潘 城， 黃永輝， 黃何何， 謝 勇， 胡朝陽(yáng)， 高 希

（福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，福建福州 350002）

糖精化學(xué)名為鄰磺酰苯甲酰胺，是一種人工甜味劑。糖精鈉以鈉鹽的形式存在，呈無(wú)色至白色結(jié)晶，易溶于水，無(wú)臭或微有芳香味，在生物體內(nèi)不被分解。糖精鈉屬于食品添加劑，在味覺(jué)上能引起甜味，但對(duì)生物體沒(méi)有任何營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。當(dāng)食用過(guò)多的糖精時(shí)，會(huì)影響腸胃消化酶的分泌，同時(shí)降低了小腸的吸收功能，使食欲降低 （曉唐，2004）。研究表明，糖精鈉會(huì)引起生理性質(zhì)的變化，具有致癌作用（劉寧和沈明浩，2007）。

目前，對(duì)糖精鈉的測(cè)定方法包括分光光度法（周彤和戈早川，1999）、薄層色譜法（葉蔚云和羅健，1997）、毛細(xì)管電泳法（衷明華和李云，2009）、高效液相色譜法（謝麗琪等，2003；尹艷春和李智紅，2003）、離子色譜法（卜宇宏等，2011）以及液相色譜-質(zhì)譜法（秦昉等，2005）等。分光光度法、薄層色譜法和毛細(xì)管電泳法容易產(chǎn)生假陽(yáng)性，不能準(zhǔn)確定量，而且耗時(shí)較長(zhǎng)；液相色譜-質(zhì)譜法具有很高的特異性，能夠準(zhǔn)確地進(jìn)行定性與定量，但費(fèi)用高，無(wú)法普遍使用；高效液相色譜法具有分離效率高，選擇性好，檢測(cè)靈敏度高等特點(diǎn)，是常用的檢測(cè)方法。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法建立簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的飼料添加劑中糖精鈉分離檢測(cè)技術(shù)。該方法的建立可為飼料添加劑中糖精鈉的合理、應(yīng)用提供有效的技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 Waters 2695高效液相色譜儀配光電二極管陣列檢測(cè)器 （美國(guó)Waters公司）；DS-8510超聲波發(fā)生器 （上海生析超聲儀器有限公司）；Milli Q超純水制備器（美國(guó)Milipor公司）。

甲醇，色譜純，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司；其他試劑為分析純。糖精鈉（純度≥98.0%），購(gòu)于美國(guó)sigma試劑公司。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和工作溶液配制 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制：準(zhǔn)確稱取糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品0.1 g，用超純水溶解并定容至100 mL，配制成濃度為1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制：將糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液采用逐級(jí)稀釋的方法配制成濃度為0.01～0.5 mg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，所有標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液均置于0～4℃冰箱中保存。

1.3 樣品前處理 稱取飼料添加劑樣品0.01 g于100 mL的燒杯中，加入50 mL超純水，于超聲波振蕩器中超聲萃取20 min后，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，加入200 g/L乙酸鋅溶液和100 g/L亞鐵氰化鉀溶液各1 mL沉淀蛋白，超純水混勻定容至刻度。提取液經(jīng)10000 r/min離心5 min后，取上清液，以0.45 μm濾膜過(guò)濾，濾液供分析用。

1.4 色譜條件 色譜柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，美國(guó) Welch 公司）；柱溫：35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm；流速 1.0 mL/min；進(jìn)樣量 10 μL。 流動(dòng)相A：甲醇；流動(dòng)相B：20 mmol/L乙酸銨溶液。梯度洗脫程序：0～ 13 min，7%A；13～13.5 min，7%A 線性增長(zhǎng)至 60%A；13.5～15min， 保持 60%A；15～15.5 min，60%A 線性降低至 7%A；15.5～ 20 min，保持7%A。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件優(yōu)化 C18色譜柱以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(tuán)（ODS），固定相較為穩(wěn)定，被廣泛運(yùn)用。本方法采用C18柱可以很好地將糖精鈉與其他化合物分離。同時(shí)實(shí)驗(yàn)比較了甲醇-水和甲醇-乙酸銨 （20 mmol/L）溶液兩種流動(dòng)相體系，在甲醇-乙酸銨（20 mmol/L）溶液流動(dòng)相體系下，目標(biāo)物糖精鈉具有更好的峰形，因而選擇后者作為流動(dòng)相。糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖、飼料添加劑樣品色譜圖和飼料添加劑樣品加標(biāo)色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 前處理?xiàng)l件優(yōu)化 糖精鈉具有較好的水溶性，實(shí)驗(yàn)結(jié)合超聲波振蕩器可充分萃取飼料添加劑樣品中的糖精鈉。提取液中的蛋白質(zhì)等化合物可能會(huì)對(duì)測(cè)定樣品中的糖精鈉產(chǎn)生干擾，實(shí)驗(yàn)通過(guò)選用乙酸鋅和亞鐵氰化鉀作為沉淀劑，降低了其他化合物對(duì)檢測(cè)準(zhǔn)確性的影響。

圖1 糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（A）、飼料添加劑樣品色譜圖（B）和飼料添加劑樣品加標(biāo)色譜圖（C）

2.3 線性方程、線性關(guān)系、檢出限及定量限 配制糖精鈉系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，濃度為0.01～0.5 mg/mL，以糖精鈉的峰面積對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸，線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限見(jiàn)表1。結(jié)果表明，糖精鈉為0.01～0.5 mg/mL時(shí)具有很好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R為1.0000。以3倍信噪比（S/N=3）為檢出限，以10倍信噪比（S/N=10）為定量限，糖精鈉的檢出限為1.5 mg/g，定量限為5 mg/g。

表1 回歸參數(shù)和最低檢測(cè)限

2.4 回收率和精密度 在優(yōu)化后的測(cè)試條件下，取空白飼料添加劑樣品進(jìn)行加標(biāo)回收率測(cè)試，加標(biāo)水平分別為255、510、100 mg/g，每個(gè)水平重復(fù)分析3次，結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可知，該方法的加標(biāo)回收率為88.2%～98.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.4%～3.0%，結(jié)果表明，該方法適用于飼料添加劑中糖精鈉的日常分析檢測(cè)。

表2 糖精鈉加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用超聲萃取法結(jié)合高效液相色譜-光電二極管陣列檢測(cè)器，建立了飼料添加劑中糖精鈉含量的測(cè)定方法。該方法操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確可靠，靈敏度高，適用于飼料添加劑樣品中糖精鈉含量的測(cè)定。

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