA、TCH、TG、CK與雌性動物相比差異極顯著(P＜0.01),ALT、GGT與雌性動物相比差異極顯著(P＜0.05),僅有AST、TP、LDH與雌性動物相比差異不顯著(P ＞0.05) (表3)。

3 討論

藥物的藥效學研究、臨床前安全性評價研究是新藥研發(fā)的核心內(nèi)容。積累動物的背景資料諸如體重及常規(guī)血液生理生化指標等就顯得尤為重要,5歲以下的研究結果已發(fā)表[5],但有關中老年食蟹猴(＞10歲以上)的相關背景資料卻鮮見報道。

表3 中老年食蟹猴血液生化學指標Tab.3 The blood biochemistry parameters ofmiddle and old-aged cynomolgusmonkey

本研究測得的中老年食蟹猴(11～16歲)一般生理指標(體重、腰圍、體長)表現(xiàn)出極顯著的性別差異。結合李冰[6]的研究結果,我們可以得出,隨著年齡的增長食蟹猴雌雄間體重的差異性會越來越顯著。這就要求我們在做實驗方案制定時注意不同年齡段雌雄間一般生理指標的差異。

本研究測得的中老年食蟹猴血液學以及血液生化學指標結果表明雌雄間在NEUT#、LYMPH#、EO #、BASO#、NEUT%、LYMPH%、EO%、BASO%、MCV、MCH、RDW-CV、PCT、MONO%、HGB、HCT、MCHC、RDW-SD、MPV和TBIL、ALB、GLO、A/G、ALP、GLU、UREA、CREA、TCH、TG、CK、ALT、GGT等指標方面存在顯著性差異。李巖[7]等研究顯示4～7歲食蟹猴在WBC、ALP、CHO、CRE和GLU指標上有性別差異,唐賢麗[8]等研究顯示3～5歲食蟹猴僅有GLU存在性別差異,石巧娟[5]等研究結果顯示UREA、CK值與性別有密切關系,結合本研究可以得出伴隨著年齡的增長這種性別差異依然存在,并且存在著如上所述更多血液生理生化指標的性別差異。說明隨著食蟹猴年齡的增長,雌雄個體間血液生理生化指標的差異更多且顯著。

通過與已有報道相比較,發(fā)現(xiàn)在RBC、PLT、GLU和TP等重要血液生理生化指標上沒有年齡相關性,各年齡結果基本一致,而WBC、HGB和TC等指標則出現(xiàn)中老年動物比青壯年的偏低,而中老年雌性動物TG高于其他年齡段的動物。

進一步與中老年人相關血液生理生化的關鍵指標比較可知,人類的GLU、TCH和TG比中老年食蟹猴的偏高,WBC、RBC和PLT則偏低,而HGB則基本一致[9-11]。

已有研究表明,伴隨著年齡的增長,猴自發(fā)性動物疾病模型的發(fā)生率就會增加[12],并且自發(fā)性動物模型在研究人類疾病時具有重要價值[13],尤其是自然衰老靈長類動物模型在特征和發(fā)生機制方面能較全面的反映人類衰老基本清況[14],這就為中老年食蟹猴動物疾病模型的篩選和開發(fā)利用提供了較為基礎的研究背景資料。

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Com parative study on values of blood physiological and biochem ical for m iddle and old-aged cynomolgusmonkey

TIAN Chao-yang1,LIU Shou-tao2,JING Tao2,ZHANG Xin2,YANG Ying-shan1
(1.Hainan Jingang Biotech Co.,Ltd,Haikou 571100,China;2.Wuxi AppTec(Suzhou) Co.,Ltd,Jiangsu Suzhou 215104,China)

Objective To provide reference of the general physiological index,blood physiology and biochemistry formiddle and old-aged cynomolgusmonkey.M ethods 119 cynomolgusmonkey aged from 11～16(80 weremales and 39 were females)were involved in the study.We detected the general physiological index(body weight,the crown-rump length and waist circum ference),hematology and blood biochemistry parameters respectively and compared these parameters betweenmales and females.Results Between males and females,there were significant differences in Body weight,the crown-rump length and Waist circumference of the general physiological index(P＜0.01),NEUT#、LYMPH#、EO#、BASO#、NEUT%、LYMPH%、EO%、BASO%、MCV、MCH、RDW-CV、PCT、MONO%、HGB、HCT、MCHC、RDW-SD、MPV of hematology(P＜0.01 or P＜0.05)and TBIL、ALB、GLO、A/G、ALP、GLU、UREA、CREA、TCH、TG、CK、ALT、GGT of blood biochemistry(P＜0.01 or P＜0.05).There were no significant differences in other parameters(P ＞0.05).Conclusion Itprovides reference ofgeneral physiological index,blood physiology and biochemistry parameters of cynomolgusmonkey and basis for their application in biomedical domain.

Cynomolgus monkey;Body weight;Crown-rump length;Waist circumference;Hematology;Blood biochemistry

R332

A

1671-7856(2015)03-0013-05

10.3969.j.issn.1671.7856.2015.003.03

2014-12-01

2012年海南省重點科技計劃項目(ZDXM20120041)。

田朝陽(1981-),男,碩士,從事靈長類實驗動物科研工作。E-mail:chaoyangtian@163.com。