王翠娟　封燕琴　駱彩琴　黃知音

三黃巴布軟膏貼劑對甘油果糖所致靜脈炎動物消炎實驗研究

王翠娟封燕琴駱彩琴黃知音

目的 觀察三黃巴布軟膏貼劑對甘油果糖所致動物靜脈炎模型中血清IL-6表達及相關病理鏡檢結果分析。方法 采用實驗兔耳緣靜脈注射甘油果糖，復制靜脈炎模型，采用隨機數(shù)字表法將18只模型兔分為對照組、三黃軟膏組和三黃巴布軟膏貼劑組，每組各6只，模型建立后進行采血送檢及病理學檢測。結果 三組動物模型IL-6含量之間變化差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），此外，病理結果評分顯示巴布劑組與其他兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論 三黃巴布軟膏貼劑可以通過降低血清中IL-6炎癥細胞因子含量，并改善注射區(qū)域血管條件，達到治療甘油果糖靜脈注射引發(fā)實驗兔耳靜脈炎的效果，并較三黃軟膏更具優(yōu)勢，值得臨床實踐應用。

靜脈炎 甘油果糖 巴布軟膏貼劑

靜脈炎是由于輸入強刺激性、高濃度藥物或使用時間較長，損傷靜脈內(nèi)皮細胞而誘發(fā)［1］。甘油果糖作為一種高滲制劑，因其有效的脫水作用，被廣泛應用于骨科領域，然而在臨床應用中發(fā)現(xiàn)甘油果糖注射后，患者常會出現(xiàn)注射區(qū)域疼痛、腫脹等急性血管無菌性炎癥病理變化，給患者帶來痛苦，降低了治療的依從性［2］。因此甘油果糖所致靜脈炎問題臨床亟待解決，三黃巴布軟膏貼劑經(jīng)動物實踐研發(fā)完成，主要采用中藥黃連、黃芪、黃柏等提煉加工為中藥貼敷劑型。經(jīng)實驗發(fā)現(xiàn)，該劑型對防護甘油果糖所致靜脈炎療效良好，現(xiàn)報道如下。

1　材料與方法

1.1實驗動物與藥物 新西蘭實驗兔18只，體重2.5～3.0kg。三黃軟膏：大黃、黃柏、黃芩各10g，粉碎，過篩，另取凡士林適量，烊化，調(diào)成膏狀。三黃巴布軟膏：取三黃軟膏生藥1劑（大黃、黃柏、黃芩各10g），大黃、黃芩采用6倍 60% 乙醇熱回流提取1h，回收乙醇，濃縮至適量，得濃縮液A；取黃柏，與大黃、黃芩乙醇提取后藥渣合并，加水6倍，煎煮3次，2 h/次，濾過，合并濾液，濃縮至適量，得濃縮液B。合并濃縮液，噴霧干燥，得三黃提取物；具體處方如下：三黃提取物100g，卡波姆90g，聚乙烯醇90g，聚丙烯酸鈉120g，羧甲基纖維素鈉105g，氮酮20g，甘油1500g，丙二醇適量，雙蒸水適量。采用隨機數(shù)字表法將動物分為對照組、三黃軟膏組和三黃巴布軟膏貼劑組三組，每組各6只。在清潔環(huán)境中單籠飼養(yǎng)，適應性喂養(yǎng)1周。

1.2靜脈炎模型的建立 1周后在各實驗組兔耳緣靜脈距耳尖2cm處穿刺，甘油果糖氯化鈉注射液按照1.0mg/kg劑量，并以生理鹽水稀釋至10ml，室溫下靜脈推注，待兔耳出現(xiàn)注射區(qū)域腫脹，以確定模型建立成功。

1.3干預措施 對照組不給予任何干預措施。三黃軟膏組及三黃巴布軟膏貼劑組分別予三黃軟膏外涂和三黃巴布軟膏貼劑外用，范圍：從穿刺點前端0.5cm處沿靜脈外涂（貼），長4cm寬2cm，三黃軟膏涂抹厚度為3mm。每天采取同樣藥物、方法外敷，1次/d，連續(xù)3d。

1.4標本采集和處理 取造模前各組家兔耳緣靜脈1ml血液，以確立對照組，造模成功72h后，于各組兔耳穿刺處采樣1ml血液，進行冷凍送檢。所有試劑使用前室溫平衡，分別配置及設立標準孔、待測樣品孔、空白孔。向各孔中加入100μl，酶標板加上覆膜，37℃溫育2h，棄去液體后，每孔加檢測工作液A（臨用前配制）100μl，酶標板加上覆膜，37℃溫育1h，再棄去液體，每孔用350μl的洗滌液洗滌，浸泡1～2min，甩去孔內(nèi)液體，重復洗板3次。而后，每孔加檢測工作液B（臨用前配制）100μl，酶標板加上覆膜，37℃溫育30min，棄去液體，甩干，再重復洗板5次，每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜，37℃避光溫育15min。最后，每孔加終止液50μl，終止反應。在確保酶標板底物無水滴及孔內(nèi)無氣泡后，立即用酶標儀在450nm下測量各孔的吸光度并記錄、分析。再取三組活組織樣本靜脈進行顯微鏡高倍鏡下觀察切片及周圍組織病理損傷染色鏡檢，并從以下幾項指標進行統(tǒng)計：血管內(nèi)皮腫脹、血管周圍水腫、炎性細胞浸潤、內(nèi)皮細胞增生、血管擴張、管腔充血、血管周圍出血、纖維增生、血栓形成等9個項目，每個項目分為4個等級：正常（-）0 分、輕度（+）1 分、中度（++）2 分、重度（+++）3 分，由專業(yè)病理科醫(yī)生盲法判斷，累加所有分數(shù)，并計算出每組每只動物的均分，結果與對照組比較，進行統(tǒng)計分析。

1.5統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包。計量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1藥物對兔靜脈炎模型血清中IL6含量的影響 見表1。

表1　藥物對兔靜脈炎模型血清中IL6含量的影響［pg/ml，（x±s）］

2.2病理結果 顯微鏡下顯示：三黃軟膏組耳緣靜脈周圍可見中度炎癥，炎癥細胞以中性粒細胞為主，同時可見淋巴細胞、巨噬細胞等，多數(shù)可見內(nèi)皮細胞增生（中度或重度），靜脈周圍可見輕度或中度水腫現(xiàn)象，1只管腔充血，3只靜脈周圍出血，3只靜脈周圍成纖維細胞增生；對照組6只實驗兔均可見中度或重度炎癥、水腫，3只可見不同程度內(nèi)皮增生、輕度內(nèi)皮腫脹，1只可見小血栓形成；三黃巴布軟膏貼劑組炎癥程度較三黃軟膏組減輕，內(nèi)皮細胞增生以輕度和中度為主，2只出現(xiàn)輕度水腫，無血管擴張、血栓形成。見圖1。

圖1　鏡下三組病理結果

2.3動物對兔靜脈炎模型血清病理檢測結果評分 見表2。

表2　動物對兔靜脈炎模型血清病理檢測結果評分（±s）

表2　動物對兔靜脈炎模型血清病理檢測結果評分（±s）

注：與三黃軟膏組、對照組比較，*P＜0.05

組別n評分結果巴布劑組64.667±1.506*三黃軟膏組66.833±1.602對照組610.167±4.215

3　討論

化學性靜脈炎是輸注高滲性藥物常見的并發(fā)癥之一。甘油果糖因高滲性易引起靜脈管壁通透性增加，造成血管內(nèi)皮細胞脫水，甚至萎縮壞死，引起無菌性靜脈炎［3］。而IL-6具有致炎和抗炎的雙向功能，其作用與組織中的含量有關，正常水平對機體有利，產(chǎn)生過多會引起一系列炎性損害，此外，IL-6水平的變化可以反映炎癥程度［4］。研究認為在炎癥、感染或某些腫瘤等情況下，血清IL-6水平會不同程度地升高［5］。因此控制血清中IL-6水平過度增高，可有效抑制炎癥的浸潤和組織的損傷。

由實驗結果分析，對照組實驗動物造模后IL-6表達與造模前比較存在較大差異（P＜0.05），由此可見，甘油果糖致家兔耳緣靜脈炎造模成功；三黃軟膏組及三黃巴布軟膏貼劑組IL-6含量較對照組明顯減低（P＜0.05），說明兩組藥物在治療甘油果糖所致的家兔耳緣靜脈炎時均有效果。經(jīng)比較，三黃軟膏組的IL-6水平較三黃巴布軟膏貼劑略高，可能與三黃軟膏易變硬脫落、影響藥物的有效吸收有關。在本資料結果中亦顯示三黃巴布軟膏貼劑組IL-6含量較其他兩組低，可以證實三黃巴布軟膏貼劑更具臨床推廣價值，但由于本實驗樣本量較小，期待有進一步的研究報道。

此外，對于病理觀察發(fā)現(xiàn)三黃巴布軟膏貼劑組炎癥程度較其他兩組明顯減輕，內(nèi)皮細胞增生以輕度和中度為主，僅2只出現(xiàn)輕度水腫，且在三黃巴布軟膏貼劑組中6只模型兔均未出現(xiàn)血管擴張、血栓形成。與此同時，在三組病理結果評分上可以發(fā)現(xiàn)，三黃巴布軟膏貼劑組顯著低于其他兩組。由此可見，三黃巴布軟膏貼劑中含有黃連、黃柏等解熱類涼性藥物成分在預防甘油果糖所致靜脈炎并發(fā)癥上具有優(yōu)勢［6］，但對于三黃巴布軟膏貼劑是否具有抑制血管擴張及預防血栓形成的作用還需進一步的實驗觀察。

原三黃軟膏劑型防護甘油果糖所致靜脈炎療效確切［7～9］，但尚存在易脫落、污染衣物、患者依從性欠佳等缺陷［10］。中藥巴布軟膏貼劑是指以水溶性高分子化合物或親水性物質(zhì)作基質(zhì)，與中藥提取物制成的中藥貼敷劑。中藥巴布軟膏貼劑系具有載藥量大、透氣性與保濕性好、無皮膚刺激性與致敏性、可反復揭貼、應用方便、不污染衣物等優(yōu)點［11］。近年來中藥巴布軟膏貼劑制作工藝日益完善，臨床應用日益廣泛［12］，將已廣泛運用于臨床的三黃軟膏進行改良，制成現(xiàn)有的三黃巴布軟膏貼劑，不僅保留了原有藥物的有效性，于此同時，更利于臨床有效、方便使用等優(yōu)點［13］。

綜上所述，三黃巴布軟膏貼劑可以通過降低血清中炎性細胞因子IL-6含量，并改善注射區(qū)域血管條件，達到治療甘油果糖所致實驗兔耳靜脈炎的效果，并且較原先制劑更趨優(yōu)勢，該實驗結果可為進一步推行三黃巴布軟膏貼劑的臨床使用提供依據(jù)。

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Objective To observe the effect on the serum level of IL-6 of San huang babu ointment patch on the animal model of phlebitis caused by glycerin fructose and related pathology change. Methods Glycerol fructose were injected into the experimental rabbit ear margin vein to copy phlebitis model，random number method was applied to pick divide 18 rabbits into three groups with 6 model rabbits in each， control group，san huang ointment and San huang babu ointment patch group，blood sample were collected and pathological examinationwere applied. Results The serum IL-6 levels varied signifi cantly（P＜0.05）.Three groups of animal model of，in addition，the pathological results scores showed san huang babu ointment patch group had statistical differences compared with the other two groups （P＜0.05）. Conclusion San huang babu ointment patch can reduce serum IL-6 infl ammatory cytokine levels，and improve the injection area vascular conditions，therefore can treat the experimental rabbit ear vein infl ammation triggered by glycerin fructose intravenous injection.，the effect is better than san huang ointment.

Phlebitis Glycerol fructose san huang babu ointment patch

浙江省護理科學研究項目（2012-A002）

310007杭州市中醫(yī)院骨傷科