余荷秀 潘麗 盧再群

(浙江永寧藥業(yè)股份有限公司 浙江臺州 318020)

1 材料與方法

1.1 材料

實驗中要用到的主要試劑有營養(yǎng)肉湯、營養(yǎng)瓊脂、小牛血清。要用到的中藥材有黃柏、梔子、佛手、何首烏、姜黃、細氈毛忍冬和杜仲。要用到的菌株有標準沙門氏菌、標準大腸桿菌、臨床巴氏桿菌和臨床大腸桿菌。

1.2 實驗方法

1.2.1 七種中藥有效成分的提取

提取液的成分主要是乙醚和濃度不同的乙醇。提取過程的相關(guān)數(shù)據(jù)見表1:

根據(jù)上表對中藥材進行有效成分提取后,將濾液合并,真空濃縮,待其干燥后所得物就是中藥提取物浸膏,計算浸膏得率。

1.2.2 中藥提取物溶液的制備

采用少量二甲亞砜對浸膏進行溶解,以蒸餾水輔助定容,配置成生藥濃度為1g.mL-1的原液,用流通蒸汽進行滅菌后放置到4℃的冰箱中保存?zhèn)溆?。在使用之?利用滅菌營養(yǎng)肉湯來稀釋濃度,大約稀釋到500mg.mL-1。

1.2.3 制備菌懸液

在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中劃線接種保種菌液,37℃恒溫環(huán)境中培養(yǎng)24小時,之后在營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中將取出的單個典型菌落接種,在37℃的恒溫水浴中震蕩培養(yǎng)24小時候留作備用。取出八個裝入4.5mL生理鹽水的滅菌試管,第一個試管加入0.5mL活化菌液,之后的試管活化菌液濃度依次稀釋10倍。用微量移液器取出稀釋濃度不同的稀釋液放到瓊脂平板上,均勻涂布,考慮實驗需要,每個濃度涂布三個平板,在24小時之后計數(shù)細菌數(shù)目,,將數(shù)目在30到300個之間的平板個數(shù)記錄下來,并求出其平均值。最后將其稀釋到106cFu.mL-1的細菌數(shù)。之后測定各個最小殺菌濃度MBC和最小抑制菌濃度MIC。

表1 中藥有效成分提取相關(guān)數(shù)據(jù)

表2 七種提取物對4株細菌的MIC和MBC的值(單位:mg.mL-1)

2 結(jié)果與分析

2.1 實驗結(jié)果

由表中數(shù)據(jù)可以得知,在這七種藥材中,抑菌效果最好的是黃柏,其提取物對臨床巴氏桿菌的抑菌效果更好(表2)。

2.2 結(jié)果分析與總結(jié)

煎煮法是最為常用的傳統(tǒng)中藥提取方法,此外還有滲漉法、浸漬法和熱回流法等等。煎煮法的優(yōu)點明顯,弊端也不容忽視,例如有效成分流失現(xiàn)象嚴重,尤其是一些不溶于水的成分,在濃縮過程中難度較大,易失效變質(zhì)。所以保證中藥藥性的一個重要前提就是要選擇恰當?shù)奶崛》椒āＴ诒狙芯恐?在中藥中粗提的主要活性成分有黃柏中的小檗堿、梔子中的梔子苷、佛手中的揮發(fā)油、姜黃中的姜黃素、杜仲和細氈毛忍冬中的綠原酸抗菌以及何首烏中的二苯乙烯苷。采用超聲法和乙醇熱回流法來提取各類中藥藥材中的有效成分。為避免對有效成分的破壞同時采取真空減壓壓縮法。

3 結(jié)語

選擇恰當?shù)奶崛》椒梢愿玫陌l(fā)揮中藥抑菌的效果。與純提藥物相比,粗提藥物成分復雜,抑菌效果相對較差。由本實驗得,四川地區(qū)抑菌效果較好的當屬黃柏和梔子,他們的抗菌活性比較強,論抗菌活性和穩(wěn)定性則當屬佛手,這幾類可以對其抗菌機理和藥效物質(zhì)進行更為深入的研究了解,為其在臨床方面的應(yīng)用奠定一個良好的基礎(chǔ)。

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