黃燕　羅二平　朱義玲　闞延婷　甘建和*

H7N9禽流感患者外周血T淋巴細胞亞群的分析及臨床意義

黃燕羅二平朱義玲闞延婷甘建和*

目的 探討H7N9禽流感患者外周血T淋巴細胞亞群的變化及臨床意義。方法 將23例H7N9禽流感患者（感染組）根據(jù)臨床治療預后分為好轉組15例和死亡組8例，另選擇體檢健康者20例為正常對照組。采用流式細胞術檢測外周血T淋巴細胞亞群CD3+CD4+T淋巴細胞、CD3+CD8+T淋巴細胞、Treg、Th17、CD3+CD8-IFN-γ+（Th1細胞）、CD3+CD8-IL-4+（Th2細胞）百分率的變化。結果 感染組治療前外周血CD3+CD4+T淋巴細胞百分率、CD3+CD8+T淋巴細胞百分率明顯低于正常對照組（P＜0.05），而Th17百分率、Th2細胞百分率較正常對照組明顯增高（P＜0.05）；好轉組治療后外周血CD3+CD4+T淋巴細胞、Treg、CD3+CD8+T淋巴細胞百分率較治療前明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），治療后外周血Th17細胞百分率、Th1細胞百分率較治療前明顯下降（P＜0.05）；死亡組治療前、后上述指標間差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結論 H7N9禽流感患者存在嚴重的T淋巴細胞失衡，監(jiān)測H7N9禽流感患者T淋巴細胞指標變化，對評估臨床預后具有重要的參考價值。

H7N9禽流感病毒 T淋巴細胞亞群 Th17 Treg

人感染H7N9禽流感是有H7N9禽流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，其重癥肺炎患者?？焖龠M展為急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）、膿毒癥、感染性休克甚至多臟器功能衰竭，目前研究認為H7N9禽流感病毒感染人體誘發(fā)的細胞因子免疫調節(jié)失衡是導致一系列危重并發(fā)癥的主要原因，同時機體免疫功能狀況也是決定禽流感病情發(fā)展和預后的重要因素。作者通過監(jiān)測近2年本院收治的H7N9禽流感患者的外周血T淋巴細胞亞群并分析其變化，探討H7N9禽流感的免疫學發(fā)病機制，了解免疫功能變化對疾病預后的影響。

1　臨床資料

1.1一般資料 2013年4月至2015年4月本院救治的H7N9禽流感患者23例（感染組），其中男17例，女6例，年齡20～83歲。根據(jù)患者臨床治療預后分為好轉組15例，其中男12例，女3例；年齡20 ～ 75歲。死亡組8例，其中男5例，女3例；年齡28 ～ 83歲。診斷依據(jù)參照《人感染H7N9禽流感診療方案》（2014年版）［1］。另選擇同期本院體檢健康者20例為正常對照組，其中男14例，女6例；年齡23～75歲。

1.2檢查方法 T淋巴細胞亞群檢測：所有患者均于住院第2天空腹抽靜脈血4ml，采用肝素鈉抗凝。治療后所測數(shù)據(jù)均為患者最后1次空腹抽血檢測。檢測采用美國貝克曼庫爾特XL-100流式細胞儀，所用試劑均由貝克曼提供，并通過CXP軟件進行熒光信號參數(shù)獲取和分析，獲得外周血CD3+CD4+T淋巴細胞、CD3+CD8+T淋巴細胞、Treg、Th17、CD3+CD8-IFN-γ+（Th1細胞）、CD3+CD8-IL-4+（Th2細胞）的百分率。

1.3統(tǒng)計學方法 采用SPSS統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料用（x±s）表示，兩組間比較應用兩獨立樣本t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1兩組患者T淋巴細胞亞群百分率比較 見表1。

表1　兩組患者T淋巴細胞亞群百分率比較（%）

2.2好轉組與死亡組治療前后T淋巴細胞亞群百分率比較 見表2。

表2　好轉組與死亡組治療前后T淋巴細胞亞群百分率比較（%）

3　討論

T淋巴細胞是機體維持免疫穩(wěn)定，發(fā)揮免疫防御、免疫監(jiān)視功能的重要細胞之一，根據(jù)其在免疫應答中的功能不同，分為輔助性T細胞、效應性T細胞、抑制性T細胞、細胞毒性T細胞等，一旦這些細胞在數(shù)量上或功能上發(fā)生變化，機體免疫平衡被打破，由此出現(xiàn)的免疫紊亂將導致臨床發(fā)病或病情惡化。因近年來流感病毒如H1N1、H1N5、H7N9在我國流行，嚴重威脅人民健康，目前也越來越重視T淋巴細胞在流感患者中的研究。

王會軍等［2］發(fā)現(xiàn)，H7N9禽流感患者外周血CD3+、CD8+、CD4+T細胞絕對數(shù)均低于正常對照組，治愈患者治療后上述指標絕對數(shù)較治療前明顯升高，死亡組治療前后上述指標之間差異無統(tǒng)計學意義，這與本資料結果大致相仿，提示在H7N9病毒感染患者中均存在比較嚴重的T淋巴細胞亞群失衡，其免疫功能紊亂導致機體發(fā)病甚至病情進展惡化。除絕對數(shù)上的差異，本資料還發(fā)現(xiàn)，好轉組治療后患者外周血CD3+CD4+T淋巴細胞百分率、CD3+CD8+T淋巴細胞百分率高于治療前，且與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學意義，這與王會軍等［2］的研究結果也類似，提示經過治療后患者機體免疫紊亂狀態(tài)得以糾正，免疫平衡的恢復促進機體康復。有研究證明，H7N9感染與SARS及H5N1一樣存在突發(fā)的細胞因子免疫調節(jié)失衡［3］，機體的免疫平衡狀態(tài)被打破，表現(xiàn)為免疫抑制作用弱而炎癥反應強的相對過激或亢進狀態(tài)，因此，作者還監(jiān)測具有免疫抑制或免疫無能作用的Treg細胞，以及能招募中性粒細胞等多種炎性反應細胞，且可分泌眾多炎性反應因子明顯促進炎癥反應的Th17細胞，結果發(fā)現(xiàn)，好轉組治療前Treg較正常對照組明顯下調，Th17百分率較正常明顯升高，而治療后好轉組患者外周血Treg較前表達上調且與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義，而好轉組治療后Th17雖較正常仍高，較治療前卻有明顯下降，這樣的變化趨勢亦提示經治療后癥狀改善的患者體內具有抑制性作用的調節(jié)性T細胞的比例明顯增多，其抑制其他免疫效應細胞的激活和增殖的作用亦明顯增強，可以有效阻止免疫過激反應，表現(xiàn)為Th17細胞的百分率下調。徐娟等［4］研究發(fā)現(xiàn)甲型H1N1流感危重患者外周血調節(jié)性T細胞比例較正常顯著降低，機體免疫抑制相對不足，細胞免疫異常在此類疾病的發(fā)病機制中起重要作用。然而，方木通等［5］研究認為Th17淋巴細胞在甲型H1N1流感患者中的比例較健康人群顯著下降，雖然均為甲型流感病毒感染，但結果與本資料H7N9禽流感中明顯有差異，可能H7N9病情進展快，大多早期即進展為重癥肺炎、呼吸衰竭、ARDS甚至多臟器功能衰竭，合并細菌感染甚至真菌感染幾率高有關，而H1N1流感輕癥患者多，相對炎癥反應弱；同時使用的檢測方法不盡相同，病例數(shù)不多等因素影響。

本資料顯示H7N9禽流感患者外周血CD3+CD4+T淋巴細胞、CD3+CD8+T淋巴細胞、Treg細胞、Th17細胞、Th1細胞百分率在好轉組患者治療前后差異顯著，但在死亡組差異無統(tǒng)計學意義，表明細胞免疫異常在此類病毒性流感的發(fā)病機制中作用顯著，治療后若患者免疫失衡狀態(tài)得以改善，可能代表較好的臨床預后，因此，監(jiān)測H7N9禽流感患者細胞免疫指標，對評估患者臨床預后具有重要的參考價值。

1中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會. 人感染H7N9禽流感診療方案（2014年版）. 傳染病信息，2014，27（1）：Ⅰ～Ⅳ.

2毛會軍，陳戴紅，邱建萍，等.H7N9禽流感患者外周血T淋巴細胞亞群的分析及意義. 檢驗醫(yī)學，2013，28（9）：758～761.

3Chen Y， Liang W， Yang S，et al.Human infections with the emerging avian influenza A H7N9 virus from wet market poultry： clinical analysis and characterisation of viral genome. Lancet，2013，381：1916～1925.

4徐娟，顏學兵，周培培，等.甲型H1N1流感危重癥患者淋巴細胞亞群和CD4+CD25+調節(jié)性T細胞的檢測及其意義.中華實驗和臨床感染病雜志（電子版），2011，5（1）：18～22.

5方木通，崇雨田，楊桂林，等.Th17淋巴細胞對甲型H1N1流行性感冒病毒清除作用的探討. 中華傳染病雜志，2010，28（10）：593～596.

Objective To investigate the changes and clinical significance of peripheral blood T lymphocyte subsets in influenza A （H7N9）virus infection patients. Methods According to the prognosis，23 patients with avian influenza A （H7N9） virus infection （infection group） were classified into 15 cases of improvement group and 8 cases of dead group. There were 20 cases healthy subjects as the control group，the T lymphocyte subsets in peripheral blood were detected by flow cytomery. Results Compared with the control group，before the treatment，the percentage of CD3+CD4+T cell，CD3+CD8+T cell of the infection group decreased significantly （P＜0.05），and the percentage of Th17、Th2 of the infection group increased significantly （P＜0.05）. In the improvement group，the percentage of CD3+CD4+T cell、Treg、CD3+CD8+T cell were significantly higher than those before the treatment（P＜0.05）after the treatment，but the percentage of Th17、Th1 cell were significantly lower than those before the treatment（P＜0.05）after the treatment. In dead group，there was no statistical significance for all parameters before and after the treatment（P＞0.05）. Conlusions There is imbalance of T lymphocyte subsets in influenza A （H7N9） virus infection patients，to monitor the changes of the T lymphocyte subsets in influenza A （H7N9） virus infection patients has important reference value.

Avian influenza A（H7N9）virus T lymphocyte subsets Th17 Treg

國家“十二五”科技重大專項（2012ZX10002004）

215000 蘇州大學附屬第一醫(yī)院感染病科