朱文標(biāo)鄭少秋盧善明謝壽城

IHC與FISH檢測118例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌HER-2的對比分析*

朱文標(biāo)①鄭少秋①盧善明①謝壽城①

目的：比較IHC與FISH檢測乳腺浸潤性導(dǎo)管癌HER-2的一致性。方法：分別用IHC和FISH對118例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌HER-2進(jìn)行檢測，比較兩者檢測結(jié)果的相關(guān)性。結(jié)果：118例浸潤性乳腺導(dǎo)管癌標(biāo)本，IHC檢測結(jié)果為：14例為（-）；20例為（1+），55例為（2+），29例為（3+）。FISH檢測結(jié)果為：53例為＞2.2，64例為＜1.8，1例為1.8-2.2。IHC檢測HER-2陽性的病例FISH檢測中陽性符合率96.6％（28/29），IHC檢測HER-2陰性的病例FISH檢測均為陰性，符合率100％（34/34）。IHC檢測HER-2（2+）的55例患者中有25例經(jīng)FISH檢測證實(shí)HER-2陽性，30例呈陰性。FISH檢測共發(fā)現(xiàn)5例17號染色體多體，其發(fā)生率為4.24％。IHC檢測到8例乳腺癌HER-2表達(dá)存在異質(zhì)性，異質(zhì)性在FISH檢測中亦得到證實(shí)。結(jié)論：IHC與FISH檢測乳腺浸潤性導(dǎo)管癌HER-2具有高度一致性，免疫組化HER-2（2+）病例需行FISH檢測。

浸潤性導(dǎo)管癌； HER-2； 免疫組織化學(xué)； 熒光原位雜交

正確檢測和評定乳腺癌的HER-2蛋白表達(dá)和基因擴(kuò)增狀態(tài)對乳腺癌的臨床治療和預(yù)后判斷至關(guān)重要，HER-2檢測結(jié)果不僅涉及患者的預(yù)后評估，而且是篩選是否適合針對HER2的靶向治療的先決條件，并且可以對內(nèi)分泌治療、化療方案的選擇起到指導(dǎo)作用[1]。近年，乳腺癌組織中HER-2狀態(tài)檢測的應(yīng)用技術(shù)越來越多。大致分為：（1）基于HER-2蛋白水平的檢測，如免疫組織化學(xué)（IHC）。（2）基于HER-2基因DNA水平的檢測，如熒光原位雜交（FISH）。本文收集本科行IHC檢測及FISH的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌病例118例，比較IHC與FISH檢測乳腺浸潤性導(dǎo)管癌HER-2的一致性，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2013年11月-2014年10月本科行IHC檢測及FISH的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌病例，共118例。均為女性，其中穿刺標(biāo)本12例，切除標(biāo)本106例。

1.2 方法 HER-2基因擴(kuò)增檢測試劑盒購于廣州安必平公司。免疫組化HER-2/neu多克隆抗體購自福州邁新。

1.3 檢測結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 參照《乳腺癌HER2檢測指南（2014版）》[2]對檢測結(jié)果進(jìn)行判定，并由本院2名經(jīng)專業(yè)培訓(xùn)的病理醫(yī)師進(jìn)行判讀。

1.3.1 IHC檢測HER-2的判定方法 對乳腺浸潤性癌的癌細(xì)胞膜進(jìn)行定位后染色。（1）陰性：存在≤10％的不完整細(xì)胞膜染色，或者無浸潤性癌細(xì)胞的染色，則記為（-）；（2）弱陽性：＞10％的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細(xì)胞膜染色，記為（1+）；（3）可疑陽性：有兩種情況，第一種為＞10％的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整和/或弱至中等強(qiáng)度的細(xì)胞膜染色，第二種為≤10％的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)而完整的細(xì)胞膜染色，記為（2+）；（4）強(qiáng)陽性：＞10％的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)而完整的細(xì)胞膜染色，記為（3+）[3]。

1.3.2 FISH檢測HER-2的判定方法 首先對HE染色切片中的癌細(xì)胞區(qū)域進(jìn)行確定，并選擇出滿意的雜交信號區(qū)域，采用100倍油鏡經(jīng)特意性單通道濾光片對癌細(xì)胞核中FISH結(jié)果進(jìn)行觀察，并進(jìn)行cutoff值和信號計(jì)數(shù)的計(jì)算。按照試劑說明書的要求，記錄60個(gè)相連續(xù)的癌細(xì)胞核中的雙色信號：（1）如紅色、綠色兩種信號的比值大于2.2，或者眾多信號間連接成團(tuán)時(shí)，則不用計(jì)數(shù)，可歸入基因擴(kuò)增；（2）如兩信號的比值處于1.8-2.2之間，則重新再計(jì)數(shù)60個(gè)相連續(xù)的癌細(xì)胞。若結(jié)果同前，則在FISH的檢測報(bào)告中注釋；（3）如紅色、綠色兩信號間比值小于1.8，不存在HER-2基因的擴(kuò)增；如不同癌細(xì)胞中的HER-2基因擴(kuò)增現(xiàn)象具有異質(zhì)性，則需要另選癌區(qū)及計(jì)數(shù)，并注明在檢測報(bào)告中[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本研究中數(shù)據(jù)的收集與處理均由本院數(shù)據(jù)處理中心專門人員進(jìn)行，以保證數(shù)據(jù)真實(shí)性與科學(xué)性。初步數(shù)據(jù)錄入EXCEL（2003版）進(jìn)行邏輯校對與分析；并應(yīng)用SPSS 22.0對資料進(jìn)行一般描述，計(jì)數(shù)資料用（％）表示，采用 χ2檢驗(yàn)；并進(jìn)行IHC及FISH一致性檢驗(yàn)，計(jì)算kappa值和P值，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 IHC及FISH檢測結(jié)果 IHC檢測結(jié)果為：（-）病例比例為11.86％；（1+）病例占16.95％，（2+）病例占46.61％，（3+）病例占24.58％。FISH檢測結(jié)果為：53例為比值＞2.2，64例比值＜1.8，1例比值為1.8-2.2。見表1。

表1 本組浸潤性乳腺癌IHC及FISH檢測HER-2的基因分布情況比較 例（％）

2.2 本組118例病例中HER-2在伴或不伴17號染色體患者中的基因分狀態(tài)分布狀況分析 IHC檢測到8例乳腺癌HER-2表達(dá)存在異質(zhì)性，其發(fā)生率為6.78％，異質(zhì)性在FISH中亦得到證實(shí)。FISH檢測共發(fā)現(xiàn)5例17號染色體多體，其發(fā)生率為4.24％，均為IHC（3+）病例。見表2。

表2 本組浸潤性乳腺癌HER-2的基因分布狀況分析 例（％）

2.3 IHC及FISH檢測一致性分析 IHC陽性病例29例，F(xiàn)ISH檢測比值＞2.2有28例，1例為1.8-2.2；IHC陰性病例34例，F(xiàn)ISH檢測比值均為＜1.8。免疫組化陽性病例及陰性病例與FISH符合率為98.41％（62/63），kappa值為0.968，P=0.000，具有高度一致性。

3 討論

HER-2是人類17q21染色體上的基因。該基因的表達(dá)不僅和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，更是臨床預(yù)后評估的重要指標(biāo)[5]。乳腺癌組織中HER-2狀態(tài)檢測的應(yīng)用技術(shù)越來越多，關(guān)于基于HER-2蛋白水平的檢測，與基因HERR-2的DNA水平的檢測相比，哪種方法更為準(zhǔn)確可靠，大多數(shù)學(xué)者的爭論甚多，而爭論的焦點(diǎn)在于對17號染色體的多體性的認(rèn)識[6]。目前研究顯示整條17號染色體的多體罕見，CEPl7的多體并不能代表整條第17號染色體多體，部分乳腺癌中17號染色體存在HER-2基因和著絲粒的共同擴(kuò)增[7]。越來越多的學(xué)者認(rèn)為，HER2拷貝數(shù)對于HER2基因擴(kuò)增的判斷更為重要[8]。因此，美國ASCO/CAP 2013版HER-2檢測指南及我國《乳腺癌HER2檢測指南（2014版）》[2]均強(qiáng)調(diào)質(zhì)量控制，同時(shí)推薦了IHC及ISH（in situ hybridization，原位雜交）兩種方法。

研究資料顯示，IHC檢測為-、1+、2+、3+中FISH的符合率分別分：100％、100％、45.45％、96.55％；同時(shí)在本研究的118例病例中，IHC與FISH檢測乳腺浸潤性導(dǎo)管癌HER-2的結(jié)果具有高度一致性。與Viale等學(xué)者的研究結(jié)果相似[9]。IHC是一項(xiàng)廣泛而實(shí)用的技術(shù)，具有檢測成本低、操作簡單、耗時(shí)短、可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化檢測和染色后切片便于存檔等優(yōu)點(diǎn)，閱片時(shí)可同時(shí)進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)評價(jià)，因此，成為乳腺癌患者檢測HER-2擴(kuò)增最常使用的方法[10]。但I(xiàn)HC是一種半定量的方法，結(jié)果判定的標(biāo)準(zhǔn)為描述性語言，判讀的主觀影響較大，未經(jīng)嚴(yán)格培訓(xùn)的醫(yī)師判定一致性偏低，較多的病例歸入不確定病例[11-12]。盡管ISH成本較貴，但具有高度的穩(wěn)定性及重復(fù)性，尤其是雙探針FISH加入了17號染色體著絲粒探針作為內(nèi)對照。乳腺癌中常見17號染色體的多體現(xiàn)象，在CEP17中平均每個(gè)細(xì)胞中都至少3個(gè)。相關(guān)研究顯示，17號染色體的多體會增加浸潤導(dǎo)管癌中HER-2基因的拷貝數(shù)，從而導(dǎo)致了HER-2基因蛋白的過表達(dá)，最終造成了IHC檢測假陽性結(jié)果[13]。FISH的結(jié)果判定更為客觀，主觀影響很小，經(jīng)培訓(xùn)的醫(yī)師間判定的一致性極高，已成為HER-2檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”[14]，可作為IHC的有益的補(bǔ)充。經(jīng)閱讀相關(guān)文獻(xiàn)并結(jié)合本研究實(shí)踐后，我們認(rèn)為免疫組化法檢測為（3+）的病例中，IHC和FISH具有較高一致性，可作為診斷的直接依據(jù)；而對于診斷為（-）和（1+）的病例而言，IHC結(jié)果為陰性者，可選擇性予以FISH檢測；但檢測結(jié)果為（2+）的患者，由于兩種檢測方法的一致性較一般，因此需重點(diǎn)對患者予以FISH檢測[15-16]。

綜上所述，對于IHC 2+的病例，建議行FISH檢測。對于大多數(shù)IHC 2+的病例，F(xiàn)ISH均能明確HER-2狀態(tài)，當(dāng)然，對于FISH無法確定HER-2狀態(tài)的標(biāo)本，應(yīng)積極選擇其他方法（如PCR、RNA-ISH等）進(jìn)行檢測。

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The HER-2 Contrast Analysis on 118 Cases with Breast Invasive Ductal Carcinoma by IHC and FISH Detection/

ZHU Wen-biao，ZHENG Shao-qiu，LU Shan-ming，et al.//Medical Innovation of China，2015，12（11）：005-007

Objective：To compare the consistency of HER-2 in breast infiltrating ductal carcinoma by IHC and FISH detection.Method：HER-2 of 118 cases with breast invasive ductal carcinoma were tested by FISH and IHC detection，and compared the results correlation.Result：118 specimens of invasive ductal carcinoma were seleced， The results tested by IHC were as follows：14 cases（-）；20 cases（1+），55 cases（2+），29 cases （3+）.The results tested by FISH were as follows： 53 cases ＞2.2， 64 cases ＜1.8，1 case was 1.8-2.2.HER-2 positive coincidence rate was 96.6％（28/29） by IHC detection in positive cases by FISH detection，HER-2 negative by FISH were in negative of IHC detection， the coincidence rate was 100％（34/34）.25 HER-2 positive cases by FISH detection were among 55 cases of HER-2（2+） by IHC detection， and 30 were the negative.5 cases on chromosome multi-body in 17 were found by FISH detection，its incidence rate was 4.24％.HER-2 expression in 8 cases with of breast cancer exists heterogeneity by IHC detection，and the heterogeneity was also confirmed in FISH detected.Conclusion：HER-2 of breast infiltrating ductal carcinoma by IHC detection was high consistency with FISH detection，HER-2 cases（2+） by immunohistochemical need to be detected by FISH.

Infiltrating ductal carcinoma； HER-2； Immunohistochemistry； Fluorescence in situ hybridization

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.11.002

2014-11-07） （本文編輯：陳丹云）

梅州市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2012B68）

①廣東省梅州市人民醫(yī)院 廣東 梅州 514031

朱文標(biāo)

First-author’s address：Meizhou People’s Hospital，Meizhou 514031，China