李立紀(jì) 李睿 趙仁彬等

摘要：目的探討滇南血栓顆粒對(duì)體外血小板聚集和大鼠下腔靜脈血栓形成的影響。方法采用比濁法，以二磷酸腺苷（ADP）為誘導(dǎo)劑，測(cè)定滇南血栓顆粒的體血抗血小板聚集活性；采用結(jié)扎大鼠下腔靜脈的方法，觀察滇南血栓顆粒的體內(nèi)抗血栓作用。結(jié)果滇南血栓顆?？娠@著對(duì)抗ADP誘導(dǎo)的家兔體外血小板聚集，作用呈現(xiàn)濃度依賴性，其半數(shù)抑制率（50% inhibitory concentration，IC50）為29.84 mg.mL-1；滇南血栓顆?？擅黠@減輕大鼠下腔靜脈血栓的重量。 結(jié)論滇南血栓顆粒在體外、體內(nèi)均有明顯的抗血小板聚集、抗血栓形成作用。

關(guān)鍵詞：抗血栓；抗血小板聚集；滇南血栓顆粒

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2015）05-0078-02

【Abstract】Objective： To study the effect of Diannan Thrombus Particles on platelet aggregation in vitro and rat inferior vena cava thrombosis. Methods： The turbidimetry was used to measure the activity of body blood thrombus particles by using adenosine diphosphate （ADP） as inducing agent， and the rat vena cava ligation method used to observe the anti-thrombotic effect of Diannan Thrombus Particles. Result： Diannan Thrombus Particles could significantly confront the ADP-induced platelet aggregation in rabbits， in a concentration-dependence and its half inhibition rate （50% inhibitory concentration， IC50） was 29.84 mg·mL-1. And it could significantly reduce the weight of the inferior vena cava thrombosis in rats. Conclusion： Diannan Thrombus Particles has a significant anti-platelet aggregation and antithrombotic effect in vitro and in vivo.

【Key words】anti-thrombosis， platelet aggregation， Diannan Thrombus Particles

隨著人口老齡化進(jìn)程的加速，血栓栓塞性疾病的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球每年約有1500萬人死于血栓栓塞性疾病，我國每年該病發(fā)病人數(shù)有1000萬，病死人數(shù)有100萬，因此，提高血栓栓塞性疾病的防治水平，降低其發(fā)病率、致死率、致殘率，減少由此而產(chǎn)生的一系列社會(huì)問題已成為當(dāng)務(wù)之急。滇南血栓顆粒是云南省血液病學(xué)研究中心血液病中西醫(yī)結(jié)合研究室的經(jīng)驗(yàn)方，采用本省出產(chǎn)的滇三七、木姜子及地龍等藥組成，其臨床應(yīng)用于難治性深靜脈血栓不僅對(duì)急性期血栓溶栓效果好，而且對(duì)西醫(yī)尿激酶、鏈尿激酶聯(lián)合肝素、抗血小板藥無效的頑固性、完全梗阻性深靜脈血栓均有較好的療效。但滇南血栓顆?？寡ǖ淖饔脵C(jī)制尚不清楚，本文從體外抗血小板聚集和體內(nèi)抗血栓形成兩方面對(duì)滇南血栓顆粒的抗血栓作用進(jìn)行了研究。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1藥物與試劑阿司匹林（ASP），山東新華制藥有限股份公司，批號(hào)：09795；二磷酸腺苷（ADP）Sigma公司產(chǎn)品，批號(hào)：A2754；滇南血栓顆粒，云南省血液病學(xué)研究中心血液病中西醫(yī)結(jié)合研究室提供（分為低、中、高三個(gè)劑量），生理鹽水，水合氯醛（分析純），天津市瑞金特化學(xué)品有限公司，批號(hào)：20090814；枸櫞酸鈉，天津市化學(xué)試劑三廠，批號(hào)：A20120416。

1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物日本大耳白兔，體重2～2.5 kg，雌雄兼用，由昆明醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物科提供，動(dòng)物合格證號(hào)：滇實(shí)動(dòng)證第2010014號(hào)；SD大鼠，體重200～250 g，生產(chǎn)批號(hào)：Dossy-2011-01，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院動(dòng)物研究所提供，動(dòng)物飼養(yǎng)條件：室溫為（22±2）℃，相對(duì)濕度60～70%。

1.1.3主要儀器賽多利斯XS125A分析天平：北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；LBY-NJ2血小板聚集儀，北京普利生科貿(mào)集團(tuán)產(chǎn)，800型離心沉淀器，上海手術(shù)器械十廠。

1.2方法

1.2.1滇南血栓顆粒對(duì)ADP誘導(dǎo)的家兔體外血小板聚集的影響36只家兔隨機(jī)分為6組，即陰性對(duì)照組（等體積生理鹽水）、滇南血栓顆粒5個(gè)濃度組。用10%水合氯醛腹腔注射麻醉家兔，自頸總動(dòng)脈插管取血，3.8%枸櫞酸鈉抗凝，血液與抗凝劑容積比9︰1，取血后立即顛倒均勻，分別以1000 r/min離心6min得富血小板血漿（platelet-rich plasma，PRP），剩余血液繼續(xù)以3000 r/min離心15 min得貧血小板血漿（platelet-poor plasma，PPP），采用比濁法[1]，以ADP為誘導(dǎo)劑，采用血小板聚集儀測(cè)定5min內(nèi)血小板的最大聚集率。血小板聚集抑制率以下式計(jì)算：抑制率（%）=（對(duì)照組最大聚集率-給藥組最大聚集率）/對(duì)照組最大聚集率×100%。

1.2.2滇南血栓顆粒對(duì)大鼠下腔靜脈血栓的影響參考文獻(xiàn)方法[2]，取清潔級(jí)雄性SD大鼠，隨機(jī)分為5組，即模型組（生理鹽水），陽性對(duì)照組（阿司匹林），滇南血栓顆粒低、中、高劑量組，每組7～8只，大鼠按分組分別灌胃（ig）相應(yīng)受試藥物，每天1次，連續(xù)7 d，末次給藥后1 h，3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠，沿腹白線切開進(jìn)腹，分離下腔靜脈，以左腎靜脈分叉處為標(biāo)志，在其下方用粗絲線結(jié)扎下腔靜脈，縫合腹壁，結(jié)扎后4 h，處死大鼠，打開腹腔，在結(jié)扎線下方2 cm處用動(dòng)脈夾夾閉下腔靜脈管腔，將結(jié)扎段血管剪下，剖開管腔，輕輕取出血栓，放于濾紙上，吸干血液，用微量電子天平稱取血栓濕重。血栓形成抑制率（%）≒（對(duì)照組血栓重量一給藥組血栓重量）/對(duì)照組血栓重量 ×100%

1.3統(tǒng)計(jì)方法數(shù)據(jù)用（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，運(yùn)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件包中單因素方差分析法處理數(shù)據(jù)，方差齊者采用LSD法檢驗(yàn)，方差不齊者采用Tamhanes法檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1滇南血栓顆粒對(duì)ADP誘導(dǎo)的家兔體外血小板聚集的影響結(jié)果顯示，滇南血栓顆粒對(duì)ADP誘導(dǎo)的家兔體外血小板聚集有顯著抑制作用，且呈濃度依賴性，IC50為29.84 mg·mL-1，詳見表1。

2.2滇南血栓顆粒對(duì)大鼠下腔靜脈血栓的影響結(jié)果顯示，滇南血栓顆粒高、中、低三個(gè)劑量組均可顯著抑制大鼠下腔靜脈血栓的形成，并呈現(xiàn)劑量依賴性特點(diǎn)，詳見表2：

3討論

深靜脈血栓形成是臨床常病，多繼發(fā)于各種原因?qū)е碌拈L期臥床、血管內(nèi)瘤栓、血栓形成及機(jī)體血液成分改變導(dǎo)致的各種疾病[3]。其產(chǎn)生原因較為復(fù)雜，與多種誘發(fā)因素導(dǎo)致的血液在靜脈腔內(nèi)不正常的凝結(jié)，阻塞靜脈腔，導(dǎo)致靜脈回流阻礙[4]有關(guān)，深靜脈血栓好發(fā)于下肢，形成后易造成肢體殘疾，嚴(yán)重者可危及患者生命。臨床對(duì)深靜脈血栓治療近期目的主要是減輕癥狀，預(yù)防血栓蔓延和預(yù)防肺栓塞，遠(yuǎn)期治療目的主要是預(yù)防靜脈血栓復(fù)發(fā)[5]。中醫(yī)藥在深靜脈血栓的治療中有其獨(dú)特的療效，中醫(yī)普遍認(rèn)為[6]，深靜脈血栓的形成是機(jī)體感受外界風(fēng)寒、濕或多種因素導(dǎo)致氣、血兩傷或臟腑功能低下，正氣化生不足，氣血不榮，風(fēng)寒、濕邪乘虛而入，正邪相爭(zhēng)，經(jīng)絡(luò)閉塞而致，因此其治療法則多以溫脈活血、利濕消腫為主。滇南血栓顆粒汲取云南中醫(yī)界歷史上重視陽氣，扶陽以消陰翳，善用大劑量附子溫陽的優(yōu)良傳統(tǒng)，采用溫陽逐瘀的原則，藥味組成上選用了滇三七、木姜子和地龍等藥，在臨床用于治療難治性深靜脈血栓取得較好的療效，本論文的研究對(duì)滇南血栓顆粒的體內(nèi)、體外抗血小板聚集作用進(jìn)行考察，結(jié)果顯示，滇南血栓顆粒有明顯的抗家兔體外血小板聚集作用和抗大鼠下腔靜脈血栓的作用，其深入的作用機(jī)制尚待下一步系統(tǒng)性的研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]Born GVR.Aggregation of blood platelets by diphosphate and its reversal[J].Nature，1962，194；297.

[2]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：510.

[3]李家增.血栓形成機(jī)制[J].臨床內(nèi)科雜志.2004，21（12）：793-795.

[4]張雪軍，張愛軍，王嶺東，等.深靜脈血栓131例治療的臨床分析，湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，32（6）：37-38.

[5]許建芬，鄧小嵐，沈小芳，等.老年科預(yù)防深靜脈血栓評(píng)估表的設(shè)計(jì)及應(yīng)用，中華護(hù)理雜志，2012，47（11）：997-998.

[6]李曉曦.急性靜脈血栓栓塞癥抗凝治療的合理應(yīng)用，中國實(shí)用外科雜志，2010，12（12）：1014-1016.

（收稿日期：2015-03-05）