Src同源2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白和環(huán)氧化酶-2在大腸癌組織中的表達(dá)及意義

宮健劉石張博李雪松張慧宇陳爾東王明濤李曉紅張曉明

(齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院,黑龍江齊齊哈爾161000)

摘要〔〕目的探討Src 同源 2 結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白(Shc)和環(huán)氧化酶(COX)-2在大腸癌的表達(dá)及意義。方法選擇2010年1月至2013年10月在該院收治的資料完整的經(jīng)病理學(xué)確認(rèn)的大腸癌標(biāo)本158例。采用免疫組化發(fā)檢測(cè)大腸癌和癌旁組織的Shc和COX-2表達(dá)。結(jié)果Shc表達(dá)在大腸癌組織中的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，COX-2表達(dá)在大腸癌組織中的細(xì)胞質(zhì)。分化程度越低、浸潤(rùn)越深、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的Shc和COX-2表達(dá)均有差異(P<0.05)，不同性別、TNM分期Shc和COX-2表達(dá)無(wú)差異(P>0.05)，Shc在年齡較高者表達(dá)較高 (P>0.05)，Shc和COX-2呈正相關(guān)(r=0.52，P<0.05)。結(jié)論Shc與COX-2可能通過(guò)某種機(jī)制相互促進(jìn)功能，共同參與大腸癌的發(fā)生發(fā)展。

關(guān)鍵詞〔〕Src同源2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白；環(huán)氧化酶-2；大腸癌

中圖分類(lèi)號(hào)〔〕R735.3+4〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

基金項(xiàng)目：黑龍江省教育廳2012年度科學(xué)技術(shù)研究(面上)項(xiàng)目計(jì)劃(No.12521618)

通訊作者：劉石(1978-)，女，主治醫(yī)師，博士，主要從事消化道腫瘤研究。

第一作者：宮健(1976-)，男，副主任醫(yī)師,博士,主要從事消化道腫瘤研究。

大腸癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制較復(fù)雜。Src 同源 2 結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白(Shc)和環(huán)氧化酶-2(COX-2)可能參與腫瘤發(fā)生〔1,2〕，Shc作為一種細(xì)胞質(zhì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)器，將炎癥、分化、增殖和腫瘤形成的信號(hào)傳遞至下游效應(yīng)器，COX-2可抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移。文旨在探討大腸癌的Shc和COX-2表達(dá)和意義，為大腸癌的治療提供參考。

1對(duì)象與方法

1.1對(duì)象選擇2010年1月至2013年12月在我院收治的資料完整的經(jīng)病理學(xué)確認(rèn)的原發(fā)性大腸癌標(biāo)本158例，所有患者治療前均未接受過(guò)放化療且未合并其他原發(fā)性腫瘤。大腸癌病人的一般情況見(jiàn)表1。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1標(biāo)本保存和免疫組化技術(shù)檢測(cè)選取新鮮冰凍組織，石蠟包埋、切片，按免疫組化試劑盒的說(shuō)明，分別滴加Shc抗體(購(gòu)于Santa Cruz,USA)稀釋液和COX-2抗體(購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司)，4℃孵育過(guò)夜，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗，分別滴加生物素標(biāo)記羊抗兔的二抗IgG 37℃，孵育30 min，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，陰性對(duì)照組使用PBS代替一抗反應(yīng)，染色后200倍顯微鏡下觀察。

1.2.2指標(biāo)判斷采用半定量積分法判定染色結(jié)果，0分：≤5%，1分：6%~25%，2分：26%~50%，3分：51%~75%，4分：>75%，0分：無(wú)著色，1分：淺黃色，2分：黃色，3分：棕黃色。染色強(qiáng)度陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，“-”：0分，“+”：1~4分，“”：5~8分，“”：9~12分。由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師獨(dú)立對(duì)免疫組化染色結(jié)果分別進(jìn)行評(píng)分，取均值為該病例的終評(píng)分。

2結(jié)果

2.1Shc和COX-2在大腸癌組織和癌旁組織的表達(dá)Shc表達(dá)陽(yáng)性呈棕色顆粒狀，位于大腸癌組織中的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。與癌旁組織相比，Shc在大腸癌組織的表達(dá)較強(qiáng)(P<0.05)；COX-2表達(dá)陽(yáng)性呈黃色顆粒，位于大腸癌組織中的細(xì)胞質(zhì)，與癌旁組織比較，COX-2在大腸癌組織的表達(dá)較強(qiáng)(P<0.05)，見(jiàn)圖1。

2.2大腸癌病人的一般病理資料與Shc和COX-2表達(dá)的關(guān)系分化程度越低、浸潤(rùn)越深、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的Shc和COX-2表達(dá)均有差異(P<0.05)，不同性別、TNM分期Shc和COX-2表達(dá)無(wú)差異(P>0.05)，Shc在年齡較高者表達(dá)較高 (P>0.05)，見(jiàn)表1。

2.3Shc和COX-2在大腸癌組織表達(dá)的的相關(guān)性Shc陽(yáng)性132例中122例COX-2呈陽(yáng)性表達(dá)，Shc陰性26例中18例COX-2呈陰性表達(dá)，Spearman相關(guān)性分析顯示，Shc和COX-2呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.52，P<0.05)。

圖1　Shc和COX-2在大腸癌組織和癌旁組織的表達(dá)(×200)

參數(shù)n(%)Shc-+χ2值P值COX-2-+χ2值P值年齡(歲) ≥5084(53.2)62052619.3<0.0510482426.2>0.05 <5074(46.8)20243001834220性別 男118(74.7)16326644.1>0.0520603621.3>0.05 女40(25.3)1012162822100分化程度 高20(12.7)6102227.6<0.051082028.7<0.05 中70(44.3)16203221440142 低68(43.0)414482434300TNM分期 Ⅱ78(49.4)10253946.2>0.0510442224.9>0.05 Ⅲ52(32.9)8142821224160 Ⅳ28(17.7)8515061480浸潤(rùn)深度 黏膜層0(0.0)000021.1<0.05000021.9<0.05 肌層90(57.0)24244202450160 漿膜層68(43.0)220406432302遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移 是28(17.7)6412631.2<0.052420232.2<0.05 否130(82.3)20407002678260淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 是88(55.7)83044621.7<0.0584236220.1<0.05 否70(44.3)18361602040100

3討論

Shc與大腸癌的關(guān)系：(1)Shc作為銜接分子能夠激活Raf和MAPK信號(hào)通路，起到調(diào)控淋巴細(xì)胞活化的作用，在惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)化及侵襲進(jìn)程密切相關(guān)〔3〕，另外，Shc與生長(zhǎng)因子受體蛋白(Grb)2耦聯(lián)，激活受體蛋白酪氨酸激酶，從而進(jìn)一步將信號(hào)傳遞給下游效應(yīng)器，如炎癥、分化、增殖。(2)Shc Tyr239/240位點(diǎn)磷酸化引起Rho-GTPase依賴的細(xì)胞骨架的重新組織，導(dǎo)致細(xì)胞能動(dòng)性增強(qiáng)。(3)Shc基因座在進(jìn)化上高度保守，編碼3 種重疊蛋白，分子量分別為52、46和66 kD(p52Shc、p46Shc 和p66Shc)，p52Shc和p46Shc基因均定位于1q21染色體上，此染色體區(qū)域與許多人類(lèi)腫瘤的增殖相關(guān)聯(lián)〔4〕。(4)Shc參與介導(dǎo)了由載體激素調(diào)控的細(xì)胞增殖和癌變過(guò)程中的絡(luò)氨酸磷酸化信號(hào)與甾體信號(hào)之間的交互作用，Shc可感受應(yīng)激上調(diào)細(xì)胞內(nèi)活性氧簇(ROS)，ROS升高又可誘導(dǎo)Shc位點(diǎn)磷酸化，進(jìn)一步促進(jìn)ROS產(chǎn)生，導(dǎo)致細(xì)胞增殖，移行甚至凋亡〔5〕?？梢?jiàn)Shc蛋白表達(dá)參與大腸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，對(duì)大腸癌的治療方案和預(yù)后判斷具有重要作用〔6〕。

COX-2是完整的膜結(jié)合誘導(dǎo)型蛋白，是哺乳動(dòng)物體內(nèi)花生四烯酸合成前列腺素的限速酶，在正常組織中不表達(dá)或弱表達(dá)，但在多種腫瘤中表達(dá)較強(qiáng)，尤其在消化系統(tǒng)腫瘤中研究較多，雖然COX-2與腫瘤的確切機(jī)制尚不明確，但有研究顯示：(1)COX-2可上調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)，VEGF表達(dá)增高可增加微血管的通透性，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖和遷移，誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)腫瘤血管形成。(2)COX-2可促進(jìn)前列腺素(E2)和組胺增加，誘導(dǎo)白細(xì)胞介素(IL)-10表達(dá)，抑制腫瘤壞死因子(TNF)-α和IL-12產(chǎn)生，使機(jī)體免疫監(jiān)控能力降低，降低細(xì)胞殺傷能力，有利于腫瘤發(fā)生。(3)COX-2可促進(jìn)細(xì)胞中膜金屬蛋白酶(MMP)-2、尿激酶纖溶酶原激活物(μpa)和膜型金屬蛋白酶(MT-MMP)1的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移〔7~9〕。

Shc與COX-2的關(guān)系較為復(fù)雜。研究顯示，磷酸酶和張力蛋白同源物(PTEN)為腫瘤抑制基因，Shc表達(dá)與PTEN呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，CCRCC 細(xì)胞中 PTEN 通過(guò)其蛋白磷酸酶活性使 Shc 脫磷酸調(diào)控細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)，當(dāng)CCRCC 細(xì)胞轉(zhuǎn)染PTEN 表達(dá)質(zhì)粒，Shc表達(dá)下調(diào)，但轉(zhuǎn)染磷酸酶活性缺失的 PTEN，Shc表達(dá)無(wú)變化，說(shuō)明PTEN抑制細(xì)胞遷移通過(guò)抑制Shc 磷酸化達(dá)到的。COX-2表達(dá)與PTEN呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，PTEN可通過(guò)調(diào)控Akt的表達(dá)而影響COX-2的表達(dá)，在PTEN突變的細(xì)胞中，Akt磷酸化水平較高的細(xì)胞COX-2表達(dá)較高，PTEN轉(zhuǎn)染能抑制Akt磷酸化載體，下調(diào)COX-2表達(dá)〔10,11〕。

綜上所述，相比于癌旁組織，Shc與COX-2在大腸癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，Shc與COX-2在大腸癌的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，但Shc與COX-2均為具有腫瘤抑制作用的PTEN下游蛋白，目前證據(jù)尚不能證明兩者具有因果關(guān)系，可能通過(guò)某種機(jī)制共同參與大腸癌的發(fā)生發(fā)展，Shc與COX-2的關(guān)系有待進(jìn)一步的研究。

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〔2014-04-12修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)