楊云舒，李 榮，姜子濤*

（天津商業(yè)大學生物技術(shù)與食品科學學院，天津市食品生物技術(shù)重點實驗室，天津 300134）

響應(yīng)面試驗優(yōu)化廣棗黃酮的微波提取工藝及黃酮的提純

楊云舒，李 榮，姜子濤*

（天津商業(yè)大學生物技術(shù)與食品科學學院，天津市食品生物技術(shù)重點實驗室，天津 300134）

通過單因素試驗和響應(yīng)面分析法確定了微波輔助提取廣棗黃酮的最佳條件：提取溫度75 ℃、液料比62∶1、乙醇體積分數(shù)62%、微波功率500 W和提取時間7 min。在此條件下，黃酮得率遠高于文獻所報道的方法。通過動態(tài)法確定了AB-8型大孔樹脂純化廣棗黃酮的最優(yōu)工藝參數(shù)：樣品液流速2 BV/h、樣品液pH 2、洗脫液流速3 BV/h、洗脫液乙醇體積分數(shù)60%。同時利用制備色譜對廣棗黃酮進行純化，高效液相色譜法分析結(jié)果證明，制備色譜用于純化廣棗黃酮具有可行性。

廣棗；響應(yīng)面分析；大孔樹脂；制備色譜

廣棗是漆樹科植物南酸棗（Choerospondias axillaris (Roxb.) Burtt et Hill）的干燥果實，又名南酸棗、五眼果、山棗等，在我國有廣泛的分布[1]。我國的許多地區(qū)都有生食廣棗的習慣，因其具有較高的保健功效，被視為食品加工的優(yōu)良原料[2]。廣棗具有養(yǎng)心安神的功效，并且對抗心律失常、改善心肌缺血具有明顯的效果，常被用于臨床心血管疾病的治療[3-6]，2010版《中華人民共和國藥典》[7]已將其收錄。經(jīng)過國內(nèi)外的一些學者對于廣棗的化學成分所進行的系列研究，目前已知其果實中含有黃酮類化合物、酚酸類化合物、甾醇、脂肪酸、氨基酸以及鉀、鈣和鎂等多種成分[8-14]。其中，廣棗中大量的黃酮類成分被認為是有效成分，具有多種生理活性。目前，廣棗黃酮 的提取方法主要有回流法和超聲提取法[15-18]，此外，易躍能等[19]使用了較適宜于工業(yè)生產(chǎn)的滲漉法進行廣棗黃酮的提取，谷福根等[20]將β-環(huán)糊精選擇性提取法引入廣棗黃酮的提取研究中，然而它們均在不同程度上存在著成本較高、提取不完全、耗時過長等不足。而對于廣棗黃酮的分離純化還鮮有研究[21]。

本實驗利用微波輔助快速提取技術(shù)，結(jié)合響應(yīng)面分析法優(yōu)化廣棗總黃酮的提取工藝，并采用大孔吸 附樹脂和制備色譜進行純化，為廣棗黃酮的開發(fā)和利用提供了一種簡單、有效的方法，并為廣棗在食品和藥品領(lǐng)域的有效應(yīng)用提供了理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

廣棗，產(chǎn)地西藏，去核后粉碎約20 目備用。

蘆丁標準品（分析純） 北京化學試劑公司；甲醇（色譜純） 天津市科密歐化學 試劑有限公司；AB-8大孔樹脂 南開大學化工廠；其余試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

FA1104N型電子天平 上海精密儀器有限公司；Multi SYNTH微波合成儀 意大利Milestone公司；Alpha-1500紫外-可見分光光度計 上海譜元儀器有限公司；U-3900紫外-可見分光光度計 日本日立公司；Grace RevelerisTM全息快速純化色譜系統(tǒng)、SSI 1500高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）儀（配備四元梯度泵） 美國Alltech公司；RE52-86A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 標準曲線的繪制

按照文獻[22-23]的方法，準確吸取0.2 mg/mL的蘆丁標準品溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，置于10 mL比色管中，分別加入5%的NaNO2溶液0.40 mL，搖勻并放置6 min，再加入10% Al(NO3)3溶液0.40 mL，搖勻，放置6 min，然后加入4%的 NaOH溶液4.0 mL，用30%的乙醇溶液定容至刻度并搖勻，靜置10 min后于508 nm波長處測定吸光度，參比為試劑空白。得到蘆丁標準溶液質(zhì)量濃度ρ（mg/mL）與吸光度A的回歸方程為：A=10.483ρ-0.001 8，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 2。

1.3.2 廣棗黃酮的微波提取

稱取0.5 g廣棗粉末，加入微波合成儀的圓底燒瓶中，以乙醇溶液為溶劑，在設(shè)定條件下按照一定液料比進行微波萃取，對提取液進行減壓抽濾，所得濾液即為廣棗黃酮提取液。提取液經(jīng)減壓旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)后冷凍干燥，得到廣棗粗黃酮粉末。準確稱取粗黃酮粉末0.5 g，加入少量乙醇溶解后定容至500 mL，得到1.0 mg/mL的廣棗粗黃酮儲備液，備用。

1.3.3 廣棗黃酮含量的測定

準確吸取1.0 mL提取液，以相應(yīng)提取液作為參比，按照1.3.1節(jié)方法顯色，測定其在波長508 nm處的吸光度，代入標準曲線回歸方程得到黃酮質(zhì)量濃度，按照下式計算黃酮得率：

式中：ρ為由回歸方程計算出的樣品液中黃酮質(zhì)量濃度/（mg/mL）；V為提取液體積/mL；N為稀釋倍數(shù)；m為廣棗粉末質(zhì)量/mg。

1.3.4 單因素試驗

以乙醇水溶液為溶劑，準確稱取0.5 g廣棗粉末，分別改變提取溫度（固定液料比40∶1、乙醇體積分數(shù)60%、微波功率400 W、提取時間7 min）、液料比（固定提取溫度75 ℃、乙醇體積分數(shù)60%、微波功率400 W、提取時間7 min）、乙醇體積分數(shù)（固定提取溫度75 ℃、液料比60∶1、微波功率400 W、提取時間7 min）、提取時間和微波功率（固定提取溫度75 ℃、液料比60∶1、乙醇體積分數(shù)60%），進行單因素試驗，測定提取液在最大吸收波長262 nm處的吸光度。代入標準曲線，得到黃酮得率。實驗重復(fù)3 次，取平均值。

1.3.5 響應(yīng)面試驗設(shè)計

在單因素試驗結(jié)果的基礎(chǔ)上，選取提取溫度、液料比和乙醇體積分數(shù)作為3 個影響因素，采用Box-Behnken原理，設(shè)計三因素三水平的試驗方案，對數(shù)據(jù)進行響應(yīng)面分析，其中，中心試驗重復(fù)3 次。根據(jù)單因素試驗的結(jié)果及水平選擇的一般規(guī)律，因素與水平見表1。

表1 響應(yīng)面因素及水平Table1 Factors and levels used in in the response surface design

1.3.6 大孔樹脂純化廣棗黃酮條件的確定

1.3.6.1 大孔吸附樹脂的預(yù)處理

將AB-8大孔樹脂于95%的乙醇溶液中充分浸泡24 h，用蒸餾水洗至無醇味，去除醇溶性雜質(zhì)。然后用5%的HCl溶液浸泡3 h，洗至流出液的pH值為中性，再用5%的NaOH溶液浸泡3 h，洗至pH值為中性后浸泡備用[24]。

1.3.6.2 樣品液流速的確定

準確稱取處理過的AB-8型大孔樹脂6.0 g，采用濕法裝柱，分別以1.5、2、3 BV/h的流速加入質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL的樣品液，每隔3 mL測定流出液在波長262 nm處的吸光度，當流出液的吸光度達到樣品液的1/10（泄漏點）時停止上樣。

1.3.6.3 樣品液pH值的確定

將pH值分別為2、4、6的質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL的樣品液以2 BV/h的流速上樣，每隔3 mL測定流出液在波長262 nm處的吸光度，以泄漏點最遲為最佳。

1.3.6.4 洗脫液流速的確定

取濕法填裝的AB-8型大孔吸附樹脂6.0 g，按以上確定的吸附條件上樣至泄漏點，用體積分數(shù)為60%的乙醇溶液分別以1、2、3 BV/h的流速進行洗脫，每隔3 mL測定流出液在波長262 nm處的吸光度，繪制洗脫曲線。

1.3.6.5 洗脫液乙醇體積分數(shù)的確定按以上確定的吸附條件上樣至泄漏點，分別用體積分數(shù)為50%、60%、70%和80%的乙醇溶液以3 BV/h的流速進行洗脫，收集洗脫液并掃描其在200～700 nm波長范圍內(nèi)的吸收光譜。

1.3.7 制備色譜純化廣棗黃酮

將2.5 g粗黃酮溶解得到質(zhì)量濃度為5.0 mg/mL的粗黃酮溶液。制備色譜條件：柱填料為40 g Reveleris?RP C18Cartridge，流動相為0.1%乙酸溶液（A）和甲醇（B），流速為6 mL/min，進樣量為20 mL，檢測波長為262 nm。梯度洗脫條件為：0～9 min，0～30% B；9～12 min，30%～75% B；12～27 min，75%～100% B；27～30 min，100% B。

1.3.8 純化效果的檢測

采用HPLC法測定純化前后黃酮的純度，分別將經(jīng)大孔樹脂和制備色譜純化的廣棗黃酮溶液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去乙醇，冷凍干燥得到純化后的廣棗黃酮粉末。分別用50%的甲醇溶解，并稀釋至1 mg/mL，使用HPLC進行分析。分析條件：ZorbaxSB-C18（250 mm×4.6 mm， 5 μm），流動相：甲醇（A）、水（B）、1%乙酸溶液（C），流速0.9 mL/min，進樣量10 μL。梯度洗脫條件為：0～40 min，0～90% A，C溶液一直維持在10%。檢測波長為262 nm。

1.4 數(shù)據(jù)處理

用SPSS對單因素試驗數(shù)據(jù)進行分析，用Design-Expert對響應(yīng)面試驗數(shù)據(jù)進行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗結(jié)果

2.1.1 提取溫度的影響

保持其他條件不變，分別測定在提取溫度60、65、70、75、80 ℃條件下的廣棗黃酮得率，結(jié)果見圖1。

圖1 提取溫度對廣棗黃酮得率的影響Fig.1 Effect of extraction temperature on the yield of fl avonoids

由圖1可知，在60～80 ℃范圍內(nèi)，隨著提取溫度的升高，黃酮得率呈現(xiàn)出先增大后減小的趨勢，并在75 ℃時達到最高。這可能是因為溫度的升高加劇了分子運動，在一定溫度范圍內(nèi)，隨溫度的升高，黃酮在乙醇中的溶解度增大，但溫度過高可能會導(dǎo)致黃酮甙分子的結(jié)構(gòu)破壞，從而降低黃酮得率，因此選擇廣棗黃酮的提取溫度為75 ℃。

2.1.2 液料比的影響

在其他條件不變的情況下，分別測定在液料比30∶1、40∶1、50∶1、60∶1和70∶1條件下的廣棗黃酮得率，結(jié)果見圖2。

圖2 液料比對廣棗黃酮得率的影響Fig.2 Effect of ratio of liquid to material on the yield of fl avonoids

從圖2可以看出，在液料比30∶1～70∶1范圍內(nèi)，黃酮類物質(zhì)的得率呈現(xiàn)先增加后減小的趨勢。這是因為液料比過大會導(dǎo)致溶液質(zhì)量濃度減小，從而影響到原料對微波能的吸收，故選擇液料比為60∶1。

2.1.3 乙醇體積分數(shù)的影響

在其他條件不變的情況下，分別測定在乙醇體積分數(shù)50%、60%、70%、80%和90%條件下的廣棗黃酮得率，結(jié)果見圖3。

圖3 乙醇體積分數(shù)對廣棗黃酮得率的影響Fig.3 Effect of ethanol concentration on the yield of fl avonoids

由圖3可以看出，廣棗黃酮的得率在乙醇體積分數(shù)為60%時達到最高。這是因為當乙醇體積分數(shù)為60%時與廣棗中黃酮類化合物的極性相近，根據(jù)“相似相溶”原理，此時廣棗黃酮在其中的溶解度最大，更有利于溶出，故選擇乙醇體積分數(shù)為60%。

2.1.4 提取時間及微波功率的影響

在其他條件不變的情況下，分別測定在不同提取時間及微波功率條件下的廣棗黃酮得率，結(jié)果見圖4。

圖4 提取時間及微波功率對廣棗黃酮得率的影響Fig.4 Effect of extraction time and microwave power on the yield of fl avonoids

提取時間可影響溶劑與細胞內(nèi)黃酮類物質(zhì)接觸的充分程度，隨著提取時間的延長，溶劑能夠更加充分的滲透到細胞內(nèi)部溶解黃酮，而提取時間過長則會導(dǎo)致細胞內(nèi)溫度過高，氧化黃酮類物質(zhì)。微波功率的增大會使原料吸收的微波能量增多，從而使黃酮更易進入溶劑中。從圖4可以看出，在500 W條件下提取7 min時與400 W提取9 min的提取率相當，從節(jié)約時間考慮，選擇在微波功率500 W條件下提取7 min。

2.2 響應(yīng)面法優(yōu)化提取工藝

表2 單因素試驗的方差分析Table2 Analysis of variance for single factors

表3 響應(yīng)面試驗方案及結(jié)果Table3 Response surface design with experimental results

通過SPSS處理單因素試驗數(shù)據(jù)，確定影響廣棗黃酮得率的各因素的大小關(guān)系為：液料比＞乙醇體積分數(shù)＞提取溫度＞微波功率＞提取時間，其中液料比、乙醇體積分數(shù)和提取溫度3 個因素顯著影響黃酮得率，其他兩個因素的影響不顯著（表2）。這是因為微波輔助提取中，起始功率越大，達到目標溫度的時間就越短；當達到目標溫度后，微波合成儀會自動調(diào)整功率以維持此溫度。因此，在廣棗黃酮的提取中，提取溫度、微波功率、提取時間三者表現(xiàn)為協(xié)同效應(yīng)。在應(yīng)用響應(yīng)面分析進行最優(yōu)條件分析時，設(shè)定微波功率為500 W，提取時間為7 min，以確定最優(yōu)工藝條件。試驗方案及結(jié)果見表3。

2.2.1 二次回歸方程擬合和方差分析

利用Design-Expert軟件對試驗結(jié)果進行擬合，得到以廣棗黃酮得率為響應(yīng)值，對自變量提取溫度（A）、液料比（B）和乙醇體積分數(shù)（C）三因素的回歸方程為：

Y=-202.697 08＋5.077A＋0.513 75B＋0.364 5C＋0.000 65AB＋0.001 25AC＋0.000 625BC-0.034 383A2-0.004 85B2-0.004C2

表4 回歸方程的方差分析Table4 Analysis variance of regression equation

由表4可知，模型的P=0.000 2＜0.0 1，說明模型變量與3 個自變量之間的線性關(guān)系極顯著，即此方法是可靠的。失擬項P=0.247 6＞0.05，不顯著，說明該方程的擬合情況良好，可以用其進行廣棗黃酮得率的預(yù)測和分析。R2=0.980 8，表明只有1.92%的試驗不能用此方程確定，在試驗中沒有其他顯著因素的影響，條件是合適的[25]。對回歸方程各項的方差分析結(jié)果表明，方程的一次項A、B、C及二次項A2、B2和C2的P值均小于0.01，極顯著，而交互項不顯著，說明此方程的擬合較充分。各因素對廣棗黃酮得率的影響依次為：液料比＞提取溫度＞乙醇體積分數(shù)。

對表4的數(shù)據(jù)進行二次多元回歸擬合，去除不顯著的交互項AB、AC和BC，得到廣棗黃酮得率對3 個因素的二次多項回歸方程：y=-213.497 08＋5.191A＋0.6B＋0.495 75C-0.034 383A2-0.004 85B2-0.004C2。優(yōu)化后，模型（P＜0.000 1）極顯著，失擬項不顯著，決定系數(shù)R2=0.988 6，調(diào)整系數(shù)R2= 0.968 2，預(yù)測系數(shù)R2=0.845 3，說明測定值（16.41%）與模型預(yù)測值（16.38%）之間具有良好的相關(guān)度。變異系數(shù)0.66%，說明模型重復(fù)性良好。提取溫度、液料比和乙醇體積分數(shù)3 個因素兩兩交互作用對于廣棗黃酮得率的三維空間曲面圖見圖5。

圖5 各因素交互作用對黃酮得率影響的響應(yīng)面圖Fig.5 Response surface graphs showing the effect of three extraction parameters on the yield of fl avonoids

2.2.2 最優(yōu)條件驗證實驗

通過回歸模型預(yù)測，給出的廣棗黃酮提取的最佳工藝條件為提取溫度75.55 ℃、液料比62.1∶1、乙醇體積分數(shù)62.28%、微波功率500 W、提取時間7 min，在此條件下廣棗黃酮得率的預(yù)測值為16.38%。考慮到實驗的可操作性，修正最佳工藝條件為，提取溫度75 ℃、液料比62∶1、乙醇體積分數(shù)62%、微波功率500 W和提取時間7 min。在此修正條件下進行3 次平行驗證實驗，廣棗黃酮實際得率為16.41%，相對誤差為0.2%，與預(yù)測值接近?？梢娢⒉ǚ纱蟠蟮亟档忘S酮的提取時間，由常規(guī)的2～3 h降低到現(xiàn)在的7 min，且黃酮得率遠高于文獻所報道的回流法、超聲提取法、滲漉法、β-環(huán)糊精選擇性提取法等的結(jié)果[15-20]。證明由響應(yīng)面分析法優(yōu)化得到的廣棗黃酮提取條件是可靠的。

2.3 大孔樹脂純化廣棗黃酮

2.3.1 樣品液流速的確定

圖6 樣品液流速對吸附效果的影響Fig.6 Effect of sample loading fl ow rate on adsorption effi ciency

由圖6可以看出，樣品液流速為2 BV/h時泄漏點（吸光度為1.09）出現(xiàn)的最晚。這是因為樣品液流速過快會使樹脂產(chǎn)生不 完全吸附，部分未吸附的黃酮分子隨樣品液流出，降低了樹脂的吸附效率。因此，選擇樣品液流速為2 BV/h。

2.3.2 樣品液pH值的確定

圖7 樣品液pH值對吸附效果的影響Fig.7 Effect of sample pH on adsorp tion effi ciency

由圖7可知，在樣品液pH值為2時，大孔樹脂的吸附能力最強，隨著pH值的升高，大孔樹脂的吸附能力降低。這是因為黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)上具有酚羥基，帶有一定酸性。黃酮在酸性條件下主要以分子形式存在，有利于大孔樹脂的吸附。因此選擇樣品液pH值為2。

2.3.3 洗脫液流速的確定

圖8 洗脫液流速對洗脫效果的影響Fig.8 Effect of eluent fl ow rate on elution effi ciency

如圖8所示，洗脫液流速為3 BV/h時峰的吸收強度最大，且3 個流速條件下幾乎均無拖尾現(xiàn)象，解吸率均達到90%以上。因為流速過慢會導(dǎo)致時間延長、生產(chǎn)效率降低等問題，所以選擇洗脫液流速為3 BV/h。

2.3.4 洗脫液乙醇體積分數(shù)的確定

圖9 不同乙醇體積分數(shù)洗脫液的紫外吸收光譜Fig.9 UV absorption spectra of eluates with different concentrations of ethanol

由圖9可知，當乙醇體積分數(shù)為60%和80% 時，洗脫下的黃酮最多；但在乙醇體積分數(shù)為80%時，流出液的吸收曲線峰形有了明顯的變化，表明有極性雜質(zhì)被洗脫下來。再加之從經(jīng)濟效益的角度考慮，應(yīng)盡可能地降低有機溶劑的使用量，因此選擇洗脫液乙醇體積分數(shù)為60%。在所擬定的最佳條件下，經(jīng)大孔樹脂純化后黃酮含量由純化前的28.5%增加到67.3%，黃酮含量提升到純化前的2.36 倍，純化效果還是非常明顯的。

2.4 制備色譜分離廣棗黃酮

圖10 制備色譜純化廣棗黃酮（波長262 nm）Fig.10 Purifi cation of Choerospondias axillaris fl avonoids by preparative chromatography (262 nm)

圖10 顯示了廣棗黃酮的制備色譜分離結(jié)果，制備色譜將廣棗黃酮分為2 個組分，即5～8 min為組分1，17.5～24.5 min為組分2。兩個組分間的極性有顯著區(qū)別。

2.5 制備色譜分離效果

由圖11可以看出，經(jīng)大孔樹脂純化得到色譜圖與制備色譜分離得到的兩個組分的色譜圖能一一對應(yīng)，并且在質(zhì)量濃度相同的情況下，各組分的響應(yīng)值均高于分離前純化黃酮。這說明制備色譜作為一種快速高效的純化手段，不僅不會丟失成分，而且 還能夠起到初步分離的作用，每一組分的純度也都得到了顯著提高。但是由于提取物中含有部分寡聚鞣花酸[5]，在進行柱色譜分離時，有一些寡聚物會在樹脂上降解，極性也隨之發(fā)生改變，而樹脂分離純化的原理就是依據(jù)被吸附物質(zhì)和樹脂的極性，所以很難利用在樹脂上反復(fù)進行色譜分離的方法得到純化物[26]。

圖11 大孔樹脂和制備色譜純化廣棗黃酮的HPLC圖Fig.11 HPLC profi les of Choerospondias axillaris fl avonoids after purifi cation by AB-8 resin and preparative chromatography

3 結(jié) 論

本研究利用單因素試驗篩選關(guān)鍵因素，通過響應(yīng)面分析法確定微波輔助提取廣棗黃酮的最佳條件：提取溫度75 ℃、液料比62∶1、乙 醇體積分數(shù)62%、微波功率500 W、提取時間7 min。通過動態(tài)法確定了AB-8型大孔樹脂純化廣棗黃酮的最 佳工藝參數(shù)：樣品液流速2 BV/h、樣品液pH 2、洗脫液流速3 BV/h、洗脫液乙醇體積分數(shù)60%。經(jīng)制備色譜純化分離出兩個組分。對比兩種純化方式，制備色譜不僅能夠高效快速地純化廣棗黃酮，還能對黃酮組分進行初步分離。HPLC分析結(jié)果證明：制備色譜用于分離純化廣棗黃酮具有可行性。本研究初步確定了微波輔助提取廣棗黃酮和大孔樹脂、制備色譜純化廣棗黃酮的工藝參數(shù)，為進一步進行生物活性的研究及成分分析奠定了基礎(chǔ)，為廣棗黃酮的利用提供了一定的理論依據(jù)。

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Optimization of Microwave-Assisted Extraction by Response Surface Analysis and Purifi cation of Flavonoids from Choerospondias axillaris Fruit

YANG Yunshu, LI Rong, JIANG Zitao*
(Tianjin Key Laboratory of Food Biotechnology, College of Biotechnology and Food Science, Tianjin University of Commerce, Tianjin 300134, China)

The optimal conditions for microwave-assisted extraction of fl avonoids from the fl esh of Choerospondias axillaris fruits were e stablished by using single factor experiments and response surface analysis as follows: extraction temperature, 75 ℃; ratio of solvent to material, 62:1 (mL/g); ethanol concentration, 62%; microwave power 500 W; and extraction time, 7 min. Under the proposed conditions, the yield of flavonoids was much higher than that obtained from some methods reported in the literature. The optimal adsorption/desorption conditions for purifying the crude flavonoids with AB-8 macroporous adsorbent resin were determined as follows: the extract solution at pH 2 was passed through the column at a fl ow rate of 2 bed volumes/h (BV/h), and then the column was eluted with 60% al cohol at 3 BV/h. The purifi cation of crude fl avonoids from C. axillaris was also investigated using preparative chromatography and the feasibility was confi rmed by the results of HPLC analysis.

Choerospondias axillaris; response surface analysis; macroporous resin; preparative chromatography

TS202.3

A

1002-6630（2015）22-0018-07

10.7506/spkx1002-6630-201522004

2015-03-21

天津市自然科學基金重點項目（12JCZDJC34100）；天津市高等學校創(chuàng)新團隊培養(yǎng)計劃項目（TD12-5049）

楊云舒（1991—），女，碩士研究生，研究方向為食品添加劑。E-mail：yangys019@hotmail.com

*通信作者：姜子濤（1956—），男，教授，博士，研究方向為食品添加劑。E-mail：ztjiang@tjcu.edu.cn