張 羽

（遼寧省遼陽市中心醫(yī)院病理科，遼寧 遼陽 111000）

癌胚抗原、層粘連蛋白陽性表達在胃鏡活檢胃癌診斷中的研究應用

張 羽

（遼寧省遼陽市中心醫(yī)院病理科，遼寧 遼陽 111000）

目的研究分析癌胚抗原（CEA）、層粘連蛋白（LN）在纖維胃鏡活檢黏膜組織中的表達，探討在胃癌發(fā)生、發(fā)展、治療中的作用與臨床意義。方法應用免疫組織化學技術與常規(guī)病理技術相結合，對胃鏡活檢組織內CEA、LN進行檢測。結果CEA、LN在胃癌組織中的表達率分別為97.5%、50%。與其對照組比較P=0.001、P=0.0039。結論檢測CEA、LN可鑒別重度非典型增生與癌，達到盡早期確診胃癌的目的；LN的表達可協(xié)助判斷胃癌的浸潤、轉移、預測預后，為臨床治療提供重要的參考依據(jù)。

胃腫瘤；CEA；LN；免疫組織化學技術；病理診斷

在消化道惡性腫瘤中胃癌是最常見之一。近年來，隨著內鏡的廣泛使用與相應技術的日臻完善，應用纖維胃鏡進行活檢組織檢查、同時采用HE染色與免疫組織化學S-P法相結合，即可早期確診胃癌、合理選擇化療、免疫治療、基因治療，最大限度提高確診率、改善治療效果。筆者對胃鏡活檢胃癌組織中CEA、LN進行了檢測，現(xiàn)將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：選取2012年1月至2013年12月纖維胃鏡標本觀察組80例，男60例，女20例，最大年齡85歲，最小年齡35歲，平均年齡57.3歲。全部病例均經(jīng)纖維胃鏡活檢病理組織學檢查確診為胃癌。其中高分化腺癌20例、中分化腺癌28例、低分化腺癌18例、乳頭狀腺癌6例、黏液腺癌6例、印戒細胞癌2例。80例經(jīng)手術后病理檢查證實術前診斷，診斷依據(jù)（符合）全國2005年診斷標準。設陰性對照（重度非典型增生為對照組：40例），每次設替代（空白）對照與陽性對照。

1.2 實驗方法：①常規(guī)石蠟切片、HE染色；②免疫組織化學超敏S-P法。

1.3 主要試劑：福州邁新生物技術開發(fā)公司售S-P試劑盒與相應第一抗體。①石蠟切片常規(guī)脫蠟增水、PBS洗3×3′。②抗原修復：胰酶、高壓加熱、微波處理，PBS3×3′。③S-P試劑盒中的“A”室溫10 min，封閉阻斷內源性過氧化物酶活性，PBS洗3×3′。④S-P試劑盒中的“B”室溫10 min（非免疫性動物血清）。⑤第一抗體，溫盒內4 ℃過夜，PBS洗3×3′。⑥第二抗體，S-P試劑盒中的“C”室溫下溫盒孵育10 min，PBS洗3×3′。⑦第三抗體，S-P試劑盒中的“D”室溫下10 min，PBS洗3×3′。⑧滴DAB新配液2滴，顯微鏡下觀察3～8 min，自來水洗。⑨蘇木素復染。⑩各級乙醇脫水、干燥、透明，中性樹膠封固。

1.4 S-P法中陽性表達的判定：①DAB分布在腫瘤實質的比例，無（-）、1/10～l/4（+）、1/4～1/2（++）、l/2～3/4（+++）。②陽性細胞數(shù)：無（-）、5%～25%（+）、25%～50%（++）、50%～70%（+++）。③DAB顯色強度：基本無（-）、淡黃色或者較強但少（+）、強、較多呈黃色（++）、強而且多呈棕黃色（+++）。依以上標準綜合判定。

2 結 果

觀察組80例，CEA陽性表達于胞質，其總陽性率為97.5%，3級25%、2級37.5%，3、2級之和62.5%呈強陽性。與對照組相比，有顯著性差異。

80例中，LN陽性表達于腺體基底膜處，呈斷線狀、索條狀、甚至碎片狀，50%缺如，表明在胃癌組織中基底膜結構明顯遭到降解破壞，基底膜結構的是否完整與存在，揭示胃癌的惡性度、轉移與浸潤程度。同時觀察到CEA高陽性表達者，其LN表達下降較明顯，提示CEA與LN表達基本呈負相關。見表1。

表1 兩組患者實驗結果分析

3 討 論

胃癌乃最常見消化道惡性腫瘤之一，甚至其發(fā)病率居全部惡性腫瘤之首。近年來，隨著內鏡的廣泛使用與相應技術的日臻完善，人們采用纖維胃鏡對活檢組織行病理學觀察，部分胃癌可得到確診。但在另一部分活檢標本中對于癌與非典型增生單憑石臘切片HE染色難于判斷。重度非典型增生細胞的形態(tài)與癌細胞相似，在單一的活檢標本上，重度不典型增生與癌很難鑒別，甚至不能鑒別，但對它的準確診斷直接關系到臨床的合理治療。為此，筆者對纖維胃鏡活檢標本同一組織塊進行常規(guī)病理學觀察的同時，運用免疫組化S-P法聯(lián)合檢測胃癌組織中CEA、LN，探討從胃鏡取材組織中盡可能早期確診胃癌，并對胃癌患者的預后判斷及臨床治療提供有效可靠的依據(jù)。

CEA為相對分子質量200 kD的糖蛋白，由胎兒能分泌多糖一蛋白質復合物的腺管上皮細胞合成。偶見于正常成人細胞及良性上皮性腫瘤組織。而在許多癌組織，尤其胃腸道癌、胰腺癌中則大量表達。由于該抗原可由腫瘤細胞分泌于血液之中，因此可作為腫瘤治療與微轉移以及復發(fā)的檢測物[1-3]。梁廷波等曾采用免疫組化ABC法檢測了41例胃癌及其不同距離癌旁黏膜中CEA的表達，結果胃癌組織內CEA 100%表達陽性，癌旁2、5 cm處分別為40%、26%[4-5]。本組觀察結果：與國內相關文獻報道相符合，觀察組計80例，CEA在胃癌組織陽性表達78例（97.5%），其中僅2例陰性、陰性表達為++30例、+++20例，強陽性表達計50例（62.5%）。而在對照組重度非典型性增生40例中，CEA陽性表達僅8例，且表達強度均為（+）。通過實驗又一次證明了CEA在胃癌組織中的定位表達，不僅敏感度高，而且特異性較強，是胃癌細胞的良好標志物。

腫瘤轉移是一個復雜的多步驟過程，可分為4個階段：①腫瘤從原發(fā)灶脫離；②降解基底膜、向外浸潤、遷移并黏附于血管內皮細胞；③進入循環(huán)系統(tǒng)，隨著血液到達并停留于遠處血管壁；④穿過血管，侵入細胞外基質。最后在特定的組織器官內形成轉移灶。顯然，胃癌組織中基底膜構成則至關重要。層粘連蛋白（LN）是細胞外基底膜的主要組成部分，分布于基底膜和細胞外基質，通過與其受體（LN-R）結合調節(jié)細胞的黏附、擴散、轉移與增殖。張林等采用S-P法檢測51例胃癌中LN表達，其陽性率為41.2%[6-7]。在我們的實驗中，胃癌觀察組80例、40例（50%）陰性，陽性表達+～++）為40例，定位表達不是缺如就是表達強度低，32例（+），基本為碎片狀分布，在重度非典型性增生對照組，陰性只有6例34例（85%）陽性表達，且其中24例（60%）強陽性（++～+++）表達。同時，它們的陽性顆粒多定位于基底膜處，呈圍管狀連續(xù)線樣排列。兩組之間表達明顯差別與分布形式的迥異，證明胃癌組織中LN的陽性表達較重度非典型性增生遠遠為低，即胃癌中LN陽性表達少或缺如，意味著基底膜被降解破壞，腫瘤易于浸潤、擴散轉移。同時還發(fā)現(xiàn)，低分化腺癌病例活檢組織內LN陽性表達遠遠低于高分化腺癌；低分化腺癌組織中LN的陽性表達多呈顆粒、碎片狀，而高分化腺癌內則多為斷續(xù)線狀，偶見連續(xù)線狀分布。胃癌組織中LN陽性表達量的差異與分布形式的不同，提示胃癌細胞的分化程度與其浸潤轉移的能力也呈負相關[8-10]。觀察組LN表達陰性的40例，均應在配合手術治療、化療的同時，選擇使用抗腫瘤轉移新藥：包括抗癌細胞黏附、抗基底膜降解等。

綜上所述，對纖維胃鏡活檢胃黏膜組織，即同一病例、同一部位，同時常規(guī)石蠟切片免疫組織化學、HE染色兩種方法檢測CEA、LN的表達，首先可以通過這一最簡便易行的分子生物學方法，鑒別重度非典型增生與癌，盡早確診胃癌；其次，通過檢測LN除進一步證實胃癌的診斷，還可預測腫瘤細胞被黏附，基底膜被降解的程度，了解腫瘤發(fā)生浸潤、轉移的可能性；特別重要的是，觀察LN在胃癌組織的表達，可指導在手術治療的基礎上，輔以：①常規(guī)化療藥物治療；②免疫治療；③配合使用抗腫瘤轉移新藥；例如阻止腫瘤血管形成、抗黏附、抗基底膜被降解藥等，借以提高綜合治療效果、降低復發(fā)轉移率、提高生存率，改善胃癌患者的生活質量。

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1671-8194（2015）04-0138-02