燙傷藥水噴霧劑促進大鼠燙傷愈合實驗研究※

張星馬朝群△

(南京中醫(yī)藥大學2012級碩士研究生，江蘇南京210023)

【摘要】目的觀察燙傷藥水噴霧劑對大鼠燙傷創(chuàng)面愈合的影響。方法將150只淺Ⅱ度燙傷SD大鼠模型隨機分為5組，即實驗高、中、低劑量組(燙傷藥水噴霧劑)，陽性對照組(磺胺嘧啶銀軟膏)，陰性對照組(基質軟膏)，每組各30只。5組大鼠制備淺Ⅱ度燙傷模型后，陰性對照組予基質軟膏外涂，剩余4組分別予相應藥物外涂或外噴。于燙傷后第2、7、14 d隨機取各組大鼠各10只，計算創(chuàng)面愈合率；第1、2、3 d隨機取各組大鼠各10只，截取創(chuàng)面皮膚，計算組織含水量；第5、10、15 d 8：00取各組剩余10只大鼠，計算大鼠新生毛細血管生長情況。結果第2、7、14 d實驗中劑量組及陽性對照組創(chuàng)面愈合率高于陰性對照組同期(P<0.01)，第7、14 d實驗高劑量組創(chuàng)面愈合率高于陰性對照組同期(P<0.01)，第2、7 d實驗低劑量組創(chuàng)面愈合率高于陰性對照組同期(P<0.05)；第1、2、3 d實驗中劑量組及陽性對照組創(chuàng)面組織含水量均低于陰性對照組同期(P<0.01，P<0.05)，第1、2 d實驗高、低劑量組創(chuàng)面組織含水量低于陰性對照組同期(P<0.05)。第5、10、15 d實驗高、中劑量組及陽性對照組創(chuàng)面組織新生毛細血管數(shù)均高于陰性對照組同期(P<0.05，P<0.01)。結論燙傷藥水噴霧劑具有減少燙傷組織水腫，促進大鼠創(chuàng)面愈合的良好作用。

【關鍵詞】大鼠；疾病模型，動物；傷口愈合；燒傷；外用藥；中藥療法

doi：10.3969/j.issn.1002-2619.2015.06.026

【中圖分類號】R-332；R64；R644.053.1

【文獻標識碼】A

【文章編號】1002-2619(2015)06-0871-04

通訊作者：△江蘇省中醫(yī)院普外科，江蘇南京210029

作者簡介：張星(1983—)，男，住院醫(yī)師，碩士研究生在讀，學士。

Abstract【】ObjectiveTo observe the healing effects of scald lotion spray on scalded wound in rats. Methods150 SD rats (shallow Ⅱ degree scald model) were randomly divided into 5 groups：the experimental high-，middle-，low-dose group (scald lotion spray)，positive control group (sulfadiazine silver ointment) and negative control group (matrix ointment)，30 rats in each group. After shallow Ⅱ degree scald modeling，rats in negative control group were received matrix ointment for external use，and rats in other four groups were received corresponding drugs for external use.10 rats were randomly selected in each group，and the wound healing rate was detected on the second，seventh and fourteenth day after scald. 10 rats were randomly selected in each group that removed skin after anesthesia on the first，second and third day of experiment，and the tissue water content was calculated. The remaining 10 rats in each group were selected，and the growth situations of newly born capillaries on skin tissue were observed on the 5，10，15 d at 8 am in order to evaluated the regenerative capacity of scald lotion spray on scald wound healing. ResultsThe wound healing rate in experimental middle-dose group and positive control group was higher than that in negative control group on 2，7，14 d (P<0.01)，the wound healing rate in experimental high-dose group was higher than that in negative control group on 7，14 d (P<0.01)，as well as the esperimental low-dose group on 2，7 d (P<0.05). The tissue water content in experimental middle-dose group and positive control group was lower than that in positive control group on 1，2，3 d (P<0.01，P<0.05)，as well as the experimental high-，low-dose group(P<0.05).The amounts of newborn blood capillary in experimental high-dose，middle-dose and positive group was higher than that in negative group (P<0.05，P<0.01). ConclusionScald lotion spray has good effects on the promoting wound healing in rats involves reduce scalded tissue edema in rats.

收稿日期：(2014-05-19)

※項目來源：江蘇省中醫(yī)藥局科技項目(編號：LZ11023)

研究方向：普外科。

Experimental study of scald lotion spray on the promoting scald wound healing in ratsZHANGXing*，MAChaoqun.*PostgraduateofNanjingTraditionalChineseMedicineUniversity，Classof2012，Jiangsu，Nanjing210023

【Key words】Rat；Disease models；Animal；Wound healing；Burn injury；Traditional Chinese medicine therapy；External application drugs

隨著時代及經濟的發(fā)展，燙傷的發(fā)病率逐年增高，在日常生活中，因意外燙傷引起的皮膚損傷非常多見。治療燙傷的中藥使用廣泛，劑型豐富，并且近些年來在借鑒了西醫(yī)及當代生物科技后，中藥治療燙傷制劑有了大幅度發(fā)展[1-2]。燙傷藥水噴霧劑是江蘇省中醫(yī)院外科臨床常年使用的特色外用藥物，治療小面積燙傷效果良好，適用于臨床常見的小面積Ⅰ、Ⅱ度燙傷。本實驗通過建立大鼠淺Ⅱ度燙傷模型，外噴燙傷藥水噴霧劑，觀察其對促進大鼠燙傷愈合的作用，結果如下。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物SD大鼠(清潔級)150只，雌雄各半，體質量190~220 g，南京中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供，動物合格證號SCXK(浙)2008-0033。

1.1.2實驗儀器恒溫水浴鍋(HH-1A型，J2082，南京環(huán)科實驗儀器有限公司)，數(shù)碼相機(佳能D50)，電子天平(HANG PING牌YP102N型，上海精密儀器有限公司)，冷凍干燥機(北京松源華興科技發(fā)展有限公司)，50 mL噴霧瓶5只。

1.1.3實驗試劑及藥品燙傷藥水噴霧劑(江蘇省中醫(yī)院院內制劑，蘇藥制字Z0400054)，藥物組成為虎杖、地榆、黃連、忍冬藤、大黃、冰片等，以浸漬法、醇提法及水提法等提取相關成分，合并濾液，以適量乙醇溶解冰片，再加入95%乙醇，至測定乙醇濃度為75%，分別制備濃度相當于含生藥10、20、30 g的藥水各500 mL；磺胺嘧啶銀軟膏(每支含1%磺胺嘧啶銀 40 g，廣東恒健制藥有限公司，國藥準字H44020614)；70%酒精 500 mL；10%水合氯醛50 mL；0.9%氯化鈉注射液500 mL 2瓶。

1.2實驗方法

1.2.1大鼠燙傷模型建立首先制作動物固定板，25 cm×20 cm×1.0 cm的木板1塊，在其中心摳出一長軸為7.7 cm，短軸為4.3 cm的標準橢圓型孔備用，橢圓面積26 cm2[1]。150只大鼠飼養(yǎng)1周后，稱體質量，剃毛器脫毛，70%酒精消毒，然后以10%水合氯醛3 mL/kg腹腔注射麻醉后，將制作好的木板覆蓋在去毛后的大鼠背部，恒溫水浴箱溫度設定在75 ℃，將4層無菌紗布浸泡在水浴箱內，10 s后取出，均勻覆蓋在大鼠背部裸露處15 s，用0.9%氯化鈉注射液沖洗，無菌紗布擦干水分[2]，形成淺Ⅱ度燙傷模型(病理切片證實)。

1.2.2動物分組燙傷后30 min將150只大鼠隨機分為5組，即陰性對照組(基質軟膏組)、陽性對照組(磺胺嘧啶銀軟膏組)、實驗低劑量組(相當于含提取液生藥10 g)、實驗中劑量組(相當于含提取液生藥20 g)、實驗高劑量組(相當于含提取液生藥30 g)，分籠飼養(yǎng)。

1.2.3給藥方法陰性對照組予基質軟膏燙傷部位外涂，陽性對照組予磺胺嘧啶銀軟膏燙傷部位外涂，均每日1次，每次每只大鼠約20 mg。實驗高、中、低劑量組分別予相應藥液外噴，3噴，約10 mL，每日1次。

1.3檢測指標及方法

1.3.1創(chuàng)面面積愈合率于燙傷后第2、7、14 d 8：00隨機取各組各大鼠10只，固定，裸露燙傷創(chuàng)面，以相同焦距、相同距離，用數(shù)碼相機拍攝創(chuàng)面，并輔以ImageJ軟件，計算燙傷創(chuàng)面面積，并予以記錄，然后按公式計算創(chuàng)面愈合率。創(chuàng)面愈合率=[(原始創(chuàng)面面積-未愈合創(chuàng)面面積)/原始創(chuàng)面面積]×100%。

1.3.2創(chuàng)面組織含水量于燙傷后第1、2、3 d 8：00隨機取各組各大鼠10只，以10%水合氯醛3 mL/kg腹腔注射麻醉后，截取1.5 cm×1.5 cm創(chuàng)面皮膚，每次取2塊，電子天平稱質量，后將其干燥后再稱質量，計算組織含水量。

1.3.3新生毛細血管觀察于燙傷后第5、10、15 d 8：00取各組剩余10只大鼠，以10%水合氯醛3 mL/kg腹腔注射麻醉后，截取1.5 cm×1.5 cm創(chuàng)面皮膚，每次取2塊，固定于4%甲醛溶液，24 h后用酒精逐級脫水，二甲苯透明2次，石蠟包埋切片，蘇木精—伊紅(HE)染色，病理圖文分析系統(tǒng)計算各組大鼠新生毛細血管生長情況。

2結果

2.15組大鼠創(chuàng)面愈合率比較見表1。

由表1可見，第2、7、14 d實驗中劑量組及陽性對照組創(chuàng)面愈合率高于陰性對照組同期(P<0.01)，第7、14 d實驗高劑量組創(chuàng)面愈合率高于陰性對照組同期(P<0.01)，第2、7 d實驗低劑量組創(chuàng)面愈合率高于陰性對照組同期(P<0.05)。實驗高、中、低劑量組創(chuàng)面愈合率與陽性對照組同期比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。第2 d實驗中劑量組創(chuàng)面愈合率高于實驗高劑量組同期(P<0.01)，實驗中劑量組與低劑量組同

表1　5組大鼠創(chuàng)面愈合率比較　 ± s

期比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，實驗低劑量組創(chuàng)面愈合率與高劑量組同期比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；第7 d實驗高、中、低劑量組創(chuàng)面愈合率同期比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；第14 d實驗中劑量組創(chuàng)面愈合率高于實驗高劑量組和低劑量組同期(P<0.01)，實驗高劑量組與低劑量組同期比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.25組大鼠創(chuàng)面組織含水量比較見表2。

表2　5組大鼠創(chuàng)面組織含水量比較　 ± s

由表2可見，第1、2、3 d實驗中劑量組及陽性對照組創(chuàng)面組織含水量均低于陰性對照組同期(P<0.01，P<0.05)，第1、2 d實驗高、低劑量組創(chuàng)面組織含水量低于陰性對照組同期(P<0.05)。實驗高、中、低劑量組創(chuàng)面組織含水量與陽性對照組同期比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。第1、2、3 d實驗高、中、低劑量組創(chuàng)面組織含水量比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.35組大鼠創(chuàng)面組織新生毛細血管數(shù)比較見表3。

表3　5組大鼠創(chuàng)面組織新生毛細血管數(shù)比較　條， ± s

由表3可見，第5、10、15 d，實驗高、中劑量組及陽性對照組創(chuàng)面組織新生毛細血管數(shù)均高于陰性對照組同期(P<0.05，P<0.01)，實驗高、中、低劑量組創(chuàng)面組織新生毛細血管數(shù)與陽性對照組同期比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。第10 d實驗高劑量組及實驗低劑量組創(chuàng)面組織新生毛細血管數(shù)均低于實驗中劑量組(P<0.05)，實驗高劑量組與實驗低劑量組同期比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；第5、15 d實驗高、中、低劑量組創(chuàng)面組織新生毛細血管數(shù)同期比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3討論

燙傷的原因主要包括火焰、熾熱液體和固體化學物質等致傷因素，屬中醫(yī)學“不內外因”范疇[3-5]。中醫(yī)學認為，燙傷乃由火毒傷肌膚，氣滯水阻血瘀，傷處紅腫熱痛，可見水皰[6]。燙傷藥水噴霧劑方中虎杖清熱解毒，散瘀止痛，易收斂，為君藥。地榆涼血止血，解毒斂瘡；忍冬藤清熱疏風，通絡止痛；大黃、黃連清熱瀉火，涼血解毒，逐瘀活血，均為臣藥。冰片清熱止痛，止癢防腐，為佐使。

現(xiàn)代醫(yī)學認為，創(chuàng)面愈合是機體修復各種損傷造成的組織缺失，通過再生及修復等手段，以恢復機體組織結構及功能完整性的過程。順利完成愈合過程的基礎是多種愈合相關細胞生物學功能的正常發(fā)揮，并依賴細胞、細胞外基質及生長因子和細胞因子在內的可溶性介質之間的相互作用[7]。本研究結果顯示，第2、7、14 d燙傷藥水噴霧劑能顯著提高大鼠創(chuàng)面愈合率，但與陽性對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。第2 d實驗中劑量組創(chuàng)面愈合率高于實驗高劑量組同期(P<0.01)，實驗中劑量組與低劑量組同期比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，實驗低劑量組創(chuàng)面愈合率與高劑量組同期比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；第7 d實驗高、中、低劑量組創(chuàng)面愈合率同期比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；第14 d實驗中劑量組創(chuàng)面愈合率高于實驗高劑量組和低劑量組同期(P<0.01)，實驗高劑量組與低劑量組同期比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

燙傷早期滲出，凝固性壞死組織周圍的受損皮膚組織局部血管擴張、血流增加、流速減慢，同時在炎癥介質作用下血管通透性增高，血液成分外滲。燒傷創(chuàng)面滲出的一個特點是受熱力損壞的變性膠原還可吸附滲出的鈉及水分，使?jié)B出進一步加重，臨床表現(xiàn)為創(chuàng)面腫脹和體液外滲。所以在燙傷早期控制水腫很關鍵，測定組織含水量是評定療效的一個方面。本研究結果顯示，第1、2、3 d燙傷藥水噴霧劑能顯著降低創(chuàng)面組織含水量，減少燙傷創(chuàng)面早期水腫及滲出。第1、2、3 d實驗高、中、低劑量組創(chuàng)面組織含水量比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

機體血管系統(tǒng)的生成可分為血管發(fā)生和血管新生2種不同過程。血管新生是指內皮前體細胞，即成血管細胞分化成內皮細胞，形成原始血管網的過程。血管生成是指從已存在的血管以生芽方式長出新毛細血管的過程。過去人們認為成人血管僅由血管新生來維持和修復，然而循環(huán)中內皮祖細胞的發(fā)現(xiàn)提示出生后也可能存在血管發(fā)生[8]。故測定創(chuàng)面新生毛細血管數(shù)是檢測燙傷修復的一個重要指標。本研究結果顯示，第5、10、15 d 燙傷藥水噴霧劑能顯著增加創(chuàng)面組織新生毛細血管數(shù)，促進創(chuàng)面愈合。第10 d實驗高劑量組及實驗低劑量組創(chuàng)面組織新生毛細血管數(shù)均低于實驗中劑量組(P<0.05)，實驗高劑量組與實驗低劑量組同期比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，第5、15 d實驗高、中、低劑量組創(chuàng)面組織新生毛細血管數(shù)同期比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

現(xiàn)代藥理研究表明，燙傷藥水噴霧劑方中地榆具有良好的止血，抗炎，促進傷口愈合的作用，其中含有的鞣質，可以促進凝血[9]；虎杖對金黃色葡萄球菌等多種細菌均有抑制作用，能促使創(chuàng)面局部收縮型血管轉變?yōu)閿U張型，促進新生毛細血管生成，改善微循環(huán)及周圍組織血供，促進創(chuàng)面愈合[9]。黃連能減輕早期創(chuàng)面炎性滲出[10]；大黃有較強的抗菌作用，抗菌譜廣，其中以大黃酸、大黃素和蘆薈大黃素抗菌作用最強；冰片有良好的揮發(fā)作用，使創(chuàng)面干燥，并具良好的透皮吸收功效，從而減輕燙傷創(chuàng)面早期水腫，用其外敷還可降低體溫，預防毒血癥的發(fā)生[10]。

綜上所述，實驗中劑量組在創(chuàng)面愈合率及新生毛細血管、組織含水量方面療效均優(yōu)于低劑量組及高劑量組。低劑量組可能為藥物濃度偏低，未達到最佳治療濃度，而高劑量組濃度偏高，不良反應系數(shù)增高，如刺激創(chuàng)面，造成滲出過多等。因此,實驗中劑量組最佳。在組織含水量的指標中，隨著時間的推移，2個指標數(shù)值均降低，但實驗高、中、低劑量組的數(shù)值降低更為明顯，以實驗中劑量組為最優(yōu)。新生毛細血管指標中，隨時間推移，數(shù)值均降低，但實驗高、中、低劑量組隨時間推移數(shù)值降低較對照組緩慢，15 d時，數(shù)值仍較高。燙傷藥水噴霧劑可通過減輕燙傷創(chuàng)面早期的水腫及滲出，促進創(chuàng)面組織新生毛細血管生成，從而發(fā)揮其促進燙傷創(chuàng)面愈合、提高愈合率的功效。

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(本文編輯：董軍杰)

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