范亞剛 左文松 楊琰

摘要：目的采用高效液相色譜法測定牛黃解毒片中黃芩苷丶大黃素的含量。方法KromasilC18（150×4.6 mm，5 um）為分析柱，流動相為0.05%磷酸溶液-乙腈（75∶25），柱溫30℃，流速1.0 mL·min-1，檢測波長254 nm。結(jié)論本方法簡便、快速，結(jié)果準確、可靠，重現(xiàn)性好，適用于牛黃解毒片中黃芩苷、大黃素的含量測定。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；牛黃解毒片；含量測定；大黃素；黃芩苷

中圖分類號：R284文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2015）05-0080-02

牛黃解毒片是一種歷史悠久、療效確切的中成藥，為《中國藥典》[1]一部收載品種，由人工牛黃、雄黃、石膏、大黃、黃芩、桔梗、冰片、甘草八味藥組成，臨床主要用于清熱解毒，火熱內(nèi)盛，咽喉腫痛，牙齦腫痛，口舌生瘡，目赤腫痛，原標準僅對黃芩中的黃芩苷進行了含量測定，文獻資料[2～3]中，也多為對處方中的一味藥大黃的5種成分進行含量研究，為更好的保證藥品質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜法對大黃中的大黃素和黃芩中的黃芩苷進行同時測定。

1儀器與試藥

1.1儀器島津LC-20A高效液相色譜儀（日本島津公司）檢測器：SPD-20A（D2+W）電子天平：CPA-225D，BP-221D

1.2試藥黃芩苷、大黃素對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供（純度均為100.00%），牛黃解毒片由昆明中藥廠提供。磷酸為分析純、乙腈為色譜純，水為超純水。

2方法

2.1色譜條件：KromasilC18（150×4.6 mm，5 mm）色譜柱；流動相為0.05%磷酸溶液：乙腈=75∶25；檢測波長為254 nm；柱溫：30℃，見圖1。

2.2對照品貯備液的制備分別稱取黃芩苷16.67 mg置于50 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度搖勻；大黃素9.82 mg置于200 mL的容量瓶中加甲醇稀釋至刻度搖勻，精密量取25 mL于50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度搖勻，即得對照品貯備液。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1線性關(guān)系考察精密量取各對照品貯備液，分別置于同一量瓶中，加甲醇分別制成含黃芩苷濃度0.006 7、0.013 0、0.033 4、0.066 7、0.100 0 mg/mL，大黃素0.000 491、0.000 982、0.002 455、0.004 910、0.007 365 mg/mL的溶液，取10ul注入液相色譜儀，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，大黃素回歸方程為y=4E+07x-140 4.6 R2=0.999 9，表明在0.000 491 mg/mL ～0.007 365 mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；

黃芩苷回歸方程為y=1E+07x-336 3.2 R2=0.999 8，表明在0.006 7 mg/mL ～0.100 0 mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系

2.3.2精密度試驗精密稱取樣品0.252 4 g于50 mL容量瓶中，加少許50%甲醇溶液超聲30 min，再加50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻。精密量取5 mL于10 mL容量瓶中加50%甲醇溶液稀釋至刻度線搖勻，過濾，照液相色譜條件重復(fù)進樣6次（n=6），大黃素和黃芩苷的RSD分別為 0.15%和0.05%，表明精密度良好。

2.3.3穩(wěn)定性試驗取2.3.2項下溶液于0、2、6、12，24 h進樣測定，大黃素和黃芩苷的RSD分別為0.73%、0.85%，表明大黃素、黃芩苷在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.4重復(fù)性試驗精密稱取同一批次牛黃解毒片細粉六份，按樣品處理方法處理后進行測定，按外標法計算各組分的含量，大黃素和黃芩苷的RSD分別為 0.93%和1.07%，表明重復(fù)性良好。

2.3.5耐用性試驗取樣品溶液，分別采用不同比例的流動相、不同規(guī)格的色譜柱、不同柱溫進行測定，結(jié)果表明該方法耐用性良好。

2.3.6回收率試驗精密稱取牛黃解毒片細粉六份分別置于六個50 mL容量瓶中，分別加入大黃素、黃芩苷對照品適量，加50%甲醇溶液少許超聲30 min，再加50%甲醇溶液稀釋至刻度線搖勻，過濾，精密量取10 uL注入液相色譜儀，計算回收率，大黃素平均回收率為100.46%，RSD%為1.27%，黃芩苷平均回收率為102.91%，RSD%為1.94%，表明該方法的回收率良好，結(jié)果見表1、2。

3結(jié)果與結(jié)論

1.經(jīng)試驗證明該法簡便、快速、靈敏度高、結(jié)果準確，兩種組分可同時測定，能更好的保證藥品質(zhì)量。

2.經(jīng)紫外掃描，在254nm波長處測定靈敏度較高，峰形較好，分離較好干擾因素較少。故選擇254nm為測定波長。

參考文獻：

[1]《中國藥典》2010版一部.

[2]牛黃解毒片中大黃五種成分的HPLC 測定 馬 寧；羅 艷；黃海萍；龔秋紅；胡良；中國醫(yī)藥工業(yè)雜志 230 2005，36（4）.

[3]李太平，丁小文，等.HPLC法測定牛黃解毒片中大黃素、大黃酸的含量中成藥 2003，25（4）；293-295.