聯(lián)合檢測VEGF、OPN對原發(fā)性肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的意義*

*基金項目：湖北省自然科學基金項目(2012FFC116)

王代宏，王偉，王芳元

(咸寧市中心醫(yī)院肝膽胰外科，湖北 咸寧 437100)

摘要：目的 探討聯(lián)合檢測血清血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和骨橋蛋白(OPN)的表達水平在預(yù)測原發(fā)性肝細胞癌(HCC)患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移以及生存中的臨床價值。方法 應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測54例HCC患者術(shù)前外周血中VEGF和OPN的濃度，并與肝癌臨床病理特征做相關(guān)分析，分析其表達水平與患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 HCC復(fù)發(fā)患者的外周血中VEGF和OPN表達水平明顯高于無復(fù)發(fā)患者(P<0.01)。VEGF和OPN表達水平與腫瘤分化程度、包膜是否完整、血管侵犯、肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)呈顯著相關(guān)性(P<0.05)；VEGF和OPN高表達組患者的復(fù)發(fā)率較低表達組患者明顯增加，平均生存時間和無瘤生存時間明顯縮短，VEGF和OPN兩者水平均高和均低的患者術(shù)后2年復(fù)發(fā)率分別為81.8%和26.3%(P<0.01)，2年生存率分別為36.4%和78.9%(P<0.01)，2年無瘤生存率分別為9.1%和68.4%(P<0.01)。結(jié)論 外周血中VEGF和OPN與肝癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)，聯(lián)合檢測外周血中VEGF和OPN的濃度可以預(yù)測復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后風險的患者。

關(guān)鍵詞：原發(fā)性肝癌；復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移；預(yù)后；血管內(nèi)皮生長因子；骨橋蛋白

中圖分類號：R735.7

文獻標識碼：A

文章編號：2095-4646(2015)04-0280-04

ABSTRACT：Objective To investigate the predictive value of preoperative serum levels of vascular endothelial growth factor (VEGF) and osteopontin (OPN) for metastasis，recurrence and prognosis of patients after resection of hepatocellular carcinoma (HCC). Methods A total of 54 patients received liver resection for HCC from January 2010 to November 2012 in our institute were enrolled in this study.The preoperative serum VEGF and OPN levels were detected by ELISA，the relationship between VEGF,OPN expression and the pathological characteristics，the recurrence and prognosis of HCC was studied.Results The expression of OPN and VEGF in HCC was related to tumor differentiation，tumor surrounding integrity，vaseular invasion，early recurrence and metastasis(P<0.05).A higher VEGF and OPN levels were found in plasma of patients with recurrence during the follow-up time than those of patientswithout recurrence.A significant difference of overall survival (OS)and disease free survival(DFS) was found in different subgroups with higher or lower level of VEGF，and a similar situation was found in patients with high or OPN level.The 2-year recurrence rate of the patients with higher and lower levels of both VEGF and OPN were 81.8% and 26.3% (P<0.01)，respectively，the 2-year OS rate was 36.4% and 78.9%，and the 2-year DFS rate was 9.1% and 68.4%，respectively (P<0.01).Conclusion The evaluation of preoperative serum VEGF or OPN levels may be helpful to predict the recurrence and prognosis of HCC patients in advance.The assessment of VEGF level in combination with OPN could screen patients with different potentials of HCC recurrence and different outcomes more accurately than VEGF or OPN alone.

收稿日期：(2015-02-20)

The Recurrent and Prognostic Significance of Preoperative

Serum Levels of VEGF and OPN for Patients after

Resection with Hepatocellular Carcinoma

WANG Dai-hong，WANG Wei， WANG Fang-yuan

(DepartmentofGeneralSurgery，XianningCentralHospital，XianningHubei437100，China)

KEY WORDS：Hepatocellular carcinoma;Recurrence;Prognosis;Vascular endothelial growth factor;Osteopontin

原發(fā)性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是治療失敗的主要原因，尋求早期預(yù)測復(fù)發(fā)和預(yù)后的有效指標是延長生存期的重要手段之一。甲胎蛋白(AFP)是診斷肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)最常用的檢測標志物，但仍有少部份的肝癌患者血清AFP呈陰性或低濃度，采取多種腫瘤標志物聯(lián)合檢測可以提高診斷率。研究表明血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一種特異促進血管內(nèi)皮細胞增殖的細胞因子，它的高表達與腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系[1]；骨橋蛋白(OPN)是一種分泌性磷酸糖蛋白，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移及血管生成等病理過程中起作用[2]。我們聯(lián)合檢測術(shù)前患者血液VEGF和OPN含量，并與肝癌臨床病理特征做相關(guān)分析，探討影響HCC術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的相關(guān)危險因素及聯(lián)合檢測對肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的臨床應(yīng)用意義。

1資料與方法

1.1臨床資料收集本院普外科2010年1月至2012年11月間實施肝癌根治性切除術(shù)并經(jīng)術(shù)后病理診斷證實為肝細胞癌且有完整隨訪資料的患者，術(shù)前均未接受過放化療、中藥及生物免疫治療等。排除標準：圍手術(shù)期出現(xiàn)嚴重的并發(fā)癥或死亡的病例、膽管細胞癌患者；隨訪中因非肝癌因素死亡的病例。共入組54例，隨訪至2014年11月，隨訪時間24~47月。其中男45例，女9例，年齡19～71歲(中位年齡52.6歲)。Child A級47例，B級7例。肝切除術(shù)式為左右半肝切除29例、肝段切除7例、左三葉切除1例、局部肝切除共17例。術(shù)后出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的時間最短4個月，最長47個月。隨訪期間內(nèi)26例肝內(nèi)復(fù)發(fā)，2例肺轉(zhuǎn)移，1例骨轉(zhuǎn)移，25例無瘤生存。

1.2酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定血清VEGF及OPN濃度所有患者術(shù)前抽取肘靜脈血6ml，置于無菌促凝管內(nèi)，離心后取上清分裝于EP管，置于-70℃低溫冰箱保存?zhèn)溆?。采用人VEGFELISA定量試劑盒(美國R&D公司)及OPNELISA試劑盒(深圳晶美生物工程公司)，實驗過程按照試劑盒說明進行，標準品均雙孔檢測，血清VEGF和OPN濃度直接從標準曲線查得。全部標本統(tǒng)一檢測，每例標本共檢測3次取加權(quán)平均值。操作者、收集標本及隨訪資料者遵循隨機、雙盲原則。

1.3統(tǒng)計學方法統(tǒng)計分析使用SPSS 16.5軟件。計量資料的分析采用t檢驗；相關(guān)性分析使用雙變量相關(guān)分析；采用Kaplan-Meier法進行生存分析。P<0.05認為差異有顯著性意義。

2結(jié)果

2.1血清VEGF及OPN濃度和術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系隨訪期間29例復(fù)發(fā)組血清VEGF及血漿OPN濃度明顯升高，與25例無復(fù)發(fā)組比較，兩組間存在顯著性差異(P<0.05)，見表1。

表1　血清VEGF及OPN濃度和術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系

與無復(fù)發(fā)組比較，*P<0.05

2.2影響肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)危險因素的分析通過多因素相關(guān)分析VEGF、OPN與臨床病理特征之間的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)VEGF、OPN與患者的年齡、性別、HBV、肝硬化、腫瘤的大小、分級、是否多發(fā)無顯著相關(guān),與腫瘤分化程度、血管侵犯、包膜是否完整及肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移呈顯著相關(guān)(P<0.05)，見表2。

表2　VEGF、OPN與患者臨床病理特征之間的關(guān)系

與相同病理特征的其他組比較，*P<0.05

2.3血清VEGF及OPN濃度與肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系將VEGF以400ng/L為界分為高(18例)、低濃度組(36例)；OPN以200ng/ml為界分為高(21例)、低濃度組(33例)，比較二者與術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系。結(jié)果顯示,血清VEGF高濃度組患者的術(shù)后2年復(fù)發(fā)率明顯高于低濃度組患者(P<0.05)；血漿OPN高濃度組患者的術(shù)后2年復(fù)發(fā)率也明顯高于低濃度組患者(P<0.05)，見表3。

表3　血清VEGF及OPN濃度高濃度組和低濃度組患者術(shù)后2年復(fù)發(fā)率比較

與高濃度組比較,*P<0.05

2.4血清VEGF及OPN濃度與肝癌患者預(yù)后的關(guān)系比較VEGF和OPN高、低濃度組的2年總生存率和無瘤生存率，結(jié)果高濃度組明顯低于低濃度組(P<0.05)，見表4、5。

表4　血清VEGF及血漿OPN高濃度組和低濃度組患者術(shù)后2年總生存率比較

與高濃度組比較,*P<0.05

表5　血清VEGF及血漿OPN高濃度組和低濃度組患者術(shù)后2年無瘤生存率比較

與高濃度組比較,*P<0.05，**P<0.01

2.5聯(lián)合應(yīng)用VEGF和OPN篩選高、低風險患者高濃度者(11例)與低濃度者(19例)的術(shù)后2年復(fù)發(fā)率分別為81.8%和26.3%(P<0.05)，2年生存率36.4%和78.9%(P<0.05)，平均生存時間分別為446d和762d(P<0.05)；2年無瘤生存率分別為9.1%和68.4%(P<0.05)，平均無瘤生存時間分別為213d和608d(P<0.05)(圖1)。

X1：VEGF和OPN均呈低濃度患者；X2：VEGF和OPN均呈高濃度患者

圖1VEGF和OPN聯(lián)合檢測預(yù)測肝癌術(shù)后患者總體生存曲線

3討論

肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是一個多步驟、多環(huán)節(jié)的復(fù)雜過程，目前認為多種基因及其功能蛋白的異常表達以及細胞因子、血管因素等都參與了肝癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，這些因素在其中相互作用，形成一個復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)[3]。VEGF在腫瘤血管生長中起重要作用，通過與VEGF受體結(jié)合，引起血管增殖[4]。易述紅等[5]認為術(shù)前VEGFmRNA陽性表達和術(shù)后持續(xù)的VEGFmRNA陽性可以有效地預(yù)測肝癌肝移植術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。OPN通過促進細胞增殖、運動，影響細胞外基質(zhì)，降低細胞黏附等促進腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移。腫瘤發(fā)生時OPN表達明顯上調(diào)，其表達水平還與腫瘤的惡性程度、病理分期及預(yù)后相關(guān)[6]，因此可作為腫瘤潛在的診斷和預(yù)后的分子標志物。

本研究發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)組血清VEGF及OPN濃度較無復(fù)發(fā)組明顯升高，同時對肝癌手術(shù)切除前血清VEGF及OPN濃度與術(shù)后復(fù)發(fā)風險做了分析，發(fā)現(xiàn)VEGF和OPN水平可預(yù)測腫瘤的復(fù)發(fā)，VEGF和OPN高濃度組復(fù)發(fā)率高于低濃度組，因此我們認為VEGF和OPN水平可以作為預(yù)測肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的潛在參考分子指標。通過對VEGF和OPN與肝癌臨床病理特征及手術(shù)情況之間的分析發(fā)現(xiàn)，血清VEGF含量及OPN濃度與肝癌患者的年齡、性別、HBV、HCV、AFP、肝硬化史、家族史、腫瘤的大小、是否多發(fā)無顯著相關(guān)，而與腫瘤分化程度、血管侵犯、包膜是否完整、肝癌早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移呈顯著相關(guān)。這些都提示OPN與VEGF在肝癌的早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中起著重要的作用，OPN有可能通過VEGF促進腫瘤的血管生成，并在腫瘤的早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中進一步發(fā)揮作用。

臨床資料顯示大HCC切除后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率高于小HCC，但有的小HCC雖然切緣干凈、包膜完整、無癌栓及肝內(nèi)播散，卻早期復(fù)發(fā)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雖然VEGF和OPN在大、小HCC患者血清中水平差異無顯著性，但大HCC患者血清VEGF和OPN水平高于小HCC的趨勢非常明顯。這間接提示VEGF和OPN作為HCC術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移預(yù)測指標有可能反映HCC侵襲轉(zhuǎn)移的生物學行為。因此，術(shù)前外周血VEGF和OPN水平可能是一個較靈敏的HCC術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的預(yù)測指標。以單個指標分組來比較不同表達水平患者的生存預(yù)后，發(fā)現(xiàn)VEGF或OPN高表達組患者的術(shù)后生存時間(率)或無瘤生存時間(率)均明顯低于相對應(yīng)的低表達組患者，即VEGF和OPN都與患者術(shù)后生存或無瘤生存有關(guān)。

為進一步提高預(yù)測的準確性，本研究探索VEGF和OPN兩者聯(lián)合檢測的預(yù)測模式，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合應(yīng)用VEGF和OPN可以更加準確地區(qū)分復(fù)發(fā)風險及預(yù)后狀況不同的患者。VEGF或OPN單獨應(yīng)用時，相應(yīng)的高表達組患者和低表達組患者的2年復(fù)發(fā)率分別為83.3%、76.2%和38.9%、39.4%，2年生存率為38.9%、42.8%和75.0%、75.8%，2年無瘤生存率為22.2%、23.8%和58.3%、60.6%。而將VEGF和OPN聯(lián)合應(yīng)用后，相應(yīng)的預(yù)期高風險患者和低風險患者的2年復(fù)發(fā)率為81.8%和26.3%，2年生存率為36.4%和78.9%，2年無瘤生存率為9.1%和68.4%，可以較為準確地篩選出具有較高復(fù)發(fā)及生存風險的患者，提示VEGF和OPN聯(lián)合檢測可進一步提高預(yù)測的準確性。

肝癌術(shù)后易于復(fù)發(fā)是肝癌的生物學特性之一，其早期復(fù)發(fā)是由多種因素決定的。本研究結(jié)果表明，外周血中VEGF和OPN水平與HCC患者術(shù)后復(fù)發(fā)和生存有關(guān)，兩者聯(lián)合檢測可進一步提高預(yù)測效能。對于存在術(shù)后早期復(fù)發(fā)高危因素的患者，應(yīng)加強隨訪，及早發(fā)現(xiàn)腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，以便提供再次治療的機會，從而改善患者預(yù)后。

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