趙正煜施 法李 妮

（1 沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110023；2 遼寧省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院，遼寧 沈陽(yáng) 110023；3 遼寧省藥品認(rèn)證中心，遼寧 沈陽(yáng) 110023）

HPLC法同時(shí)測(cè)定濕熱痹膠囊中粉防己堿及防己諾林堿的含量

趙正煜1施 法2李 妮3

（1 沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110023；2 遼寧省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院，遼寧 沈陽(yáng) 110023；3 遼寧省藥品認(rèn)證中心，遼寧 沈陽(yáng) 110023）

目的 建立同時(shí)測(cè)定濕熱痹膠囊中粉防己堿及防己諾林堿的HPLC法。方法 采用高效液相色譜法測(cè)定濕熱痹膠囊中粉防己堿及防己諾林堿的含量。結(jié)果 粉防己堿在0.04322～0.8644 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均回收率為99.2%（RSD=1.3%，n=6）；防己諾林堿在0.04406～0.8812 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為98.2%（RSD=1.7%，n=6）。結(jié)論 該方法重復(fù)性、準(zhǔn)確性良好，可作為標(biāo)準(zhǔn)用于濕熱痹膠囊的質(zhì)量控制。

濕熱痹膠囊；高效液相色譜法；粉防己堿；防己諾林堿

1　儀器與試藥

1.1儀器：島津LC-2010CHT高效液相色譜儀，島津2010UVD，Phenomen HU10260B型超聲波清洗器，Sartorius R200D型電子天平。

1.2試藥：粉防己堿和防己諾林堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為110711-200708，110793-200605）濕熱痹膠囊由本溪三藥集團(tuán)有限公司提供，批號(hào)為131101、131102、131103，標(biāo)示量為0.37克/粒。甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純，水為二次蒸餾水，其余試劑均為分析純［1］。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：色譜柱：安捷倫ZORBAX C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-甲醇-水-冰醋酸（40∶30∶30∶1）（每100 mL含十二烷基磺酸鈉0.41 g），流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。理論板數(shù)按粉防己堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。在上述色譜條件下，樣品中其他成分對(duì)粉防己堿和防己諾林堿的測(cè)定無(wú)干擾。對(duì)照品、樣品及陰性樣品色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1　濕熱痹片HPLC色譜圖

2.2溶液制備

2.2.1供試品溶液制備：取裝量差異項(xiàng)下本品內(nèi)容物，研細(xì)，取0.4 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶?jī)?nèi)，精密加入鹽酸-甲醇（1∶100）的混合溶液25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率50 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用鹽酸-甲醇（1∶100）的混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2陰性對(duì)照品溶液制備：按工藝方法制備缺防己的陰性樣品，其他操作同“2.2.1”項(xiàng)下制成陰性對(duì)照溶液。

2.3線性關(guān)系：精密吸取對(duì)照品溶液5 mL至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。精密吸取上述溶液1、2、5、10、15、20 μL注入液相色譜儀中，測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，粉防己堿在0.04322～0.8644 μg范圍內(nèi)時(shí)，線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=-1310.6+693413.5X，r=0.9999；防己諾林堿在0.04406～0.8812 μg范圍內(nèi)時(shí)，線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=-1512.8+795032.4X，r=0.9999。

2.4精密度實(shí)驗(yàn)：精密吸取同一樣品溶液（批號(hào)131101）重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，粉防己堿和防己諾林堿RSD分別為0.9%和0.7%，結(jié)果表明，本試驗(yàn)精密度良好。

2.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取同一批樣品（131101）按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備方法，分別于配制后0，2，4，6，8，12 h，測(cè)定峰面積，粉防己堿和防己諾林堿RSD分別為1.2%和1.7%。測(cè)定結(jié)果表明，供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6加樣回收率實(shí)驗(yàn)：精密稱取已知準(zhǔn)確含量的同一批樣品（131101）6份各0.2 g，分別精密加入粉防己堿對(duì)照品溶液（C=0.06012 mg/mL）5 mL，防己諾林堿對(duì)照品溶液（C=0.07016 mg/mL）5 mL，鹽酸-甲醇（1∶100）的混合溶液15 mL，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備方法操作，測(cè)定加標(biāo)樣品中的粉防己堿及防己諾林堿的含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。測(cè)定結(jié)果表明，本試驗(yàn)準(zhǔn)確性良好。

3　討 論

本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了方法耐用性考察，采用安捷倫ZORBAX C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm）色譜柱和奧迪馬C18（4.6 mm×250mm，5μm）色譜柱，均能達(dá)到較好的分離效果。并采用安捷倫ZORBAX C18色譜柱，考察了流速及柱溫變化對(duì)方法的影響，發(fā)現(xiàn)流速在0.8～1.2 mL/min范圍內(nèi)，柱溫在30～40 ℃范圍內(nèi)改變對(duì)分離效果無(wú)影響。

［1］韓新峰，杜天信，李無(wú)陰.濕熱痹膠囊治療濕熱痹阻型風(fēng)濕病的臨床觀察［J］.中醫(yī)正骨，2002，14（4）：9-11.

表1　粉防己堿回收率試驗(yàn)

R282.710.3

B

1671-8194（2015）29-0044-01