門萬琪，孫禮權(quán)，陳曉宇

(安徽醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，安徽合肥 230022)

離心技術(shù)應(yīng)用廣泛，主要根據(jù)物質(zhì)粒子作勻速圓周運(yùn)動(dòng)，同時(shí)受到一個(gè)向外的離心力的過程而發(fā)展起來的一種分離技術(shù)，一般實(shí)驗(yàn)室使用常規(guī)低速離心機(jī)制備符合實(shí)驗(yàn)要求的血清標(biāo)本，但臨床工作中常能遇到一些特殊類型標(biāo)本，如真性紅細(xì)胞增多癥(polycythemia vera，PV)患者標(biāo)本在使用常規(guī)離心手段時(shí)，不能產(chǎn)生足夠試驗(yàn)用量的血清，需要反復(fù)離心，即浪費(fèi)寶貴檢驗(yàn)時(shí)間，也可能會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果，尤其是血糖的結(jié)果［1］，這可能因?yàn)镻V患者紅細(xì)胞數(shù)量多，血液黏度大，標(biāo)本前處理時(shí)間過長，會(huì)影響一系列生化檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。由于使用常規(guī)3 000～3 500 rpm轉(zhuǎn)速的離心方法很難取得足夠臨床生化、免疫等檢查所需的血清，本文即探討怎樣快速、簡便、有效的分離PV患者標(biāo)本，方便臨床實(shí)驗(yàn)室實(shí)際工作的開展。

1 資料

1.1 一般資料 隨機(jī)選取2012年9月1日—2013年3月31日安徽醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院收治的PV患者12例，早晨空腹采集全血。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 用普通生化管采集檢測對象清晨空腹靜脈血，37℃水浴箱放置20 min，分離血清。所有試驗(yàn)對象均在采血后立即送檢，各指標(biāo)均在3 h內(nèi)檢測完畢。

1.2.2 分離血清 將采集的每個(gè)病人的血標(biāo)本分成4組，均置37℃水浴箱20 min，使用中佳KDC－28型低速離心機(jī)，第一組采用3 000 rpm轉(zhuǎn)速，第二組采用3 500 rpm轉(zhuǎn)速，第三組采用4 000 rpm轉(zhuǎn)速，第四組采用4 500 rpm轉(zhuǎn)速，以上各組均離心5 min，取其血清。

1.2.3 生化指標(biāo)測定 采用德國SIEMENS Dimention全自動(dòng)生化儀，試劑由SIEMENS公司提供。按操作說明書進(jìn)行操作。測試的生化指標(biāo)包括下列常用的16項(xiàng):總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(TBiL)、直接膽紅素(DBiL)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、乳酸脫氫酶(LDH)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、尿酸(URCA)、葡萄糖(GLU)、鉀(K)、鈉(Na)、氯(Cl)、鈣(Ca)。

1.3 結(jié)果判斷 在使用不同離心速度條件下產(chǎn)生的血清檢測的生化指標(biāo)，其結(jié)果是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用(±s)表示，采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 比較不同離心速度分離血清的效果 4 500 rpm離心速度下有3支標(biāo)本發(fā)生溶血(1/4標(biāo)本發(fā)生溶血，不采用此方法)，3 000 rpm 組平均產(chǎn)生 315.8 μL 血清、3 500 rpm 組平均產(chǎn)生 448.3 μL 血清、4 000 rpm 組平均產(chǎn)生 723.3 μL血清，見表1。

2.2 比較不同離心速度對生化檢測指標(biāo)的影響 取不同離心速度分離后的血清做生化檢測，比較各項(xiàng)檢測指標(biāo)，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表2。

表1 3 000 rpm組、3 500 rpm組與4 000 rpm組血清離心效果比較(血清產(chǎn)生量μL/5 mL標(biāo)本)

表2 3 000 rpm組、3 500 rpm組與4 000 rpm組血清生化指標(biāo)比較(n=12，±s)

表2 3 000 rpm組、3 500 rpm組與4 000 rpm組血清生化指標(biāo)比較(n=12，±s)

注:3 000 rpm組，3 500 rpm組，4 000 rpm，三組相比，P ＞0.05 。

項(xiàng)目 3 000 rpm組 3 500 rpm組 4 000 rpm組F TP/g·L－175.33 ±4.36 75.40 ±4.27 75.43 ±4.28 3.31 ALB/g·L－1 42.21 ±1.36 42.19 ±1.39 42.02 ±1.42 2.58 TBiL/μmol·L－1 12.12 ±0.55 12.13 ±0.51 12.17 ±0.59 2.69 DBiL/μmol·L－1 5.31 ±0.26 5.33 ±0.22 5.35 ±0.27 3.31 ALT/U·L－1 47.32 ±2.91 47.30 ±2.66 47.31 ±2.79 3.12 AST/U·L－1 31.75 ±1.87 31.70 ±2.88 31.72 ±4.36 2.54 GGT/U·L－1 36.06 ±2.11 36.05 ±2.48 36.04 ±2.45 3.01 LDH/U·L－1 399.04 ±8.47 399.04 ±8.35 399.03 ±8.16 3.22 BUN/mmol·L－1 5.73 ±0.13 5.79 ±0.12 5.72 ±0.12 3.19 CREA/μmol·L－1 73.32 ±3.30 73.31 ±3.51 73.30 ±3.41 2.58 URCA/μmol·L－1 389.31 ±3.55 389.20 ±3.22 389.02 ±3.42 3.29 GLU/mmol·L－1 6.75 ±0.34 6.70 ±0.38 6.72 ±0.39 3.14 K/mmol·L－1 4.15 ±.0.22 4.18 ±0.26 4.14 ±0.25 2.79 NA/mmol·L－1 145.72 ±4.60 145.30 ±4.80 145.20 ±4.80 2.88 CL/mmol·L－1 102.03 ±3.30 102.08 ±3.50 104.08 ±3.55 2.68 CA/mmol·L －12.23 ±0.26 2.26 ±0.21 2.25 ±0.28 2.79

3 討論

真性紅細(xì)胞增多癥(polycythernia vera，PV)是一種病因不明的原發(fā)于造血干/祖細(xì)胞的骨髓增殖性疾病(myeloproliferattive disorders，MPD)，以紅系造血干細(xì)胞異常增殖為主，由于多能造血干細(xì)胞克隆性紊亂，導(dǎo)致形態(tài)較正常的紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板及其祖細(xì)胞在缺乏特異性刺激因素的條件下也能異常增生并累積，但以紅系增生為主［2］。PV臨床特點(diǎn)表現(xiàn)為發(fā)病緩慢、病程較長、全血容量增多、血沉(ESR)明顯緩慢，血液黏滯性增高［3］，可導(dǎo)致成人全身各臟器血流緩慢和組織缺血，及皮膚、黏膜呈紅紫色，肝脾腫大等臨床癥狀［4］，還能影響新生兒全身各器官的血流速率，導(dǎo)致缺氧、酸中毒及營養(yǎng)供應(yīng)減少。PV實(shí)驗(yàn)室檢查特點(diǎn)是紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白含量明顯升高，紅細(xì)胞形態(tài)通常為小細(xì)胞低色素性，網(wǎng)織紅細(xì)胞(Ret)計(jì)數(shù)正常，但出血后可升高［5］。?？蓹z測到血小板形態(tài)和功能的異常，瑞氏染色薄血片可見成堆的血小板，偶可見巨型和畸形血小板［6］?；颊哐錖DH水平高于正常值，且與血紅蛋白量呈正相關(guān)，可通過血清LDH水平反映PV患者骨髓造血細(xì)胞的惡性增殖程度及判斷預(yù)后［7］。通過本次試驗(yàn)可以看出，標(biāo)本在前處理?xiàng)l件且離心時(shí)間相同，僅為離心轉(zhuǎn)速不同的情況下，其16項(xiàng)常規(guī)生化指標(biāo)結(jié)果沒有顯著差異(P＞0.05)，而在4 500 rpm離心速度下標(biāo)本易溶血，以4 000 rpm速度離心所得血清比3 000或3 500 rpm速度離心所得血清平均多一倍，足夠常規(guī)生化、免疫檢測的使用。這可能是由于PV患者血細(xì)胞數(shù)量(尤其是紅細(xì)胞數(shù)量)和血液黏度的增加等因素影響，導(dǎo)致使用常規(guī)3 000 rpm和3 500 rpm轉(zhuǎn)速的離心方法很難取得足夠臨床生化、免疫等試驗(yàn)所需的血清。所以在日常工作中遇到PV患者時(shí)，可根據(jù)臨床檢測生化、免疫等項(xiàng)目的需要，要求護(hù)士抽取2～3管血標(biāo)本，每管4 mL以上，收到標(biāo)本后置37℃水浴箱20 min，而后離心時(shí)可以將離心機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)整至4 000 rpm，離心5 min，一般不會(huì)導(dǎo)致溶血，且可以得到足夠試驗(yàn)用的血清。

［1］謝勇麗，張雅薇，袁拓萍，等.慢性增殖性血液病假性低血糖10例分析［J］.南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2011，51(12):56 －58.

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