劉向鵬，王忠山，馬長賓，周國柱，李 蘭，吳 挺，曾 朔

（1.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第六師五家渠市畜牧獸醫(yī)工作站，新疆五家渠831300；2.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第六師共青團(tuán)農(nóng)場畜牧獸醫(yī)工作站，新疆昌吉831301）

牛結(jié)核病是由牛結(jié)核分枝桿菌引起的慢性傳染病，是一種重要的人獸共患病，世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為需通報的動物疫病，我國將其列為二類動物疫病。我國牛結(jié)核病防控主要采取檢疫撲殺的措施，雖然取得了一定成效，但并未能遏制牛結(jié)核病感染持續(xù)上升的勢頭。奶牛是牛結(jié)核病的主要感染對象，規(guī)?；鍪悄膛Ｉa(chǎn)的主要陣地，為初步了解規(guī)模化奶牛場牛結(jié)核病的流行特點，為牛結(jié)核病防控提供依據(jù)，本試驗以本地區(qū)一個典型的結(jié)核病陽性奶牛場為例，對其進(jìn)行了定點流行病學(xué)調(diào)查及分析。現(xiàn)將調(diào)查情況匯報如下：

1 牛場基本情況

1.1 牛場周邊環(huán)境及設(shè)施設(shè)備

奶牛場建成于2011年，2012年投入使用，占地約26.7hm2，周邊是基本農(nóng)田，距離野生動物活動區(qū)域較遠(yuǎn)，周邊3km范圍內(nèi)無牛等其他動物飼養(yǎng)。奶牛場由生產(chǎn)區(qū)、飼草料貯存區(qū)、糞污處理區(qū)、生活管理區(qū)等組成。生產(chǎn)區(qū)與其他功能區(qū)相對獨立，生產(chǎn)區(qū)包括2棟泌乳牛舍，1棟犢牛舍，1棟特需牛舍（產(chǎn)犢舍）和1個擠奶中心，每棟泌乳牛舍可飼養(yǎng)奶牛2 000頭。人員、運奶車、飼料車由專用通道進(jìn)入場區(qū)，入口設(shè)置消毒池。

1.2 生產(chǎn)管理

工作人員經(jīng)消毒更衣通道進(jìn)出場區(qū)，工作定點定線。所有牛在牛舍內(nèi)采食、運動、休息，外出活動僅限于擠奶和轉(zhuǎn)群。草料飼喂全程機械操作，飼料運送車、運奶車經(jīng)專用車道消毒進(jìn)出。牛舍定期帶牛消毒，夏季每天消毒一次，冬季每周消毒一次，糞污每天清除。工作人員每年進(jìn)行健康檢查，奶牛結(jié)核病、布魯氏菌病一年檢測兩次，定期免疫接種口蹄疫疫苗。

1.3 奶牛購進(jìn)及結(jié)核病檢疫情況

2012年至2013年，從3個地區(qū)的多個奶牛場分5批次購進(jìn)1 600余頭奶牛，購入時檢疫牛結(jié)核病均為陰性。其中一批次奶牛，隔離后檢出7頭陽性牛，陽性率4.93%。

1.4 牛結(jié)核病檢測情況

1.4.1 單純牛型PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)實驗 2012年至2015年，使用哈藥集團(tuán)生產(chǎn)的提純牛型結(jié)核菌素（PPD），按照動物結(jié)核病診斷技術(shù)（GB／T18645－2002）要求進(jìn)行皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗和判定。檢測結(jié)果見表1。

1.4.2 比較皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)實驗 2014年和2015年使用進(jìn)口牛型PPD、禽型PPD進(jìn)行比較皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗，在牛頸部兩側(cè)分別注射牛型和禽型PPD，計算各自的皮厚差，牛型PPD的皮厚差大于禽型PPD的皮厚差且超過4mm判為陽性，2～4 mm為可疑，2mm以下陰性。檢測結(jié)果見表2。

1.4.3 牛結(jié)核γ－干擾素ELISA實驗 比較皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗部分陽性牛、可疑牛、陰性牛，用青島瑞爾生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行牛結(jié)核γ－干擾素檢測。牛PPD的OD值－PBS的OD值≥0.1且牛PPD的OD值－禽PPD的OD值≥0.1為陽性；牛PPD的OD值－PBS的OD值＜0.1或牛PPD的OD值－禽PPD的OD值＜0.1為陰性。檢測結(jié)果見表3。

1.4.4 陽性牛剖檢及病原鑒定 牛結(jié)核病檢測陽性牛和陰性牛臨床檢查均無明顯的牛結(jié)核病病征，偶見咳嗽、未見呼吸困難，消瘦，體表淋巴結(jié)腫大，消化不良，下痢等癥狀［1］。2014年，對牛型PPD、進(jìn)口比較皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)和牛結(jié)核γ－干擾素ELISA試驗均為陽性的牛進(jìn)行撲殺，剖檢8頭牛，其中1頭牛肺臟可見明顯結(jié)節(jié)性病灶，肺門淋巴結(jié)腫大，2頭牛肺部有疑似結(jié)節(jié)性病灶，不明顯，淋巴結(jié)腫大，其它5頭牛未見病理變化。8頭牛均采集肺臟、肺門淋巴結(jié)等樣品，經(jīng)中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心分離鑒定，2頭牛的樣品分離到牛結(jié)核分枝桿菌，其它樣品未分離到牛結(jié)核分枝桿菌。

1.5 檢出陽性牛的處理

為慎重起見，第一次牛型PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗陽性牛，用比較皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)實驗和牛結(jié)核γ－干擾素ELISA實驗復(fù)檢，復(fù)檢仍為陽性者，按照牛結(jié)核病防治技術(shù)規(guī)范要求進(jìn)行處理。

2 調(diào)查結(jié)果及分析

表1 單純牛型PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗結(jié)果

表2 牛型PPD、禽型PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗結(jié)果

表3 牛結(jié)核γ－干擾素ELISA試驗結(jié)果

由表1可以看出，牛結(jié)核病檢測陽性率逐年上升，認(rèn)為牛結(jié)核病除水平傳播外，可能存在垂直傳播。即除呼吸道、消化道傳播、皮膚傷口感染外，還可能通過胎兒傳播。另外，圈舍設(shè)計建設(shè)不合理，生產(chǎn)管理落實不力，促進(jìn)了牛結(jié)核病的持續(xù)感染。由表1、表2、表3可以看出2015年陽性率比2014年降低幅度較大，說明該規(guī)模場以找到近幾年結(jié)核病陽性率高的原因并采取了有效的防控措施。

3 發(fā)病原因分析

3.1 引入奶牛時檢疫把關(guān)不嚴(yán)

購進(jìn)的奶牛已經(jīng)感染了牛結(jié)核分枝桿菌，成為傳染源在牛舍內(nèi)排毒、散毒，感染健康奶牛。本次調(diào)查奶牛來源時發(fā)現(xiàn)，該場分5批次從3個地方的多個奶牛場購進(jìn)奶牛，購進(jìn)前檢疫合格。但是有一批次的奶牛，隔離后檢出7頭陽性牛，陽性率4.93%。根據(jù)檢疫票證、標(biāo)識追溯調(diào)查，這7頭牛為同一奶牛場，表明引進(jìn)牛場有牛結(jié)核病。

3.2 受檢測試劑的敏感性和特異性的限制

陽性牛無法一次全部檢出，個別真陽性牛持續(xù)散毒、感染。2013年檢測陽性牛和可疑牛，在第一次復(fù)檢時6頭牛轉(zhuǎn)為陰性［2］，第二次復(fù)檢中，其中4頭牛又轉(zhuǎn)為陽性。為避免上述情況發(fā)生，2014年牛型PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)陽性牛和可疑牛進(jìn)行比較皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗和牛結(jié)核γ－干擾素ELISA試驗。結(jié)果是牛型PPD試驗陽性率高于比較皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)和牛結(jié)核γ－干擾素ELISA試驗，比較皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)和牛結(jié)核γ－干擾素ELISA試驗符合率較高，但是也有比較皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)陽性、可疑牛牛結(jié)核γ－干擾素ELISA試驗陰性。2014年2頭牛比較皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)陽性，而牛結(jié)核γ－干擾素ELISA試驗陰性，沒有撲殺，2015年比較皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)和牛結(jié)核γ－干擾素ELISA試驗均呈陽性。

3.3 牛結(jié)核病傳播途徑復(fù)雜

主要經(jīng)呼吸道和消化道傳染，也可經(jīng)損傷的皮膚、黏膜、胎盤、交配等傳播［3－4］。在牛結(jié)核分支桿菌普遍存在的情況下，可發(fā)生子宮內(nèi)感染。可以經(jīng)胎盤和卵（禽鳥）發(fā)生感染，存活的小牛通常在肝、脾出現(xiàn)病變［5］。本次調(diào)查中，牛型PPD檢測3～6月齡犢牛193頭，2頭5月齡犢牛陽性，但其母親陰性。考慮到母牛人工授精和檢測試劑的敏感性和特異性，奶牛垂直傳播需要進(jìn)一步研究。

3.4 圈舍設(shè)計不合理，生產(chǎn)管理不到位

泌乳牛舍內(nèi)設(shè)6個小單元，每個單元飼養(yǎng)300余頭泌乳牛，各單元牛處在同一環(huán)境之下，冬季通風(fēng)不良，陰暗潮濕，消毒頻次少，延長了牛結(jié)核分支桿菌存活時間，加重了其感染程度。沒有病牛隔離舍，結(jié)核病陽性牛和可疑牛無法隔離飼養(yǎng)，造成持續(xù)排毒、散毒，感染。飼料投喂車、清糞車在進(jìn)出不同牛舍時不能徹底清洗、消毒，牛結(jié)核分枝桿菌借其傳播至其它牛舍。

4 建議

4.1 嚴(yán)格落實引種檢疫關(guān)

在引種前，實地考察引種地牛結(jié)核病發(fā)生流行情況，查看引種牛場歷年牛結(jié)核病檢測檔案，引種牛場應(yīng)無結(jié)核病。同時，選購的奶牛檢測結(jié)核病，檢測無陽性方可引進(jìn)。引進(jìn)后隔離30d，隔離期滿后再進(jìn)行檢測，陰性后方可混群飼養(yǎng)。

4.2 選擇合適的檢測試劑和檢測方法

比較皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)和牛結(jié)核γ－干擾素ELISA試驗的特異性好于牛型PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)，但是牛型PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)具有較高的敏感性［6－9］?？紤]到奶牛場連續(xù)3年牛結(jié)核病陽性，采用比較皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)較好，撲殺陽性牛，可疑牛也應(yīng)同時撲殺。

4.3 制定合理監(jiān)測方案

奶牛場連續(xù)2年牛結(jié)核病檢測陽性，應(yīng)對所有牛包括犢牛進(jìn)行檢測。加大檢測次數(shù)，每隔3個月檢測一次，檢測陽性牛及時撲殺。尤其是犢牛，盡早檢測淘汰，逐步建立凈化群。

4.4 在資金允許的情況下建設(shè)病牛隔離舍

對檢測出的陽性牛、可疑牛隔離飼養(yǎng)，避免散毒。加強飼養(yǎng)管理水平，適當(dāng)降低飼養(yǎng)密度，減少應(yīng)激因素，選擇牛結(jié)核分支桿菌敏感藥物交替消毒。工作人員要做好個人防護(hù)，定期體檢，防止工作人員感染，造成疫病擴散。

［1］ 蔡寶祥.家畜傳染病學(xué)第四版［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001：110－114.

［2］ 王忠山，鄧洪江等.短期內(nèi)進(jìn)行牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)復(fù)檢試驗的結(jié)果變化觀察［J］.中國獸醫(yī)雜志，2013，49（6）：41－43.

［3］ 王淑娟，孫成友等.規(guī)模化奶牛場結(jié)核病的凈化與防控［J］.中國奶牛，2013（1）：27－31.

［4］ 王華，孫成友等.牛結(jié)核病的傳播特點和風(fēng)險因素及防控［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，13（23）：4583－4586.

［5］ 赫什.獸醫(yī)微生物學(xué)（美）［M］.王鳳陽，范泉水主譯.北京：科學(xué)出版社，2007：339－341.

［6］ 沈素芳，王曲直等.單純皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)和比較皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)在奶牛結(jié)核病檢測中的應(yīng)用［J］.中國獸醫(yī)雜志，2013，49（10）：21－24.

［7］ 郭愛珍，陳煥春.牛結(jié)核病流行特點及防控措施［J］.中國奶牛，2010，（11）：38－44.

［8］ 陳祥，徐正中等.γ－干擾素試驗和皮試變態(tài)反應(yīng)對檢測奶牛結(jié)核病的比較［J］.中國人獸共患病學(xué)報，2011，27（2）：97－100.

［9］ 徐賢坤，黃小武等.兩種奶牛結(jié)核病檢測方法的比較［J］.畜牧與獸醫(yī)，2010，42（2）：29－33.