方小嫻方 苗蔡翁義郭義龍楊啟平

汕頭市性病門診HPV感染分析

方小嫻1方 苗2蔡翁義3郭義龍1楊啟平1

目的: 明確汕頭地區(qū)性病門診就診者中HPV感染及其亞型的分布。方法: 采用PCR方法對性病門診就診者進行HPV基因分型檢測。結果: 共檢出HPV陽性1263例，陽性率為63.15%。HPV23種基因亞型均有檢出 (高危型HPV 1083例，低危型HPV 1367例)，其中陽性率HPV6最高(47.90%)，HPV44最低(0.08%)，單項HPV亞型感染的有683例，其中515例為低危型。在HPV單一亞型感染中，肛周拭子的陽性率最高(78.95%)，宮頸拭子最低(49.30%)。結論: 性病門診就診者中HPV感染率高，主要感染類型為單一低危型HPV感染。

性病門診； 人乳頭瘤病毒； 基因分型

人乳頭瘤病毒(human papilloma virus，HPV)是一種小DNA病毒，通常引起生殖器疣、子宮頸及肛門、生殖道癌。目前已完全鑒別到的HPV有80多種型，型與型之間的差異在于基因結構的不同，基因結構的差異決定其存在部位及可能導致的皮膚病變類型。1約有30多型HPV可以感染生殖道，根據被感染細胞是否能轉變成癌的狀況，分為高危及低危二組病毒。2目前國內關于HPV的分型研究主要集中在HPV6、11、16和18四個基因型，3對少見基因亞型的報道多只是針對CA患者或單一性別人群研究，對于性病門診患者HPV基因型較全的流行病學調查鮮有報道，3－6為了解汕頭地區(qū)性病門診就診者中HPV的感染及其亞型的分布情況，我們對2012年4月至2014年3月到我院性病門診就診患者HPV基因分型檢測情況及患者資料進行統(tǒng)計分析，報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象 收集2012年4月至2014年3月到我院性病門診就診患者，HPV基因分型檢測情況及患者資料，進行統(tǒng)計分析，其中男1420例，女580例，年齡15～84歲。患者就診原因主要為:(1)有疣狀贅生物；(2)有不潔性行為；(3)患有其它性傳播疾??；(4)配偶有HPV感染；(5)健康體檢。就診前半年內用過免疫調節(jié)劑及抗病毒藥物患者除外。

1.2 標本采集 ①對于生殖器或肛周有疣狀體增生，懷疑為CA的患者，用無菌生理鹽水浸潤的棉拭子，用力來回擦拭疣狀組織表面3次，采集疣體表皮脫落細胞，或直接采集疣體組織，將取樣后的樣本置入無菌玻璃管，密閉送檢。②對于丘疹、紅斑、囊腫、結節(jié)潰瘍等病變部位，用無菌生理鹽水浸潤的棉拭子，用力來回擦拭病變部位，獲取病變部位表皮脫落細胞，將取樣后棉拭子置入無菌玻璃管，密閉送檢。③對于有可疑癥狀者，用無菌生理鹽水浸潤的棉拭子，反復擦拭包皮、龜頭、陰莖、陰部等部位采集可疑部位脫落細胞，置入無菌玻璃管，密閉送檢。④對于無癥狀就診者，男性用無菌生理鹽水浸潤的棉拭子采集男性尿道分泌物、女性以窺陰器暴露宮頸，用無菌

棉拭子反復擦拭，取宮頸部位分泌物，置入無菌玻璃管，密閉送檢。所有標本采集后立即送檢，集中保存于－20℃冰箱待檢。

1.3 試劑與儀器 杭州博日科技有限公司生產LIFE EXPRESS基因擴增儀；德國產 Eppendorf Centrifuge 5417CR高速冷凍離心機；韓國FNEPCR公司生產雜交孵育箱。人乳頭瘤病毒基因分型檢測試劑盒由深圳亞能生物技術有限公司提供。

1.4 實驗方法 PCR－反向點雜交法(PCR－RDB)采用RCR體外擴增和DNA反向點雜交相結合的DNA芯片技術，利用HPV的基因特點設計特異引物，可以擴增出包含23種HPV基因型的目標片段，再將擴增產物與固定在膜條上的包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4等18種高危型和HPV6、11、42、43、44等5種低危型在內的分型探針進行雜交，依據雜交信號的有無判斷是否有這些HPV基因型的存在。實驗過程包括HPVDNA的提取、PCR擴增、雜交、洗膜、顯色等步驟，實驗操作及結果判斷嚴格按試劑盒要求進行。

1.5 統(tǒng)計學方法 利用Excel建立數據庫進行數據處理及資料分析，應用卡方檢驗進行統(tǒng)計分析，P＜0.01有顯著統(tǒng)計學差異，P＜0.05為有統(tǒng)計學意義，P＞0.05為無統(tǒng)計學差異。

2 結果

2.1 HPV檢測結果 2000例患者共檢出HPV陽性1263例，總檢出率為63.15%，其中男性檢出954例，感染率為67.18%(954/1420)，女性檢出309例，檢出率為53.28%(309/580)，男性HPV檢出率明顯高于女性，兩者檢出率有明顯的統(tǒng)計學差異(χ2＝34.23，P＜0.01)。

檢測的23種基因亞型均有檢出，感染率最高的是低危基因亞型 HPV6，共檢出 605例，感染率為30.25%，其次是 HPV11，共檢出 390例，感染率為19.50%，感染率最低的為HPV44，僅檢出1例，感染率為0.05%。高?；騺喰蜋z出率最高的為HPV16，共檢出162例，感染率為8.10%。

表1 1263例HPV陽性標本基因亞型的分布情況

2.2 HPV陽性標本基因亞型的分布 23種基因亞型中5種低危型HPV共檢出1367例(多亞型感染者重復計數，如一亞型感染以1計，二亞型感染以2計，以此類推)，檢出的亞型與陽性人數比為108.23%，18種高危型HPV共檢出1083例(多亞型感染者重復計數，如一亞型感染以1計，二亞型感染以2計，以此類推)，檢出的亞型與陽性人數比為85.74%，1263例HPV陽性標本基因亞型的分布情況，見表1。

2.3 HPV感染類型分布情況 1263例HPV陽性標本中單項HPV亞型感染的有683例，占所有陽性病例54.08%，單一亞型感染以低危型感染為主，683例標本中共有515例為低危型HPV單一亞型感染，占單一亞型感染的75.40%，其中HPV6單一感染最多，共291例，占515例低危單一亞型感染的56.50%，二項及以上多重HPV亞型感染有580例，占所有陽性病例的45.92%，二項及以上多重HPV亞型感染以高、低危HPV亞型混合感染為主，共檢出462例高、低危HPV亞型混合感染病例，占多重HPV亞型感染的79.66%，單一HPV亞型感染明顯高于二項及以上多重HPV亞型感染(兩者檢出率有明顯的統(tǒng)計學差異，χ2＝16.80，P＜0.01)。二項以上多亞型感染最高在同一標本中檢出11種亞型的多亞型感染，1263例HPV陽性標本感染類型情況見表2。1263例HPV陽性標本單一亞型感染與二項及以上多亞型感染分布情況，見表3。

表2 1263例HPV陽性標本感染類型情況

表3 1263例HPV陽性標本單一亞型感染與二項及以上多亞型感染分布情況

表4 2000例接受HPV檢測患者各年齡段HPV感染情況

2.4 2000例接受HPV檢測患者各年齡段HPV感染情況 2000例患者中20歲＞男≥60歲HPV感染率最高，兩者感染率均為75.00%，女性50～59年齡段患者，感染率為81.82%，其次是≥60歲患者檢出率最高，為66.67%，2000例接受HPV檢測患者各年齡段HPV感染情況，見表4。

2.5 不同類型、不同部位標本HPV檢出情況 采集標本中以肛周拭子的陽性率最高，為78.95%，其次是贅生物，陽性率為73.57%，陽性率最低的為宮頸拭子為49.30%，不同類型、部位標本HPV檢出情況，見表5。

表5 不同類型、不同部位標本HPV檢出情況

3 討論

HPV的流行病學研究雖有較多報道，但因缺乏可檢測大量基因型的方法學、目前多數地區(qū)尚未建立HPV基因型較全的流行病學數據庫，該現狀直接制約HPV感染的防治，3HPV不僅是常見的性傳播疾病病原體，而且還與多種惡性腫瘤及癌前病變密切相關，7，8目前許多研究表明，持續(xù)性高危型HPV感染是發(fā)生宮頸癌的必要條件，9Madsen等10對37例陰莖癌標本研究發(fā)現高危型HPV陽性率為65%，盡管大多數HPV感染是良性的，但HPV持續(xù)感染會導致女性宮頸癌和男性肛門生殖器癌，因此了解HPV的感染狀況對HPV相關疾病的防治具有重要意義。

本研究采用PCR體外擴增和DNA反向點雜交相結合的DNA芯片技術，可以一次性對23種臨床常見HPV進行基因分型，其中包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4等18種高危型和HPV6、11、42、43、44等5種低危型。

研究結果顯示，2000例性病門診受檢者共檢出HPV陽性1263例，總檢出率為63.15%，其中男性檢出954例，感染率為67.18%(954/1420)，高于薛耀華等4報道的2011年廣東地區(qū)性病門診男性患者HPV總陽性率43.7%及2010年莊文豪等11報道的福州地區(qū)性病門診男性患者感染率，低于許媛等122011年報道的南充地區(qū)皮膚性病門診及泌尿外科就診患者79.3%感染率，與杜江等13報道的基本相符。女性檢出309例，檢出率為53.28%(309/580)，結果明顯高于柯吳堅等16報道天津性病門診女性患者HPV感染率及羅招云等14、何桂蓉等15報道的婦科門診女性患者HPV感染率。因未能找到性病門診患者HPV總的陽性率類似檢測的報道，因而本文未能做出比較，但檢測結果總的顯示，性病門診男女性別患者HPV的感染率明顯高于婦科、計劃生育門診等人群HPV感染率，14－17提示性病門診患者作為HPV感染與傳播的高危人群應引起重視，本報道與同為性病門診患者HPV陽性率比較的差異可能是因為受檢人群、檢測方法及地區(qū)的差別引起。

本次研究1263例陽性結果中，以低危型HPV6感染率最高為 47.90%，其次是 HPV11感染率為30.88%，再次為HPV43感染率為20.67%；高危型感染以HPV16最高，感染率為12.83%，其次是HPV52、HPV58，二者感染率分別為10.93%及7.28%，與劉繼鋒等3、薜耀華等4報道的杭州、廣東地區(qū)性病門診人乳頭瘤病毒感染常見的基因亞型基本相符。1263例陽性標本中單一HPV亞型感染的有683例，占所有陽性病例54.08%，二項及以上多重HPV亞型感染580例，占所有陽性病例的45.92%，其中男性單一HPV亞型感染 508例，占男性 HPV陽性標本53.25%，二項及以上多重HPV亞型感染446例，占男性HPV陽性標本46.75%，與阮建波等18報道的單一型感染率相比略低，二項及以上多重HPV亞型感染略高于其報道結果，女性單一HPV亞型感染175例，占女性陽性病例56.63%二項及以上多重HPV亞型感染134例，占女性HPV陽性標本43.37%，與劉聰等19報道的相比，亦是單一型感染率略低，二項及以上多重HPV亞型感染略高。鄒同安等20報道的女性單一型感染率則更高一些，男女性別患者雖跟其它報道略有差異，但所有的結果均顯示，單一HPV亞型感染在HPV陽性標本中占有主要的比例。

618例單一HPV亞型感染中低危型感染515例，占單一亞型感染的83.33%，顯示HPV單一型感染以低危型為主，508例男性單一亞型感染標本中，有98例為高危型感染，所占比例為19.29%，175例女性單一亞型感染標本中，有70例為高危型感染，所占比例為40.00%，女性高危型感染明顯高于男性，兩者比較有顯著統(tǒng)計學差異(χ2＝31.02，P＜0.01)，顯示在單一HPV亞型感染中女性高危型的感染占有更高比例。580例二項及以上多重HPV亞型感染標本中，高低危型混合感染病例有462例，所占比率為79.66%，單獨低危亞型混合感染63例，所占比例為13.64%，單獨高危亞型混合感染55例，所占比例為11.90%，高低危型混合感染明顯高于單獨低危亞型混合感染及單

獨高危亞型混合感染(高低危型混合感染與兩者比較有明顯統(tǒng)計學差異，與單獨低危亞型混合感染比較χ2＝562.88，P＜0.01，與單獨高危亞型混合感染比較χ2＝578.02，P＜0.01)，以上結果顯示二項及以上多重HPV亞型感染以高低危型混合感染為主，本次調查結果中男女在二項及以上多重HPV亞型感染中各類感染型別并無統(tǒng)計學的差異。

本次研究結果顯示，男性各年齡段患者都有超過60%的感染率，其中又以小于20歲及大于等于60歲男性患者HPV感染率最高，這可能因小于20歲男性開始處于性活躍期，又多為非婚性生活，老年人機體免疫力下降抵抗力較差，而二者防病意識又較差，性交過程中不注重自我防護有關。而女性則以50～59歲年齡段患者感染率最高，感染率為81.82%，其次是大于等于60歲患者檢出率高，為66.67%，這可能與50歲后的女性生殖道環(huán)境開始出現變化，生殖道抗病菌能力開始下降有關。總的來說，無論男女性，50歲后的受檢者都有高于其它年齡段的HPV感染率，由于該年齡段人群機體免疫力開始下降，我們應重視對該年齡段人群性防護知識的宣傳及HPV感染的篩查工作。

一項調查顯示，通過縫隙雜交(slot)發(fā)現76.6%的男性尿道及19.8%的婦女宮頸中有HPV DNA，對50例就診于STD門診的高?；颊叩腜CR檢查發(fā)現，72%的婦女宮頸、外陰、陰道HPV陽性，63%的男性陰莖、陰囊及尿道陽性。1我們對于不同類型、部位標本HPV檢出情況的調查結果與之基本相符，HPV感染具有很強的地域性，而且因為檢測方法及受檢人群不同而顯示不同的感染率和感染類型，亞臨床感染和潛伏感染率至少是臨床HPV感染的3倍，如果重復檢測數次，上升至3到5倍，9性病門診患者做為HPV感染及傳播的高危人群，重視對該人群HPV的檢測及防治，有利于早期預防和消除HPV感染、減少HPV的傳播及女性宮頸癌、男性肛門生殖器癌的發(fā)生。

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(收稿:2014－09－18 修回:2014－10－21)

Analysis of human papilloma virus infection in STD clinic attendees in Shantou

FANG Xiao-xian，FANGMiao，CAIWeng-yi，et al.Shantou Hospital of Skin Disease Prevention and Cure，Shantou，515041

Objective:To determine the prevalence and genotype of human papilloma virus(HPV)in Shantou.M ethods:The HPV in STD clinic attendeeswas detected by PCR.Resu lts:Out of2000 STD clinic attendees detected，HPV was positive in 1263 patients(63.15%).Twenty three HPV gene subtypeswere detected(1083 patients with high risk HPV，1367 patientswith low risk HPV)and the positivity rate of HPV6 was the highest(47.90%)and HPV44 was the lowest(0.08%).There were 683 patients(54.08%)with single HPV subtype infection and among them 515 patientswere infected with low risk HPV.The positivity rates of HPV were the highest(78.95%)in anus swabs and the lowest(49.30%)in cervical swabs.Conclusion: The HPV infection is high and the common type was low risk single HPV subtype in Shantou city.

outpatients of venereal diseases；human papilloma virus；gene subtype

2012年度汕頭市醫(yī)療重點科技計劃項目－汕府科(編號: 2012－113－1)

1汕頭市皮膚性病防治院，廣東汕頭，515041 2汕頭市中心醫(yī)院，廣東汕頭，515041 3汕頭市出入境檢驗檢疫局，廣東汕頭，515041