李克方

（鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院耳鼻喉科，河南 鄭州 450052）

應(yīng)用耳聾基因芯片檢測150例極重度感音神經(jīng)性耳聾患者的結(jié)果分析

李克方

（鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院耳鼻喉科，河南 鄭州 450052）

目的分析極重度感音神經(jīng)性耳聾患者的耳聾基因檢測結(jié)果。方法選取150例極重度非綜合征型耳聾患者，采用遺傳性耳聾基因芯片試劑盒，對基因組DNA的GJB2、 SLC26A4、GJB3和mtDNA12s rRNA四個耳聾相關(guān)基因的9個致聾突變位點進行檢測；對所有患者進行顳CT、內(nèi)耳水成像MRI掃描。結(jié)果在150例極重度非綜合征型耳聾患者中檢出耳聾相關(guān)基因突變者82例，占54.67%；其中GJB2基因突變41例（27.33%）；SLC26A4基因突變35例（23.33%）；mtDNA12s rRNA基因突變6例（4%）。結(jié)論遺傳因素是極重度感音神經(jīng)性耳聾患者的主要致病原因，GJB2和SLC26A4是主要的致病基因。

耳聾；基因檢測；基因芯片

耳聾，即聽力障礙，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。2006年第2次全國殘疾人抽樣調(diào)查結(jié)果顯示，全國聽力障礙者約2780萬，言語殘疾者127萬，占全部殘疾總數(shù)的27%，居各種殘疾的首位[1]。先天性聽力障礙也是我國最常見的出生缺陷之一。據(jù)統(tǒng)計我國7歲以下聾兒的數(shù)量以每年新增3萬的速度在增長，其中一半以上致聾的病因與遺傳因素有關(guān)[2]。因此近10年來，遺傳性耳聾的發(fā)病機制研究成為了防聾治聾研究中最重要的內(nèi)容之一。隨著人類基因組計劃的完成，耳聾基因的定位和克隆取得了巨大的進步，研究者們逐步認(rèn)識到耳聾基因在維護聽力健康和導(dǎo)致聽力疾病中的重要性。我國聾病分子流行病學(xué)調(diào)查顯示，GJB2、GJB3、SLC26A4、線粒體基因突變是造成中國人耳聾的主要遺傳致病因素[3-5]。本研究應(yīng)用耳聾基因芯片檢測技術(shù)對河南地區(qū)極重度聽力障礙兒童進行基因檢測，以期探討遺傳性耳聾基因在本地區(qū)的分布規(guī)律，為防聾治聾工作提供一定的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象：從2013年1月至2013年11月到河南省聽力中心就診的擬行人工耳蝸植入的極重度聽力障礙患者中選取，共150例，其中男69例，女81例，年齡從6個月～7歲，平均年齡1.5歲。所有患者家屬均簽署知情同意書。所有患者均排除綜合征性耳聾。

1.2 耳科及聽力學(xué)檢查：所有患者均進行耳科常規(guī)檢查，并在本中心進行完整的聽力學(xué)測試，包括腦干聽覺誘發(fā)電位，40 Hz相關(guān)電位，耳聲發(fā)射，聲阻抗。以雙耳聲阻抗A型曲線或單峰型曲線，耳聲發(fā)射未通過，ABR閾值≥100 dBnHL，40 Hz相關(guān)電位閾值≥100 dBnHL為極重度感音神經(jīng)性耳聾患者選擇標(biāo)準(zhǔn)。所有患者均行顳骨CT軸位平掃及冠位重建，并行MRI內(nèi)耳水成像掃描。

1.3 耳聾基因檢測：所有患者采集靜脈血2～3 mL，應(yīng)用試劑盒提取全血DNA，應(yīng)用晶芯遺傳性耳聾基因芯片檢測試劑盒（北京博奧）對四個常見耳聾相關(guān)基因的9個突變位點進行檢測。

2 結(jié) 果

檢測結(jié)果見表1。150例極重度感音神經(jīng)性耳聾患者中，共檢出耳聾基因突變82例，檢出率為54.67%。其中GJB2檢出41例，檢出率為27.33%；SLC26A4檢出35例，檢出率為23.33%；線粒體 12S rRNA檢出6例，檢出率為4%；GJB3檢出0例。

表1 檢測結(jié)果的比較

3 討論與分析

在造成耳聾的多方面原因中，最主要的是遺傳因素。研究表明，約有50%的耳聾與遺傳因素有密切關(guān)系。以往受檢測條件所限，耳聾病因?qū)W診斷一直是臨床上的難題之一。近年來人類基因組計劃的完成使遺傳性耳聾的病因?qū)W研究取得很大進展。耳聾具有高度的遺傳異質(zhì)性，大量的耳聾相關(guān)基因和位點被不斷地克隆和定位。雖然耳聾相關(guān)基因很多，但絕大部分非綜合征型耳聾的病因很集中，僅包括少數(shù)的幾個基因突變，如GJB2、SLC26A4、mtDNA12srRNA等，這為臨床開展耳聾基因診斷提供了可行性。一項全國范圍的聾病分子流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，中國人群約80%的遺傳性耳聾與4個基因突變密切相關(guān)[4,6]。

對本組150例極重度感音神經(jīng)性耳聾患者進行四個耳聾基因9個常見突變位點的檢測，共檢出基因突變82例，占總體的54.67%，與國內(nèi)的報道相似[7]。這一結(jié)果提示極重度感音神經(jīng)性耳聾患者的常見耳聾基因突變檢出率高，為耳聾基因診斷在臨床中的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。

GJB2基因突變是目前已知的導(dǎo)致遺傳性耳聾發(fā)病的最常見原因。GJB2基因編碼有生理功能的蛋白--連接蛋白（Connexin26，CX26），GJB2基因突變后，經(jīng)過一系列的病理過程，使得K+經(jīng)內(nèi)耳毛細(xì)胞進入內(nèi)耳內(nèi)淋巴液的轉(zhuǎn)運受到影響，進而導(dǎo)致感音神經(jīng)性耳聾[8]。通過基因診斷明確的GJB2耳聾，基本可以排除其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病，提示耳蝸神經(jīng)和聽覺中樞的完整性，由此表明此類患兒接受人工耳蝸植入后聽力語言康復(fù)效果良好，是預(yù)測人工耳蝸手術(shù)效果的一項理想的檢查。

對本組150例極重度感音神經(jīng)性耳聾患者進行GJB2基因4個常見突變位點的檢測，共檢出GJB2基因突變41例，占總體的27.33%，與戴樸等的研究結(jié)果基本一致[9-11]。說明本組極重度耳聾患者中，GJB2基因突變是一個首要病因。

SLC26A4基因編碼有生理功能的蛋白-Pendrin蛋白，后者在內(nèi)耳主要表達在內(nèi)淋巴管、內(nèi)淋巴囊等結(jié)構(gòu)中。SLC26A4 基因突變可以造成兩種臨床表現(xiàn)，一種是Pendred 綜合征，表現(xiàn)為甲狀腺腫大和耳聾；另一種在中國最為常見，患者僅表現(xiàn)為耳聾，顳骨CT檢查可發(fā)現(xiàn)前庭導(dǎo)水管擴大，稱為大前庭導(dǎo)水管綜合征（enlarged vestibular aqueduct syndrome，EVAS）。我國EVAS 占兒童期耳聾發(fā)病比例的20%～28%。目前已明確 EVAS 是常染色體隱性遺傳性疾病，EVAS耳聾患者中SLC26A4 基因突變的檢出率達97%。大前庭導(dǎo)水管綜合征患者一般聽力下降發(fā)病時間比較晚且呈波動性，發(fā)病與病情加重多與導(dǎo)致顱內(nèi)壓升高的誘發(fā)因素有關(guān)，如感冒、頭部外傷等。若能早期發(fā)現(xiàn)該類患者，可以通過向患者和家屬交待該病的危害與預(yù)防措施，正確指導(dǎo)患者在日常生活中的活動，達到一定的防治效果，使得患者的聽力不再繼續(xù)下降，提高患者的生活質(zhì)量和身心健康。

對本組150例極重度感音神經(jīng)性耳聾患者進行SLC26A4基因2個常見突變位點的檢測，共檢出SLC26A4基因突變35例，占總體的23.33%，是本組患者中第2位致聾病因。并經(jīng)顳骨CT檢查發(fā)現(xiàn)其中31例有前庭導(dǎo)水管擴大，基因診斷與顳骨CT檢查的吻合率達到88.57%，可見基因檢測與影像學(xué)診斷結(jié)果高度一致，說明基因診斷技術(shù)是比較可靠的檢查手段。與影像學(xué)檢查方法相比，基因檢測僅需采集患者2 mL外周靜脈血即可進行檢測，不需使用鎮(zhèn)靜劑，患兒不接觸射線，并且基因檢測可以在沒有出現(xiàn)臨床癥狀前做出明確診斷，有利于以后大規(guī)模的耳聾篩查工作開展[7]。

線粒體基因 mtDNA A 1555G與C1494T突變導(dǎo)致的耳聾主要與氨基糖甙類藥物使用有關(guān)。突變攜帶者對氨基糖甙類藥物異常敏感，低劑量使用就會出現(xiàn)耳鳴，甚至嚴(yán)重的聽力下降。由于其遵循母系遺傳方式，即此類突變基因的遺傳只通過女性直接傳給下一代，若母親攜帶此類突變基因，臨床上可提醒其本人和后代絕對要禁止使用氨基糖甙類藥物，避免發(fā)生耳聾。同時在家族中確診1例線粒體基因突變即可指導(dǎo)全家族的用藥，由此阻斷耳聾在家族中繼續(xù)發(fā)生[5,12]。

對本組150例極重度感音神經(jīng)性耳聾患者進行mtDNA12SrRNA 2個常見突變位點的檢測，共檢出mtDNA12SrRNA突變6例（4.00%），并且均為A1555G突變，與戴樸及王秋菊等的研究結(jié)果基本一致[12-15]。提示mtDNA A1555G基因突變在本組的耳聾患者群體中處于高發(fā)水平。

GJB3基因于1998年由夏家輝院士定位并克隆。對本組150例極重度感音神經(jīng)性耳聾患者進行GJB3基因突變位點的檢測，未檢出GJB3基因突變，可能與本研究樣本量不夠大有關(guān)。

由北京博奧生物有限公司研制的耳聾基因芯片，可一次性檢出GJB2、SLC26A4、GJB3和線粒體共4個基因9個位點的突變情況，與傳統(tǒng)的測序法比較，基因芯片具有快速、準(zhǔn)確和低成本的優(yōu)勢，能夠滿足臨床耳聾基因檢測的要求，因而具有廣闊的臨床應(yīng)用前景，缺點是不能發(fā)現(xiàn)新的和少見的突變位點。

本研究通過分析河南地區(qū)極重度耳聾患者相關(guān)耳聾基因突變情況，初步了解了本地區(qū)耳聾患者發(fā)病的分子機制，對在本地區(qū)開展耳聾早期診斷、遺傳咨詢、防聾治聾具有重要指導(dǎo)意義。

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Deafness Gene Chip Testing Results in 150 Cases of Very Severe Sensorineural Deafness

LI Ke-fang
(Department of ENT, the Third Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052 , China)

ObjectiveGenetic testing results analysis of very severe sensorineural deafness patients.Methods150 cases of extremely severepatients with non syndromic deafness, the genetic deafness gene chip kit forgenomic DNA, GJB2, SLC26A4, GJB3 and mtDNA12s rRNA four deaf related gene 9 deafness mutation sites were detected; the temporal CT, inner waterimaging MRI scanning were performed in all patients.ResultsIn 150 cases of severe non syndromic deafness associated mutations were detected,deafness patients accounted for 54.67%; the GJB2 gene mutation in 41 cases(27.33%); SLC26A4 gene mutation in 35 cases (23.33%); mtDNA12s rRNA gene mutation in 6 cases(4%).ConclusionGenetic factors are themain causes of a severe sensorineural deafness patients, GJB2 and SLC26A4 are the main pathogenic gene.

Deafness; Gene; Gene chip

R764

B

1671-8194（2015）02-0038-02