·論著·

骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制劑在胰腺癌中的表達及其意義

王平郎海波劉心娟李雪樊華賀強張杰

【摘要】目的探討胰腺癌組織中骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制劑(BAMBI)的表達及其臨床意義。方法應用免疫組化方法檢測69例胰腺癌組織和36例癌旁正常胰腺組織中BAMBI的表達，分析其與胰腺癌臨床病理參數和患者生存率的關系。結果胰腺癌組織中BAMBI的陽性表達率明顯高于正常胰腺組織(56.5%比16.7%，P<0.01)。胰腺癌組織BAMBI的表達與患者年齡、性別及腫瘤大小、分化程度無相關性，但淋巴結轉移組BAMBI陽性表達率高于無淋巴結轉移組(67.4%比38.5，P=0.019)，TNM分期Ⅲ期組BAMBI陽性表達率高于Ⅰ+Ⅱ期組(75.0比31.0%，P=0.001)。胰腺癌組織BAMBI陽性患者的中位生存時間為6個月，顯著低于BAMBI陰性組的10個月(P=0.035)。結論 胰腺癌組織高表達BAMBI，BAMBI的高表達與腫瘤淋巴結轉移、TNM分期、分化程度及患者預后有關。

【關鍵詞】胰腺腫瘤；骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制劑；免疫組織化學

DOI:10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2015.02.002

基金項目：國家自然科學基金(81470889)

收稿日期：(2014-12-08)

The expression and role of BAMBI in pancreatic cancerWangPing,LangHaibo,LiuXinjuan,LiXue,FanHua,HeQiang,ZhangJie.DepartmentofGastroenterology,BeijingAnzhenHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100029,China

Correspondingauthor:ZhangJie,Email:zhangjie4155@sina.com

Abstract【〗ObjectiveTo investigate the expression of BAMBI in pancreatic carcinoma tissue and its clinical value. MethodsExpression of BAMBI was detected by immunohistochemistry in 69 cases of pancreatic cancer and 15 normal pancreatic samples .The survival and its association with clinicopathologic parameters were analyzed. ResultsThe expression of BAMBI in the cancer tissue was much higher than that in the normal tissues (56.5%vs16.7%, P<0.01). The expression of BAMBI was not associated with age, sex and tumor size, differentiation, but expression of BAMBI in patient with lymph node metastasis was higher than that in patient without lymph node metastasis (67.4%vs38.5%, P=0.019), the expression of BAMBI in TNM stage Ⅲ was higher than that in stage Ⅰ+Ⅱ (75.0%vs31.0%, P=0.001). The median survival of BAMBI-positive group (6 months) was lower than that of BAMBI-negative group (10 months). ConclusionsBAMBI is over-expressed in pancreatic carcinoma, and its expression is associated with lymph node metastasis, TNM staging, differentiation and prognosis.

【Key words】Pancreatic neoplasms;BMP and activin membrane-bound inhibitor;Immunohistochemistry

轉錄生長因子-β(transforming growth factor-beta，TGF-β)信號轉導通路的基本元素包括TGF-β超家族成員、兩類絲氨酸/蘇氨酸激酶受體(Ⅰ型和Ⅱ型受體)、Smad蛋白家族。骨形成蛋白(bone morphogenetic protein，BMP)屬于TGF-β超家族成員之一，它與細胞膜表面的Ⅰ、Ⅱ型受體結合形成復合物，激活Ⅱ型受體自身磷酸化，磷酸化的Ⅱ型受體再激活Ⅰ型受體，激活的Ⅰ型受體結合 Smad，Smad被激活并形成三聚體復合物。該復合物進入細胞核識別DNA，同時在其他細胞因子的相互作用下共同調節(jié)目標基因的表達[1]。骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制劑(BMP and activin membrane-bound inhibitor， BAMBI)是一種跨膜糖蛋白，又稱為偽受體(pseudoreceptor)，其胞外區(qū)域與TGF-β信號轉導通路中的Ⅰ型受體蛋白序列具有同源性，因此，BAMBI能夠與骨形成蛋白結合形成配體-受體復合物，并與TGF-βⅡ型受體形成聚合物。由于BAMBI胞內結構不具有Ⅰ型受體所特有的蛋白激酶結構域，不能激活下游的Smad，從而阻斷了TGF-β的信號傳導[2]。研究發(fā)現，結腸癌BAMBI過表達，且與腫瘤的侵襲、復發(fā)及病死率相關[3]。但BAMBI在胰腺癌的表達及其與預后的關系尚未見報道。本研究檢測胰腺癌組織BAMBI的表達，探討其與臨床病理特征及預后的關系。

材料與方法

作者單位：100029北京，首都醫(yī)科大學附屬北京安貞醫(yī)院消化內科(王平、郎海波、張杰)；首都醫(yī)科大學附屬北京朝陽醫(yī)院消化內科(劉心娟)，病理科(李雪)，肝膽外科(樊華、賀強)

通信作者：張杰，Email: zhangjie4155@sina.com

一、材料來源

選擇首都醫(yī)科大學附屬北京朝陽醫(yī)院及首都醫(yī)科大學附屬北京安貞醫(yī)院外科2003年至2013年手術切除并經病理證實為胰腺導管腺癌患者69例，其中男性47例，女性22例，年齡36～90歲，平均(64±11)歲。術前未給予放化療?；颊叱鲈汉缶M行電話隨訪，最后隨訪截止日期為2013年12月31日。生存起始時間為接受胰腺切除手術的時間，主要終點時間為死亡時間，次要終點時間為隨訪結束時間。生存率為隨訪滿2年存活的病例數與總病例數的百分比。因在截止日期前仍有10例病例存活，但隨訪時間不滿2年而列為刪失數據。

二、免疫組織化學法檢測BAMBI蛋白表達

腫瘤組織固定、石蠟包埋、切片，69℃烤片2 h，奶粉中浸泡20 min，擦干后平穩(wěn)放置于切片盤上，采用美國Ventana全自動免疫組化染色儀行免疫組化染色。一抗為兔抗人BAMBI多抗(GeneTex公司)，二抗及顯色系統(tǒng)均為全自動免疫組化染色儀自帶的封閉套盒(美國羅氏公司)。準備完畢后啟動電腦運行程序，染色完成后，打開切片盤，取出切片，常規(guī)脫水、透明、封片。以腫瘤邊緣>2 cm的正常胰腺組織作為對照。

胞質內見棕黃色染色為陽性表達細胞。隨機選取至少5個200倍鏡視野，至少計數1 000個細胞，采用Remmele和Stegner提出的免疫反應積分(IRS)進行打分[4]。染色強度(SI)：無色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細

影響中老年民眾保健食品風險認知的因子以保健食品知識、政府信任、企業(yè)品牌信任、專業(yè)醫(yī)護工作者、標簽說明最為明顯。中老年人認為需要更多的信息，特別是關于保健食品的健康益處、營養(yǎng)成分、功能作用等。專家信任與專家信息來源、親朋好友來源、廣告來源的影響相對微弱一些。本研究給保健食品行業(yè)提供指導，為了降低民眾的風險認知，提升監(jiān)管部門的風險溝通效率，可以采取如下措施：

胞百分比(PP)：無陽性細胞為0分，≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～80%為3分，>80%為4分。兩分乘積>3分為陽性。

三、統(tǒng)計學處理

應用SPSS17.0軟件包進行統(tǒng)計學分析。BAMBI表達與腫瘤臨床病理參數的關系采用χ2檢驗，生存率分析采用Kaplan-Meier方法，行Log-rank檢驗。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

結　　果

一、胰腺癌組織BAMBI的表達

69例胰腺癌組織BAMBI的陽性表達率為56.5%(39/69)，癌旁正常胰腺組織BAMBI的陽性表達率為16.7%(6/36)，胰腺癌組織中BAMBI的陽性表達率明顯高于正常胰腺組織，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=15.344,P<0.01，圖1)。

圖1　癌旁正常胰腺組織(1A)及胰腺癌組織(1B)BAMBI蛋白表達( 免疫組化　×400)

二、胰腺癌組織BAMBI表達與臨床病理參數的關系

胰腺癌組織BAMBI的表達與患者年齡、性別及腫瘤大小、分化程度無相關性(P值均>0.05)。但有淋巴結轉移的胰腺癌BAMBI陽性表達率顯著高于無淋巴結轉移者，TNM分期為Ⅲ期的胰腺癌BAMBI陽性表達率顯著高于Ⅰ+Ⅱ期胰腺癌者。差異均有統(tǒng)計學意義(表1)。

三、BAMBI表達與胰腺癌患者生存期的相關性分析

BAMBI表達陰性的胰腺癌患者的中位生存期為10個月(包括2例刪失數據)，陽性患者的中位生存期為6個月(包括8例刪失數據)，陰性患者的生存時間顯著長于陽性患者，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.44，P=0.035，圖2)。

表1　胰腺癌 BAMBI表達與臨床病理參數的關系

圖2　69例胰腺癌患者的術后生存曲線

研究證明[5]，BAMBI作為一種拮抗劑可減弱TGF-β/BMP的轉錄活性，抑制TGF-β誘導的受體調節(jié)型Smad(R-Smad)磷酸化和阻滯細胞生長。此外，BAMBI與抑制性Smad(I-Smad)共同作用可抑制TGF-β信號[5]。Smad7為抑制性Smad，可以與R-Smad競爭，直接與激活的I型受體相互作用，抑制R-Smad的活性[6]。BAMBI還可抑制R-Smad(Smad 3)和ALK5之間的相互作用，并干擾Smad3的磷酸化，抑制TGF-β信號。文獻證實，TGF-β信號通路與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展、血管生成及轉移密切相關[7]。

BAMBI最先是作為一個與人黑色素瘤轉移呈負相關的基因被報道。既往的研究證明，結腸癌[8-9]

和肝癌BAMBI的表達明顯上調；在人胃癌細胞系[9]和膀胱癌細胞系[10]，BAMBI可以拮抗TGF-β與其受體的結合，從而阻斷了TGF-β信號傳遞，促進腫瘤的發(fā)生。本研究結果顯示，胰腺癌組織BAMBI的表達率明顯增高，這可能與BAMBI作為一種拮抗劑減弱了TGF-β/BMP的轉錄活性，抑制了TGF-β誘導的R-Smad磷酸化和細胞生長阻滯，使得TGF-β對細胞增殖、侵襲的抑制作用被阻斷有關[5]。

此外，本研究結果顯示，胰腺癌組織BAMBI陽性表達患者的預后不良，與BAMBI過表達的胰腺癌患者容易發(fā)生淋巴結轉移，且臨床分期更差有關。

參考文獻

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(本文編輯：屠振興)