廖 欣 巖林蘋 白玲玲 王 婷 蘇 華 陳 星

江蘇省南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科，江蘇南京 210002

熱敷騰包質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的方法研究

廖 欣 巖林蘋 白玲玲 王 婷 蘇 華 陳 星▲

江蘇省南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科，江蘇南京 210002

目的研究建立熱敷騰包的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 方法 采用薄層色譜鑒別法對(duì)方中艾葉、乳香、黃柏、赤芍、續(xù)斷、桑寄生6味中藥進(jìn)行定性分析；采用醇溶性浸出物熱浸法測(cè)定制劑中浸出固體物。 結(jié)果薄層色譜斑點(diǎn)清晰，分離度好，陰性無干擾，專屬性強(qiáng)；浸出固體物≥2.0%。 結(jié)論建立熱敷騰包質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的方法有效可行，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，制劑質(zhì)量穩(wěn)定可控。

熱敷騰包；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜法；醇溶性浸出物

熱敷騰包由艾葉、透骨草、乳香、丹參、黃柏、赤芍等19味中藥組成，為南京軍區(qū)南京總醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）自主研發(fā)的外用制劑。采用化學(xué)發(fā)熱劑熱包作為熱源，藥材經(jīng)粉碎滲漉提取精制后吸收于無紡布而制成藥物紙，使用時(shí)先將藥物紙敷于患處，再用熱包進(jìn)行熱敷，借助熱的傳導(dǎo)作用促進(jìn)局部血液循環(huán)，進(jìn)而促進(jìn)藥物吸收，并發(fā)揮治療作用。適用于關(guān)節(jié)炎、肩周炎、腰腿痛、慢性腸炎、痛經(jīng)、子宮內(nèi)膜異位等癥。為了更好地控制熱敷騰包的質(zhì)量，對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，根據(jù)中醫(yī)藥理論采用薄層色譜法對(duì)方中君藥艾葉、貴重藥材乳香、臣藥黃柏、赤芍和佐藥續(xù)斷、桑寄生進(jìn)行了定性鑒別并對(duì)其浸出固體物做了限量測(cè)定，方法專屬性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確可靠，可有效控制熱敷騰包的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

WFH-203B三用紫外分析儀（上海精科實(shí)業(yè)有限公司），AE240電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司），KQ-250DB臺(tái)式數(shù)控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司），HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋（國(guó)華電器有限公司），SC202-00電熱恒溫干燥箱（江蘇省南通市金余科研儀器設(shè)備廠）；以上儀器均檢定合格，實(shí)驗(yàn)所用玻璃量具均經(jīng)過校驗(yàn)合格。

1.2 試劑和試藥

艾葉對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：121345-201002），乳香對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：120970-201305），鹽酸小檗堿對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110713-200208），赤芍對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：121092-201003），芍藥苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110736-200732），川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111685-201305），桑寄生對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：121075-201003）。熱敷騰包（規(guī)格：熱包1個(gè)加435 mm×160 mm藥物紙 1張，我院自制，批號(hào)：150423、150528、150612），其余所用試劑均為分析純。薄層層析硅膠G（薄層色譜用，青島海洋化工廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 艾葉的薄層色譜鑒別 艾葉主含揮發(fā)油，為多成分混合物，經(jīng)分離鑒定的有：萜品烯醇-4、芳樟醇、桉油素、樟腦等。該薄層檢查法選擇這些成分作為觀察指標(biāo)進(jìn)行薄層鑒別。具體說明如下：取本品一袋，取出藥物紙，加石油醚（30～60℃）100 mL浸泡2 h，濾過蒸干，殘?jiān)邮兔眩?0～60℃）溶解并定容至1 mL，作為樣品溶液。另取艾葉對(duì)照藥材1 g，同樣品溶液制備法制成對(duì)照藥材溶液。除艾葉外的藥材按處方比例稱取、粉碎，按生產(chǎn)工藝及上述樣品溶液制備法制成陰性溶液。照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法，吸取樣品溶液與陰性溶液各20 μL，對(duì)照藥材溶液10 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑自制的硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸-乙酸乙酯 （8∶0.5∶2）的上層溶液為展開劑展開晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視，結(jié)果顯示，樣品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同的紅色熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照在此位置上無斑點(diǎn)，見圖1（封四）。

2.1.2 乳香的薄層色譜鑒別 乳香主要含有樹脂、樹膠和揮發(fā)油，樹脂的主要成分為游離α/β-乳香酸等；樹膠主要成分為阿糖酸的鈣鹽和鎂鹽；揮發(fā)油含蒎烯、α，β-水芹烯等。該薄層檢查法選擇這些成分作為觀察指標(biāo)進(jìn)行薄層鑒別[1-2]。具體說明如下：取本品一袋，取出藥物紙，加150 mL乙醚室溫超聲30 min，濾過蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴ト芙獠⒍ㄈ葜? mL，作為樣品溶液。另取乳香對(duì)照藥材0.5 g，加50 mL乙醚，同樣品溶液制備法制成對(duì)照藥材溶液。除乳香外的藥材按處方比例稱取，粉碎，按生產(chǎn)工藝及上述樣品溶液制備法制成陰性溶液。照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法，吸取樣品溶液與陰性溶液各10 μL，對(duì)照藥材溶液2 μL，分別點(diǎn)于同一市售的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-石油醚（30～60℃）（1∶10）為展開劑展開晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，105℃下加熱3 min。結(jié)果顯示，樣品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同的桃紅色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照在此位置上無斑點(diǎn)，見圖2。

2.1.3 黃柏的薄層色譜鑒別 選擇鹽酸小檗堿作為觀察指標(biāo)對(duì)黃柏進(jìn)行薄層鑒別，具體說明如下：取本品一袋，取出藥物紙，加甲醇150 mL加熱回流30 min，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為樣品溶液。另取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量加甲醇制成每毫升含0.5 mg的對(duì)照品溶液。除黃柏外的藥材按處方比例稱取，粉碎，按生產(chǎn)工藝及上述樣品溶液制備法制成陰性溶液。照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法，吸取樣品溶液與陰性溶液各20 μL，對(duì)照品溶液10 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑自制的硅膠G薄層板上，以甲酸-乙酸異戊酯-36%醋酸（3∶7∶1）為展開劑展開晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視，結(jié)果顯示，樣品色譜在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同的黃色熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照在此位置上無斑點(diǎn)，見圖3。

圖2 乳香鑒別的TLC圖譜

圖3 黃柏鑒別的TLC圖譜

2.1.4 赤芍的薄層色譜鑒別 赤芍含芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷等，具有清熱涼血，散瘀止痛的功效[3]147-148。該薄層檢查法選擇芍藥苷作為觀察指標(biāo)進(jìn)行薄層鑒別[4-5]，具體說明如下：取本品一袋，取出藥物紙，加150 mL乙醇水浴加熱回流1 h，濾過蒸干，殘?jiān)铀?0 mL溶解，用乙醚振搖提?。?5 mL×2次），棄去乙醚液，水層再用正丁醇振搖提?。?0 mL×3次），合并正丁醇提取液，再用純化水洗滌（20 mL×2次），棄去水液，正丁醇提取液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜? mL，作為樣品溶液。另取赤芍對(duì)照藥材0.5 g，加50 mL乙醇，同樣品溶液制備法制成對(duì)照藥材溶液。再取芍藥苷對(duì)照品適量加甲醇制成每毫升含1 mg的對(duì)照品溶液。除赤芍以外的藥材按處方比例稱取，粉碎，按生產(chǎn)工藝及上述樣品溶液制備法制成陰性溶液。照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法，吸取樣品溶液與陰性溶液各20 μL，對(duì)照藥材溶液與對(duì)照品溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑自制的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇-甲酸（5∶40∶10∶0.4）為展開劑展開晾干，噴5%香草醛硫酸溶液，105℃下加熱3 min。結(jié)果顯示，樣品色譜在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照在此位置上無斑點(diǎn)，見圖4。

圖4 赤芍鑒別的TLC圖譜

2.1.5 續(xù)斷的薄層色譜鑒別 川續(xù)斷皂苷Ⅵ為其主要作用成分，該薄層檢查法選擇此成分作為觀察指標(biāo)進(jìn)行薄層鑒別[6]。具體說明如下：取本品一袋，取出藥物紙，加100 mL甲醇室溫超聲30 min，濾過蒸干殘?jiān)铀?0 mL溶解，用正丁醇振搖提?。?0 mL×2次），合并正丁醇提取液，用30 mL氨試液洗滌一次，氨試液棄去，正丁醇提取液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜? mL，作為樣品溶液。另取川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)照品適量加甲醇制成每毫升含1 mg的對(duì)照品溶液。除續(xù)斷外的藥材按處方比例稱取，粉碎，按生產(chǎn)工藝及上述樣品溶液制備法制成陰性溶液。照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法，吸取樣品溶液與陰性溶液各15 μL，對(duì)照品溶液10 μL，分別點(diǎn)于同一市售的硅膠G薄層板上，以甲醇-三氯甲烷-水（7∶13∶2）的下層溶液為展開劑（分層時(shí)間久一些，使其分至澄清），展開晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，105℃下加熱3 min。結(jié)果顯示，樣品色譜在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照在此位置上無斑點(diǎn)，見圖5。

2.1.6 桑寄生的薄層色譜鑒別 桑寄生主要含黃酮類化合物：槲皮素、槲皮苷及少量的右旋兒茶酚[3]281，該薄層檢查法選擇這些成分作為觀察指標(biāo)進(jìn)行薄層鑒別[7-8]。具體說明如下：取本品一袋，取出藥物紙，加甲醇-水（1∶1）100 mL，加熱回流1 h，趁熱濾過，濾液濃縮至約20 mL，加水10 mL，再加稀硫酸0.5 mL，煮沸回流1 h，用乙酸乙酯振搖提?。?0 mL×2次），合并乙酸乙酯提取液，蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴ト芙獠⒍ㄈ葜? mL，作為樣品溶液。另取桑寄生對(duì)照藥材1 g，同樣品溶液制備法制成對(duì)照藥材溶液。除桑寄生外的藥材按處方比例稱取，粉碎，按生產(chǎn)工藝及上述樣品溶液制備法制成陰性溶液。

圖5 續(xù)斷鑒別的TLC圖譜

照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法，吸取樣品溶液與陰性溶液各15 μL，對(duì)照藥材溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一市售的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲苯-甲酸（4∶5∶0.8）為展開劑展開晾干，噴2%三氯化鐵乙醇溶液。結(jié)果顯示，樣品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的墨色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照在此位置上無斑點(diǎn)，見圖6。

圖6 桑寄生鑒別的TLC圖譜

2.2 浸出固體物限量測(cè)定

取本品一袋，取出藥物紙置錐形瓶中，精密加入75%乙醇100 mL使其完全浸泡，稱重，超聲30 min，放冷，補(bǔ)足重量，搖勻，濾過，精密量取濾液10 mL置已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，置恒溫干燥箱中105℃干燥3 h，立即移至干燥器中，冷卻30 min后，迅速稱定重量[8]，計(jì)算供試品中浸出固體物的含量（%），不得少于2.0%[3]附錄XA。測(cè)定10批樣品，3批制劑的浸出固體物含量均在標(biāo)準(zhǔn)限度內(nèi)，該標(biāo)準(zhǔn)有效可行，制劑質(zhì)量穩(wěn)定可控。見表1。

表1 浸出固體物測(cè)定結(jié)果

3 討論

熱敷騰包共19味中藥制成，藥味較多，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無薄層色譜鑒別項(xiàng)，此次實(shí)驗(yàn)對(duì)方中艾葉、乳香、黃柏、赤芍、續(xù)斷、桑寄生6味中藥進(jìn)行薄層色譜定性鑒別。經(jīng)方法學(xué)考察，所建立的薄層色譜鑒別方法專屬性強(qiáng)，重復(fù)性和穩(wěn)定性好，陰性無干擾，取3批不同批號(hào)的樣品依法檢驗(yàn)，結(jié)果均滿意，可作為熱敷騰包的質(zhì)量控制方法。

方中艾葉含揮發(fā)油，易溶于石油醚、二硫化碳等，故采用石油醚浸泡提取。以藥典收載的石油醚（60～90℃）加熱回流提取為提取方法，所提取出的樣品與對(duì)照藥材以及陰性對(duì)照在相應(yīng)位置上均有紫紅色斑點(diǎn)，陰性干擾較大。經(jīng)處方分析實(shí)驗(yàn)，分別以石油醚（60～90℃）和石油醚（30～60℃）為提取溶劑，采用浸泡提取的方法，后者所提取出的樣品點(diǎn)樣后斑點(diǎn)較前者清晰，分離度好，陰性無干擾，所以選用石油醚（30～60℃）為艾葉薄層色譜鑒別的提取溶劑浸泡提取[9]。

黃柏為方中臣藥，含生物堿類等，其中生物堿類中的鹽酸小檗堿為其主要作用成分，含量較多，用于抗菌、抗炎、解熱等癥，易溶于甲醇[10]。本研究分別用“1%醋酸甲醇溶液”與“甲醇溶液”為提取溶劑做比較，以藥典中“三氯甲烷-甲醇-水（30∶15∶4）下層溶液，氨蒸氣飽和為展開劑，稀碘化鉍鉀試液為顯色劑”與“乙酸異戊酯-36%醋酸-甲酸（7∶1∶3）為展開劑，紫外燈（365 nm）下檢視為顯色劑”為顯色條件相比較，前者所提取出的樣品斑點(diǎn)與對(duì)照品斑點(diǎn)拖尾嚴(yán)重，分離度較差，并且樣品斑點(diǎn)顏色較淺，不利于薄層色譜分析。后者所提取出的樣品與對(duì)照品斑點(diǎn)位置相一致，且較前者斑點(diǎn)分離度高，斑點(diǎn)表現(xiàn)較好，陰性無干擾，所以選用甲醇溶液為提取溶劑，乙酸異戊酯-36%醋酸-甲酸（7∶1∶3）為展開劑，紫外燈（365 nm）下檢視為顯色劑作為黃柏的薄層色譜鑒別方法。

方中續(xù)斷主要含龍膽堿、皂苷類成分（如川續(xù)斷皂苷Ⅵ）及揮發(fā)油，其中主要作用成分川續(xù)斷皂苷Ⅵ具有止血，促進(jìn)骨損傷愈合，降低子宮收縮等作用，易溶于正丁醇，故供試品溶液采用正丁醇振搖提取，因雜質(zhì)較多用氨水洗滌可有效除去雜質(zhì)，并采用皂苷類常用顯色劑10%硫酸乙醇溶液作為顯色劑，斑點(diǎn)表現(xiàn)較好，可作為續(xù)斷的質(zhì)量控制方法。

方中桑寄生的提取方法為《中國(guó)藥典》中所收載的方法，但藥典以甲苯（水飽和）-甲酸-甲酸乙酯（5∶1∶4）為展開劑，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈（365 nm）下檢視為顯色劑的方法不適用于本制劑中桑寄生的鑒別，其樣品與對(duì)照均無斑點(diǎn)。經(jīng)查閱文獻(xiàn)與實(shí)驗(yàn)摸索后，分別以“甲苯-乙酸乙酯（3∶1）為展開劑，10%硫酸乙醇溶液為顯色劑”與“甲苯-乙酸乙酯-甲酸 （5∶4∶0.8）為展開劑，2%三氯化鐵乙醇溶液為顯色劑”相比較，點(diǎn)樣結(jié)果顯示后者樣品與對(duì)照藥材在相同位置有一相同的墨色斑點(diǎn)，且斑點(diǎn)分離度較前者好，清楚明顯，陰性對(duì)照在此位置上沒有斑點(diǎn)，故后者可作為桑寄生的質(zhì)量控制方法。

熱敷騰包為我院自制外用制劑，其藥味較多，藥量相對(duì)較小，陰性干擾大，指標(biāo)成分亦較多，給含量測(cè)定及其方法學(xué)考察帶來一定困難，為此本研究對(duì)制劑的浸出固體量進(jìn)行限量測(cè)定，加強(qiáng)了熱敷騰包的質(zhì)量控制，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也更加規(guī)范完整可靠。

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Quality standard establishment of Refutengbao

LIAO Xin YAN Linping BAI Lingling WANG Ting SU Hua CHEN Xing▲
Department of Preparation Division,Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command,Jiangsu Province,Nanjing 210002,China

Objective To research the establishment of quality standard of Refutengbao.Methods TLC was used in Folium Artemisiae argyi,Frankincense,Phellodendron,Radix Paeoniae rubra,Radix Dipsaci and the Parasitic Loranthus of prescription for qualitative analysis.Solid content in the preparation was determined by the method of alcohol leaching. Results The TLC spots were clear,the separation degree was good without interference.The method was highly specific.The extract was more than or equal to 2.0%.Conclusion The established quality standard of Refutengbao is feasible and effective,strong specific,with good repeatability,the quality of the preparation is stable and controllable.

Refutengbao;Quality standard;Thin Layer Chromatography;Ethanol-soluble extractive

R927.11

A

1673-7210（2015）11（c）-0013-04

2015-07-23本文編輯：趙魯楓）

全軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項(xiàng)課題重點(diǎn)項(xiàng)目（14ZJZ08）。

▲通訊作者