黃楚楚，熊輝煌，龔 斌，喻 蕓，馮 越，梁 媛，朱雪梅*

（南昌大學(xué)食品學(xué)院，食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047）

脂肪酶催化單油酸甘油酯制備功能性1,3-甘油二酯

黃楚楚，熊輝煌，龔 斌，喻 蕓，馮 越，梁 媛，朱雪梅*

（南昌大學(xué)食品學(xué)院，食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047）

研究固定化脂肪酶TLIM催化單油酸甘油酯（glycerol monooleate，GMO）制備1,3-甘油二酯（sn-1,3-diacylglyerol，sn-1,3-DAG）。比較了游離脂肪酸（共軛亞油酸）和脂肪酸乙酯（共軛亞油酸乙酯）兩種不同類(lèi)型?；w、反應(yīng)時(shí)間、底物物質(zhì)的量比對(duì)?；w移和sn-1,3-DAG的影響。通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判定及分析得到最佳反應(yīng)條件為采用20%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）脂肪酶TLIM、底物物質(zhì)的量比（共軛亞油酸乙酯和GMO）3∶1、在50 ℃的220 r/min水浴搖床中反應(yīng)2 h，最后得到sn-1,3-DAG轉(zhuǎn)化率為65%。本研究利用GMO而不是常規(guī)的甘油或者甘油三酯來(lái)制備sn-1,3-DAG，并比較了不同?；w對(duì)酰基遷移和sn-1,3-DAG轉(zhuǎn)化率的影響，旨在為脂肪酶催化法制備功能性sn-1,3-DAG的研究提供一定參考。

酰基遷移；共軛亞油酸；共軛亞油酸乙酯；單油酸甘油酯；脂肪酶TLIM

甘油二酯（diacylglycerol，DAG）是由兩分子脂肪酸分別結(jié)合到甘油的兩個(gè)端羧基上形成的二酯，包含1,3-甘油二酯（sn-1,3-DAG）和1,2-甘油二酯（sn-1,2-DAG）兩種同分異構(gòu)體[1]。1,3-DAG具有良好的乳化作用，可作為乳化劑廣泛應(yīng)用于食品、藥品、化妝品等行業(yè)；另外，其生理功能具有多樣性，研究表明sn-1,3-DAG具有減少內(nèi)臟脂肪、抑制體重增加、降低血脂的作用，且起到預(yù)防動(dòng)脈血栓形成、緩解糖尿病、腎病的效果[2-6]，對(duì)肥胖、高血脂癥、脂肪肝等多種脂肪代謝紊亂疾病患者及潛在患者來(lái)說(shuō)，以功能性的sn-1,3-DAG作為一種新型保健食用油代替常規(guī)油脂是該類(lèi)消費(fèi)群體的不二選擇[7-9]。

目前，制備sn-1,3-DAG的方法主要是化學(xué)法和酶法?；瘜W(xué)法得到高純度的產(chǎn)品比較困難，往往需要多步驟的反應(yīng)以及繁瑣的純化操作，而酶法反應(yīng)條件溫和，且酶的選擇性高，較易得到高純度的1,3-DAG[10-11]。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外已有一些文獻(xiàn)報(bào)道利用sn-1,3脂肪酶合成和富集sn-1,3-DAG的方法。日本花王集團(tuán)所生產(chǎn)的Enova oil就是利用sn-1,3位脂肪酶催化大豆油和加拿大菜籽油，經(jīng)過(guò)一系列優(yōu)化合成條件，來(lái)獲得80%純度的sn-1,3-DAG。至于具體轉(zhuǎn)化技術(shù)一直處于商業(yè)保密狀態(tài)。就國(guó)內(nèi)而言，一些知名高校及研究所也對(duì)DAG食用油進(jìn)行了研究開(kāi)發(fā)，但至今未取得sn-1,3-DAG高純度合成技術(shù)的突破性進(jìn)展。目前為止，sn-1,3-DAG生產(chǎn)中存在的主要問(wèn)題是目標(biāo)產(chǎn)品轉(zhuǎn)化率低（目前實(shí)驗(yàn)條件下最理想結(jié)果僅為50%左右）、底物利用率低，且產(chǎn)生空間異構(gòu)體（sn-1,2-DAG）、甘油單酯等多種副產(chǎn)物[12]。這些難題制約sn-1,3-DAG的生產(chǎn)和應(yīng)用。研究發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致這些問(wèn)題的主要原因是酶催化合成DAG過(guò)程中存在副反應(yīng)-?；w移[13]。?；w移為脂肪酸從sn1或sn3位轉(zhuǎn)移至sn2位，反之亦然。本實(shí)驗(yàn)組曾對(duì)?；w移的控制進(jìn)行初步研究，如升高反應(yīng)溫度、非極性反應(yīng)體系等會(huì)促進(jìn)?；w移，反之則抑制酰基遷移[14]。本實(shí)驗(yàn)利用固定化脂肪酶TLIM催化酰基供體和單油酸甘油酯（glycerol monooleate，GMO），在無(wú)溶劑體系中發(fā)生轉(zhuǎn)酯交換反應(yīng)制備sn-1,3-DAG，旨在通過(guò)探究不同酰基供體、反應(yīng)時(shí)間、底物物質(zhì)的量比對(duì)酰基遷移和sn-1,3-DAG的影響，來(lái)優(yōu)化sn-1,3-DAG的提取條件，提高sn-1,3-DAG的轉(zhuǎn)化率。圖1為反應(yīng)原理示意圖。

圖1 兩種?；w與GMO反應(yīng)制備sn-1,3-DAG的原理圖Fig.1 Reactions of two acly donors with glycerol monooleate for synthesizing sn-1,3-DAG

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

共軛亞油酸 韓國(guó)Livemax公司；共軛亞油酸乙酯、游離共軛亞油酸通過(guò)堿法催化實(shí)驗(yàn)室自制；sn-1(3)-GMO 韓國(guó)ⅡShin Wells公司；14% BF3甲醇溶液、sn-1,3-DAG標(biāo)準(zhǔn)品 美國(guó)Sigma公司；脂肪酶TLIM 丹麥諾維信公司；正己烷、異辛烷、甲基叔丁基醚、乙醚（色譜純） 美國(guó)Burdick & Jackson公司；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

SHA-C恒溫水浴振蕩器 榮華儀器制造有限公司；AR1140電子分析天平 美國(guó)奧豪斯貿(mào)易公司；DSY-Ⅲ氮吹儀 金科精華苑科技有限公司；GF254硅膠板 德國(guó)Merck公司；1200高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）儀（配備Hypersil BDS CPS型色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）和Model 300S蒸發(fā)光散射檢測(cè)器）、6890N氣相色譜（gas chromatography，GC）儀 美國(guó)Agilent公司。

1.3 方法

1.3.1 脂肪酶催化酰基供體酯交換反應(yīng)單因素試驗(yàn)

在反應(yīng)條件為50 ℃、20%脂肪酶TLIM、220 r/min條件下，考察?；w（共軛亞油酸和共軛亞油酸乙酯）、反應(yīng)時(shí)間（0.5、1、2、3、4、6、12、24、48、 96 h）、酰基供體與GMO物質(zhì)的量比（2∶1、3∶1、4∶1）對(duì)sn-1,3-DAG轉(zhuǎn)化率和酰 基遷移的影響，以確定以sn-1(3)-GMO為底物合成sn-1,3-DAG的最佳方法，為合成高質(zhì)量的sn-1,3-DAG奠定理論基礎(chǔ)。

1.3.2 脂肪酶催化酰基供體酯交換反應(yīng)產(chǎn)物中甘油酯組成測(cè)定

參照朱雪梅等[15]實(shí)驗(yàn)方法，采用NP（正相）-HPLC法對(duì)產(chǎn)物中甘油酯組成進(jìn)行分析。采用正己烷和甲基叔丁基醚（均含有體積分?jǐn)?shù)0.4%的乙酸）進(jìn)行二元梯度洗脫分離，流速為1 mL/min。具體洗脫條件為100%的己烷洗脫5 min；隨后在10 min內(nèi)線(xiàn)性增加甲基叔丁基醚的比例至甲基叔丁基醚-己烷體積比80∶20，保持7 min；然后在5 min內(nèi)線(xiàn)性減少甲基叔丁基醚的含量至100%的己烷，保持5 min。整個(gè)分析過(guò)程中，氮?dú)鉃殪F化氣體，壓力為2.2 Pa，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的溫度設(shè)為400 ℃[16]。參照Maurelli[17]、鐘南京[18]等實(shí)驗(yàn)中峰總面積表示甘油酯含量。

1.3.3 脂肪酸組成及位置組成分析

游離共軛亞油酸與共軛亞油酸乙酯分別和GMO直接經(jīng)BF3法甲酯化進(jìn)GC分析[19]，而游離共軛亞油酸-GMO與共軛亞油酸乙酯-GMO反應(yīng)后的合成的sn-1,3-DAG的脂肪酸組成是經(jīng)過(guò)薄層層析（thin layer chromatography，TLC）硅膠板分離再甲酯化，即反應(yīng)后產(chǎn)物經(jīng)過(guò)TLC分離后再刮板，TLC展開(kāi)條件為：正己烷-乙醚-乙酸體積比50∶50∶1，即將sn-1,3-DAG條帶刮下經(jīng)BF3甲醇法甲酯化。甲酯化的方法具體如下：上述刮板分離得到的sn-1,3-DAG和準(zhǔn)確稱(chēng)取游離共軛亞油酸、共軛亞油酸乙酯、GMO（各50 mg）分別加入1.5 mL 0.5 mol/L甲醇鈉，充分混合后在95 ℃反應(yīng)3 min，冷卻，再加入2 mL體積分?jǐn)?shù)14%的BF3甲醇溶液并充分混勻，繼續(xù)在95 ℃條件下反應(yīng)2 min，冷卻后加入1 mL飽和氯化鈉和2 mL正己烷，提取脂肪酸甲酯的正己烷溶液經(jīng)過(guò)無(wú)水硫酸鈉干燥后用于GC分析。配有自動(dòng)進(jìn)樣器和火焰離子化檢測(cè)器，色譜柱為SP-2560石英毛細(xì)管柱（100 m×0.25 mm，0.2 μm）。實(shí)驗(yàn)重復(fù)操作2 次。GC分析條件：柱溫先在100 ℃保溫5 min，采用程序升溫以4 ℃/min升至220 ℃保持20 min。載氣為N2，總氣體流速為52 mL/min，進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度分別為250 ℃和260 ℃。

1.3.4 酰基遷移程度的計(jì)算

?；w移為脂肪酸從甘油三酯的sn1或sn3位轉(zhuǎn)移至sn2位，反之亦然。TLIM是sn-1,3專(zhuān)一性脂肪酶，在酯化和轉(zhuǎn)酯交換的反應(yīng)過(guò)程中，脂肪酶TLIM把脂肪酸鍵入到甘油骨架的sn-1,3位或把甘油骨架上sn-1,3位脂肪酸水解為游離脂肪酸，而HPLC分析結(jié)果顯示有sn-1,2-甘油二酯和甘油三酯，說(shuō)明發(fā)生了?；w移。酰基遷移程度即?；w移的量，本實(shí)驗(yàn)中，合成1 mol的sn-1,2-DAG或甘油三酯（triacylglycerol，TAG）說(shuō)明有1 mol的脂肪酸發(fā)生了?；w移，因此，在本研究中酰基遷移程度由HPLC分析的甘油酯成分計(jì)算的，即?；w移的甘油酯與合成的總DAG和TAG的含量百分比，計(jì)算公式如下：

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

采用數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)軟件（Statistical Analysis System Software 8.2，SAS，Cary，NC）進(jìn)行方差分析。在α=0.05的水平上對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性分析，當(dāng)P＜0.05時(shí)，說(shuō)明差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 反應(yīng)底物和sn-1,3-DAG的脂肪酸組成分析

表1 游離脂肪酸（游離共軛亞油酸）、脂肪酸乙酯（共軛亞油酸乙酯）、GMO及反應(yīng)后sn-1,3-DAG的脂肪酸組成Table1 Fatty acid composition of free fatty acids, fatty acid esters, GMO and the produced sn-1,3-DAG %

如表1所示，游離共軛亞油酸和共軛亞油酸乙酯中總共軛亞油酸含量在94%以上，純度較高。GMO中油酸含量最高為76.98%，其次為亞油酸（10.33%）和硬脂酸（4.29%）。不同類(lèi)型的?；w即游離脂肪酸型（游離共軛亞油酸）和脂肪酸酯（共軛亞油酸乙酯）與GMO經(jīng)脂肪酶催化酯化后，經(jīng)TLC板分析得到sn-1,3-DAG進(jìn)行脂肪酸成分分析，結(jié)果顯示，與游離共軛亞油酸為?；w的反應(yīng)相比，共軛亞油酸乙酯為?；w的sn-1,3-DAG與相同物質(zhì)的量比（3∶1）的共軛亞油酸含量更高，而油酸等其他脂肪酸含量較少。

2.2 ?；w和反應(yīng)時(shí)間對(duì)脂肪酶催化酯交換反應(yīng)制備sn-1,3-DAG的影響

圖2 NP-HPLC分析甘油酯組分的色譜圖Fig.2 NP-HPLC liquid chromatogram of glyceride components

脂肪酶催化后混合物通過(guò)NP-HPLC分析，如圖2所示，此分離條件可以很好地將各種成分分離，出峰順序依次為共軛亞油酸乙酯、游離共軛亞油酸、TAG、sn-1,3-DAG、sn-1,2-DAG和GMO。

圖3 脂肪酶TLIM催化GMO與不同?；w反應(yīng)得到甘油酯含量變化Fig.3 The amount of glycerides from TLIM-catalyzed reaction of GMO with different acyl donors

如圖3所示，反應(yīng)2 h獲得sn-1,3-DAG含量最高，在圖3a中，實(shí)際測(cè)得sn-1,3-DAG，sn-1,2-DAG和TAG為60.56%、13.35%和7.84%；而在圖3b中，sn-1,3-DAG、sn-1,2-DAG和TAG分別為65.41%、11.57%和7.02%。隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)sn-1,3-DAG的含量逐漸減少，相反sn-1,2-DAG和TAG的含量隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。在游離共軛亞 油酸為?；w的反應(yīng)體系（圖3a）中，在96 h的反應(yīng)后，體系中sn-1,2-DAG的量與sn-1,3-DAG的量接近。與之不同的是，在以共軛亞油酸乙酯為?；w的反應(yīng)中（圖3b），TAG含量在0.5～48 h之間是緩慢增加，而48～96 h之間TAG的含量減少，相應(yīng)的sn-1,2-DAG的含量迅速增加，說(shuō)明48 h后sn-1,3專(zhuān)一性脂肪酶催化部分TAG發(fā)生水解生成sn-1,2-DAG；特別值得一提的是，在整個(gè)反應(yīng)中sn-1,3-DAG的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于sn-1,2-DAG的量。Nikolaus等[20]研究了脂肪酸與單甘酯（monoacylglycerol，MAG）的酯化反應(yīng)，在優(yōu)化條件下MAG與脂肪酸的酯化反應(yīng)可得到70%的DAG，其中1,2-DAG與1,3-DAG含量相當(dāng)；劉艷豐[21]研究了單甘脂與脂肪酸在以叔丁醇為溶劑的反應(yīng)中，MAG到DAG的轉(zhuǎn)化率達(dá)到75%，其中sn-1,3-DAG占90%，即sn-1,3-DAG的轉(zhuǎn)化率為67.5%。在本實(shí)驗(yàn)的反應(yīng)體系中，?；w共軛亞油酸乙酯的sn-1,3-DAG的轉(zhuǎn)化率最高達(dá)65%（反應(yīng)2 h），而此時(shí)得到的sn-1,2-DAG為11%。相比較劉艷豐[21]方法，本實(shí)驗(yàn)采用綠色環(huán)保的無(wú)溶劑體系，且重點(diǎn)研究控制?；w移程度。

TLIM為sn-1,3專(zhuān)一性脂肪酶，在假設(shè)酶的1,3-特異性完全專(zhuān)一和不考慮反應(yīng)過(guò)程中的?；D(zhuǎn)移時(shí)[22]，反應(yīng)過(guò)程中接入的酰基供體理應(yīng)全部接入GMO骨架的sn-3位上，所以不會(huì)產(chǎn)生sn-1,2-DAG和TAG，但檢測(cè)結(jié)果表明合成了sn-1,2-DAG和TAG，說(shuō)明發(fā)生了酰基遷移，?；w移在本反應(yīng)中為不利的副反應(yīng)，因此需要抑制酰基遷移，而圖3表明合理控制反應(yīng)時(shí)間可以一定程度上抑制?；w移。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)不同反應(yīng)時(shí)間（0.5、1、2、3、4、6、12、24、48、96 h）進(jìn)行采樣，結(jié)果如圖3所示，在反應(yīng)初期，以游離共軛亞油酸和共軛亞油酸乙酯的兩個(gè)反應(yīng)體系中sn-1,3-DAG、sn-1,2-DAG含量隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，2 h之后，sn-1,3-DAG含量達(dá)到最大，其中共軛亞油酸乙酯體系比游離共軛亞油酸體系所得sn-1,3-DAG的含量更高。之后隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，sn-1,3-DAG含量逐漸下降，但sn-1,2-DAG和TAG含量隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)繼續(xù)增加，由此確定最佳反應(yīng)時(shí)間為2 h。反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)能夠增加酰基遷移已被多次報(bào)道，研究者普遍認(rèn)為隨著時(shí)間延長(zhǎng)反應(yīng)體系趨近于動(dòng)力學(xué)平衡，副反應(yīng)的幾率增加。

2.3 底物物質(zhì)的量比對(duì)脂肪酶催化酯交換反應(yīng)制備sn-1,3-DAG的影響

隨著反應(yīng)底物物質(zhì)的量的改變，反應(yīng)體系的穩(wěn)定性及產(chǎn)物的擴(kuò)散速率與含量都將受到影響[23-24]。為此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)控制變量法改變底物物質(zhì)的量比為2∶1、3∶1、4∶1，分析底物物質(zhì)的量比對(duì)脂肪酶催化?；w酯交換反應(yīng)的影響。

圖4 不同底物物質(zhì)的量比的對(duì)甘油酯含量影響Fig.4 Infl uence of different substrate ratios on the amount of glycerides

如圖4所示，在相同條件下，sn-1,3-DAG的產(chǎn)量隨著反應(yīng)底物物質(zhì)的量比的增加而逐漸增加，共軛亞油酸乙酯作為?；w時(shí)的反應(yīng)的產(chǎn)量更大，考慮到生產(chǎn)成本等因素，本實(shí)驗(yàn)確定選擇最終底物物質(zhì)的量比例為3∶1。

2.4 ?；w和底物物質(zhì)的量比對(duì)酰基遷移程度的影響

為探究其對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物的影響機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)同一底物物質(zhì)的量比（3∶1）的游離共軛亞油酸與共軛亞油酸乙酯與GMO的反應(yīng)所得數(shù)據(jù)對(duì)其進(jìn)行分析，結(jié)果如圖5所示。

由圖5、6可知，在相同條件下，以游離共軛亞油酸作為?；w比共軛亞油酸乙酯作為時(shí)酰基遷移程度更大，且反應(yīng)時(shí)間的越長(zhǎng)、?；w的比例越多?；w移程度越高。就游離共軛亞油酸和共軛亞油酸乙酯這兩種不同?；w而言，游離共軛亞油酸的極性大于共軛亞油酸乙酯。極性?；w與添加極性的溶劑促進(jìn)?；w移的原理相似，盡管本實(shí)驗(yàn)所用脂肪酶為空間位置專(zhuān)一性，脂肪酶也會(huì)促進(jìn)?；w移的發(fā)生，而且?；w移幾乎發(fā)生在脂肪酶的活性中心附近。因?yàn)樵跇O性弱的體系中，體系中的水分集中在酶的活性中心，體系的極性增強(qiáng)，不利于反應(yīng)過(guò)渡態(tài)電荷的分散，因此過(guò)渡態(tài)的能量狀態(tài)提高，反應(yīng)的能壘提高，不利于酰基遷移的發(fā)生[25]。所以酰基供體極性更小的共軛亞油酸乙酯的反應(yīng)體系中?；w移發(fā)生率更小。因此，在合成sn-1,3-DAG更宜采用脂肪酸酯作為?；w，降低?；w移副反應(yīng)，提高目標(biāo)產(chǎn)品的轉(zhuǎn)化率。

圖5 不同?；w對(duì)?；w移程度的影響Fig.5 Effect of different acyl donors on the degree of acyl migration

圖6 不同底物物質(zhì)的量比對(duì)酰基遷移程度的影響Fig.6 Infl uence of different substrate ratios on the degree of acyl migration

3 結(jié) 論

通過(guò)單因素試驗(yàn)探究?；w（游離共軛亞油酸和共軛亞油酸乙酯）與GMO物質(zhì)的量比對(duì)催化反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率的影響。再以共軛亞油酸乙酯為?；w對(duì)時(shí)間等條件優(yōu)化，得到脂肪酶催化法制備功能性sn-1,3-DAG的最優(yōu)條件為：共軛亞油酸乙酯與GMO物質(zhì)的量比3∶1、酶加入量20%、反應(yīng)溫度50 ℃、反應(yīng)時(shí)間2 h。采用上述反應(yīng)條件，與游離共軛亞油酸相比，以共軛亞油酸乙酯為?；w的反應(yīng)實(shí)際測(cè)得sn-1,3-DAG含量更高（65.41%），?；w移程度更低，在將來(lái)中式生產(chǎn)中，經(jīng)過(guò)分子蒸餾等純化手段，分離除去未反應(yīng)的MAG和重餾分的TAG，sn-1,3-DAG的理論純度可以達(dá)到85%以上，可以用于生產(chǎn)高純度sn-1,3-DAG。所制備的sn-1,3-DAG中共軛亞油酸含量達(dá)到66.39%。

通過(guò)比較游離脂肪酸和脂肪酸乙酯兩種不同?；w，用極性更低的共軛亞油酸乙酯代替游離共軛亞油酸可以降低?；w移程度，降低副產(chǎn)物sn-1,2-DAG的得率不僅提高sn-1,3-DAG的純度和轉(zhuǎn)化率，還降低后續(xù)產(chǎn)物的純化難度。因此以脂肪酸酯為酰基供體制備sn-1,3-DAG和其他的高附加值的位置異構(gòu)體是更理想的選擇。本實(shí)驗(yàn)對(duì)共軛亞油酸乙酯為酰基供體的研究嘗試奠定了利用脂肪酸酯為?；w制備高附加值的位置異構(gòu)體制備的理論依據(jù)。

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Production of Functional 1,3-Diacylglyerol from Monoacylglycerol by Lipase-Catalyzed Transesterifi cation

HUANG Chuchu, XIONG Huihuang, GONG Bin, YU Yun, FENG Yue, LIANG Yuan, ZHU Xuemei*
(State Key Laboratory of Food Science and Technology, School of Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China)

sn-1,3-Diacylglycerol (sn-1,3-DAG) was synthesized from glycerol monooleate (GMO) by the immobilized Thermomyces lanuginosus lipase (Lipozyme TLIM)-catalyzed esterifi cation in a solvent-free system. The effects of different types of acyl donors such as conjugated linoleic acid (CLA-FA) and conjugated linoleic acid ethyl ester (CLA-EE), reaction time and molar ratio of substrates on acyl migration and glyceride concentration were investigated to improve the yield of sn-1,3-DAG. of the yield of sn-1,3-DAG was 65% when the reaction proceeded at a TLIM concentration of 20% by mass with a molar ratio of conjugated linoleic acid ethyl ester (CLAEE):GMO of 3:1 for 2 h at 50 ℃ in a water bath shaker at 220 r/min. Also, the effects of two types of acyl donors (free acid and ethyl ester) on acyl migration and the yield of sn-1,3-DAG were compared. This study can provide a reference for the industrial production of sn-1,3-DAG.

transesterifi cation; conjugated linoleic acid; conjugated linoleic acid ethyl ester; glyceryl monooleate; lipase TLIM

TQ225.24

A

1002-6630（2015）22-0001-05

10.7506/spkx1002-6630-201522001

2015-03-21

國(guó)家自然科學(xué)基金地區(qū)科學(xué)基金項(xiàng)目（31460427）；南昌大學(xué)國(guó)家級(jí)創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（201310403012）

黃楚楚（1993—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量與安全。E-mail：huangchuchu93@163.com

*通信作者：朱雪梅（1982—），女，副教授，博士，研究方向?yàn)橛椭瘜W(xué)、功能性食品。E-mail：zhuxuemei2005@hotmail.com