賀順忠，牛永娟，張青蘭，尕么江永，宋仁德，李家奎

（1.青海玉樹州畜牧獸醫(yī)工作站；2.國(guó)家牛肉牦牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系 玉樹綜合試驗(yàn)站，玉樹815000；3.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物學(xué)院，武漢430070）

牛病毒性腹瀉／黏膜病（Bouine uiral diarrhea／mucosal disease，BVD／MD）是由黃病毒科瘟病毒屬的牛病毒腹瀉病毒（BVDV），又稱牛病毒性腹瀉－黏膜病毒（BVD－MDV）引起的一種極為復(fù)雜、呈多臨床類型表現(xiàn)的傳染性疾病，以發(fā)熱、黏膜糜爛潰瘍、白細(xì)胞減少、腹瀉、免疫抑制、先天性缺陷、咳嗽、懷孕母牛流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和畸形胎為主要特征［1－2］。本病呈世界性分布，并于1980年傳入我國(guó)，我國(guó)的各大牦牛牧區(qū)均存在本病，給牦牛業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，在玉樹地區(qū)牦牛上時(shí)有發(fā)生，為摸清BVD在玉樹地區(qū)流行情況，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，對(duì)在2011年11月采自囊謙、治多兩縣的155份（囊謙40份，治多115份）牦牛血清進(jìn)行牛病毒性腹瀉抗體檢測(cè)。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下：

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣品 被檢牦牛血清樣品于2011年10月采自青海省囊謙縣和治多縣，牛頸靜脈采血，常規(guī)方法分離血清。其中：玉樹囊謙縣40份、治多縣115份。血清采回后放在－20℃保存，檢測(cè)前在室溫下自然解凍。

1.1.2 檢測(cè)試劑盒 牦牛病毒性腹瀉／黏膜病 （BVD／MD）ELISA 檢測(cè)試劑盒（BVDVP80－AbELISA）購(gòu)于SVANOVA Biotech AB公司，型號(hào)10－2210－02，批號(hào)P07546。

1.2 檢測(cè)方法

檢測(cè)方法按ELISA檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行。結(jié)果判定，陽性血清的阻斷率（PI）≥60，陰性血清的光密度（OD）＞0.5，則實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信。被檢血清樣品PI＜45為陰性，PI≥45為陽性。

2 結(jié)果

由表1可知，囊謙、治多兩縣的牦牛群BVD感染率為91%，其中囊謙為100%，治多為87.83%，兩縣牦牛群病毒性腹瀉病均高強(qiáng)度感染。

表1 牦牛血清牦牛群BVD檢測(cè)結(jié)果

3 討論

1）紀(jì)金春等［3］采用微量中和試驗(yàn)檢查玉樹州稱多縣珍秦鄉(xiāng)牦牛血清28份，陽性12份，陽性率為42.30%。本次檢測(cè)中囊謙、治多兩縣的牦牛病毒性腹瀉／黏膜病感染率高達(dá)91.00%，且囊謙縣牦牛陽性率高達(dá)100%，說明玉樹地區(qū)牦牛病毒性腹瀉感染情況非常嚴(yán)重，應(yīng)當(dāng)引起足夠的重視。

2）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是一種檢測(cè)器官或組織培養(yǎng)物中的BVDV或監(jiān)測(cè)牛群中酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是一種檢測(cè)器官或組織培養(yǎng)物中的BVDV或監(jiān)測(cè)牛群中BVDV抗體水平及潛伏感染情況的一種良好技術(shù)。王新平建立了雙抗體阻斷Elisa法檢測(cè)血清中的抗體，其敏感性比中和試驗(yàn)高出5個(gè)滴度。由于檢測(cè)抗體難以作出早期診斷，王新平等又建立了雙抗體夾心Elisa檢測(cè)BVDV，并研制了試劑盒，為本病的診斷提供了一種簡(jiǎn)便有效的方法［4］。李家奎等［5］應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法對(duì)西藏自治區(qū)不同地區(qū)的287份牦牛血清樣本進(jìn)行檢測(cè)，西藏牦牛平均BVD／MD血清陽性率為53.65%，說明玉樹地區(qū)牦牛毒性腹瀉感染情況高于周邊地區(qū)。

3）BVDV能抑制動(dòng)物機(jī)體對(duì)干擾素的反應(yīng)［7］，容易引起免疫耐受、免疫抑制、動(dòng)物機(jī)體抵抗力降低等不易被發(fā)現(xiàn)的癥狀，多呈亞臨床經(jīng)過、溫和經(jīng)過或隱性感染［8］，只有少數(shù)為急性病例，癥狀明顯，并以死亡告終，故本病長(zhǎng)期未能引起應(yīng)有的重視。另外，BVDV的感染增加了動(dòng)物罹患其他疾病的可能，通過胎盤感染的牛犢將終身帶毒，成為本病新的感染 源［9－10］。由此可見，BVDV 將對(duì) 畜 牧 業(yè) 造成潛在而長(zhǎng)期的影響。研究證明，豬瘟兔化弱毒苗對(duì)預(yù)防BVD有一定的作用，玉樹地區(qū)對(duì)牦牛病毒性腹瀉的預(yù)防，應(yīng)用粘膜病弱毒疫苗或豬瘟弱毒疫苗加強(qiáng)免疫，加強(qiáng)牛病毒性腹瀉／黏膜病的檢疫工作，逐步淘汰陽性牛，凈化牛群。

［1］ 王新平，劉紅，宣華，等.綿羊感染牛病毒性腹瀉－黏膜病病毒的調(diào)查研究［J］.獸醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1993，13（3）：229－230.

［2］ 孔繁德，陸承平.牛病毒性腹瀉／黏膜病的最新研究進(jìn)展［J］.福建畜牧獸醫(yī)雜志，2005，27（3）：9－13.

［3］ 紀(jì)金春，金美旦巴.牦牛病毒性腹瀉／黏膜病防制中間試驗(yàn)［J］.青海畜牧獸醫(yī)雜志，1995，25（2）：5－7.

［4］ 王新平，任文陟，朱維正.檢測(cè)牛病毒性腹瀉－粘膜病病毒抗原試劑盒的研制及應(yīng)用［J］.中國(guó)畜禽傳染病，1966，1：18－19.

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［9］ 馮彥君.豬瘟兔化弱毒菌對(duì)牛病毒性腹瀉膜病的防治作用［J］.中國(guó)奶牛，1995，1：39－40.

［10］ 劉亞剛，殷中瓊，劉世貴，等.豬瘟弱毒苗預(yù)防牛病毒性腹瀉－粘膜病的短期安全性與微量中和試驗(yàn)［J］.四川大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2003，40（5）：970－973.