縫隙連接蛋白43通過調(diào)控L型鈣電流參與心房肌細胞的電重塑*

饒芳1, 2, 3，薛玉梅1, 3，鄧春玉2, 3，余細勇1, 2, 3，肖定璋2, 3，陳少賢2, 3，林秋雄2, 3，楊慧2,3，鄺素娟2,3，劉曉穎2,3，朱杰寧2, 3，吳書林1, 3△

(1廣東省心血管病研究所心內(nèi)科，2廣東省人民醫(yī)院醫(yī)學研究部，3廣東省醫(yī)學科學院 廣東 廣州 510080)

[摘要]目的： 觀察縫隙連接蛋白43(Cx43)是否通過與L型鈣通道共定位，調(diào)控L型鈣電流，參與房顫(AF)的發(fā)病機制。方法: 使用蛋白免疫印跡和實時熒光定量PCR檢測AF和竇性心律患者心房組織中Cx43的蛋白和mRNA表達差異；用RNA干擾技術沉默心房肌細胞的Cx43表達，實時熒光定量PCR和全細胞膜片鉗實驗觀察對L型鈣通道m(xù)RNA表達和L型鈣電流的影響；免疫共沉淀和激光共聚焦顯微成像觀察心房肌細胞中Cx43與L型鈣通道是否存在共定位。結果: AF患者心房組織中的Cx43表達明顯低于竇性心律患者；干擾Cx43表達可明顯抑制L型鈣電流和L型鈣通道α1c亞基的mRNA表達；且心房肌細胞中Cx43與L型鈣通道存在共定位。結論: 心房肌細胞中的Cx43可通過與L型鈣通道形成分子復合物，調(diào)控L型鈣電流，參與心房肌細胞的電重塑。

[關鍵詞]縫隙連接蛋白43； L型鈣通道； 心房肌細胞； 心房纖顫； 電重塑

[中圖分類號]R363.2[文獻標志碼]A

doi:10.3969/j.issn.1000-4718.2015.11.010

[文章編號]1000-4718(2015)11-1992-06

[收稿日期]2015-02-06[修回日期] 2015-09-09

[基金項目]*國家自然科學基金資助項目(No. 31260250)

通訊作者△Tel： 0851-86753069； E-mail： moxiangang123@126.com

Cx43 is involved in electrical remodeling of atrial myocytes through regulating L-type calcium currentRAO Fang1, 2, 3, XUE Yu-mei1, 3, DENG Chun-yu2, 3, YU Xi-yong1, 2, 3, XIAO Ding-zhang2, 3, CHEN Shao-xian2, 3, LIN Qiu-xiong2, 3, YANG Hui2, 3, KUANG Su-juan2, 3, LIU Xiao-ying2, 3, ZHU Jie-ning2, 3, WU Shu-lin1, 3

(1DepartmentofCardiology,GuangdongProvincialCardiovascularInstitute,2MedicalResearchCenter,GuangdongGeneralHospital,3GuangdongAcademyofMedicalSciences,Guangzhou510080,China.E-mail:wushulincn@163.com)

ABSTRACT[]AIM: To investigate whether the association of connexin 43 (Cx43) and L-type calcium channel involved in the pathogenesis of atrial fibrillation (AF). METHODS: The biochemical assays and whole-cell patch-clamp technique were used to study the expression of Cx43 in human atrial tissue. The co-localization of Cx43 and L -type calcium channel, and the regulation of L-type calcium current in atrial myocytes were investigated. RESULTS: The expression of Cx43 at mRNA and protein levels was decreased in human atrial tissues of AF patients. In cultured atrium-derived myocytes (HL-1 cells), knockdown of Cx43 significantly inhibited the mRNA expression of L-type calcium channel α1c subunit, as well as L-type calcium current. Co-localization of Cx43 with L-type calcium channel α1c subunit in mouse atrial myocytes was observed. CONCLUSION: The decrease in Cx43 is involved in the pathogenesis of AF, probably through reducing the L-type calcium current in atrial myoctyes by co-localization with L-type calcium channel, thus representing the potential pathogenesis in atrial fibrillation.

[KEY WORDS]Connexin 43; L-type calcium channels; Atrial myocytes; Atrial fibrillation; Electrical remodeling

心房顫動(atrial fibrillation，AF)是臨床最常見的快速性心律失常之一，發(fā)病率呈逐年上升趨勢。可導致心力衰竭和動脈栓塞，使患者致殘或致死，給社會和家庭帶來沉重的負擔。當前的抗心律失常藥物和導管治療AF均有較多局限性。因此需進一步闡明AF的發(fā)病機制，以尋找更好的治療策略；

AF的發(fā)病機制主要包括電重塑和結構重塑。心房肌細胞L型鈣電流(L-type calcium current,ICa,L)減少，導致心房有效不應期縮短和多子波-折返通路形成和維持，是AF電重塑的主要標志[1-2]。另一方面，AF的結構重塑包括心房擴大和纖維化，與電重塑的發(fā)生是平行的[2-3]。心肌細胞間通訊異常在AF的發(fā)病中亦起著非常重要的作用。心臟電活動的協(xié)調(diào)是心肌細胞間通過位于閏盤的縫隙連接通道形成的細胞間偶聯(lián)維持的?？p隙連接蛋白(connexins，Cxs)是組成連接子和縫隙連接的主要蛋白。近年來的研究顯示改善縫隙連接開放，可有效增加心肌細胞間傳導，起抗心律失常作用[4]。Cx43是心房肌細胞中的主要Cxs之一；AF時Cx43表達降低，去磷酸化以及分布側邊化，使細胞間的電傳導減慢，最終導致AF的發(fā)生和發(fā)展[5]。但近年來有研究發(fā)現(xiàn)，心肌細胞中的Cx43與橋粒斑菲素蛋白( plakophilin 2，PKP2)和Na+通道能形成大分子復合體，其表達改變可直接影響鈉電流[6-7]。因此，Cx43亦可能在細胞膜上與其它陽離子通道形成復合體，直接調(diào)控通道功能，如L型鈣通道(L-type calcium channel，LCC)，直接調(diào)控ICa,L，從而參與AF電重塑。

材料和方法

1患者資料

本研究符合赫爾辛基宣言中的原則，并經(jīng)廣東省人民醫(yī)院(廣東省醫(yī)學科學院)醫(yī)學研究倫理委員會批準(批準號：GDREC20131107)。所有患者均簽署知情同意書。有嚴重左室功能不全者，合并其它系統(tǒng)嚴重疾病者及合并肺炎及其他炎癥性疾病者不能入選。接受心臟手術的患者，在體外循環(huán)開始前收集切除的右心耳，迅速投入到液氮中，并儲存在-80 ℃?zhèn)溆?。本研究中選取9名慢性AF和7名竇性心律(sinus rhythm，SR)患者。入選患者詳細資料見表1。

表1　入選患者的詳細資料

MVR: mitral valve replacement; EF: ejection fraction.

2實驗方法

2.1HL-1 細胞的培養(yǎng)及分組心房肌細胞株HL-1獲贈自William Claycomb 教授實驗室(Louisiana State University Health Science Center, New Orleans, LA)。細胞培養(yǎng)于Claycomb 培養(yǎng)基(JRH Biosciences)，加入了10% 胎牛血清(JRH Biosciences)、2 mmol/L的L-谷氨酰胺(Gibco)、100 μmol/L去甲腎上腺素(Sigma)、1×105U/L青霉素和100 mg/L鏈霉素(Gibco)，培養(yǎng)瓶使用纖連蛋白和凝膠預鋪(Sigma)，培養(yǎng)于37 ℃、5% CO2、95%空氣的培養(yǎng)箱中。每24～48 h換液1次。

2.2心房肌細胞Cx43的RNA干擾技術由上海吉瑪公司合成小鼠Cx43 mRNA的siRNA Oligo，共有4對陽性序列，1對陰性對照，序列見表 2。細胞接種于6孔板上，使其轉(zhuǎn)染密度為50%～70%。分別取100 μL Claycomb培養(yǎng)基稀釋3 μL siRNA (終濃度為50 nmol/L)和2 μL LipofectamineTM2000試劑，室溫下孵育5 min。兩者混合后在室溫下孵育20 min。每孔待轉(zhuǎn)染細胞加入無血清培養(yǎng)基1000 μL，再加入上述siRNA和LipofectamineTM2000混合物，輕輕地前后搖動培養(yǎng)板混勻，37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中孵育6 h后更換含血清的生長培養(yǎng)基。RNA干擾實驗分為Cx43 siRNA-I組、Cx43 siRNA-Ⅱ組、Cx43 siRNA-Ⅲ組、Cx43 siRNA-IV組、空白組和陰性對照，轉(zhuǎn)染48 h后提取細胞總蛋白，Western blot法檢測各組細胞中Cx43的表達情況。

2.3Western blot實驗剪碎的心房組織標本和敲低Cx43表達的細胞，加入裂解液，冰上裂解30 min，12 000 r/min離心20 min，取上清，分裝后儲存于-80 ℃。測定蛋白濃度后，4×上樣緩沖液(Invitrogen)稀釋后的30 μg 樣本，95 °C 煮5 min。10% SDS-聚丙烯酰胺凝膠分離蛋白，然后轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜(amersham)。TBST-脫脂牛奶中室溫下封閉2 h，加入anti-Cx43的 I 抗(1∶1 000，CST)，4 °C過夜。以anti-GAPDH(1∶1 000， Zymed)為內(nèi)參照。TBST洗3次，每次10 min，封閉液稀釋的HRP標記的抗兔IgG(KPL)中孵育1 h。TBST洗3次，每次10 min，加入ECL (Pierce)，X光片顯影。ImageJ軟件對條帶進行定量。

表2　siRNA序列

2.4Real-time PCR將經(jīng)Cx43 siRNA轉(zhuǎn)染48 h后的HL-1細胞棄去培養(yǎng)基，預冷PBS洗3遍，每孔加入800 μL TRIzol，吹打后混勻，提取總mRNA。取1 μg總RNA逆轉(zhuǎn)錄(TaKaRa)為cDNA。使用SYBR Premix Ex TaqTM(TaKaRa)進行擴增，每個樣本加入2 μL cDNA，總體積為25 μL。在MJ Research DNA Engine Opticon? 2 連續(xù)熒光檢測系統(tǒng)(MJ Research)上進行實時定量聚合酶鏈反應。人 Cx43的正向引物序列為5’-TTG CTG CGA ACC TAC ATC ATC AGT-3’， 反向引物序列為5’-GCC AGG GAC ACC AAG GAC AC-3’；小鼠 Cx43的正向引物序列為5’-GAT CGC GTG AAG GGA AGA AG-3’，反向引物序列為5’-CAG CCA TTG AAG TAA GCA TAT TTT G-3’；小鼠 LCC α1c亞基的正向引物序列為 5’-ATG AGA CCC GCA GCG TAA-3’，反向引物序列為5’-GAG GCA GAG CGA AGG AAA -3’；β-actin的正向引物序列為5’-TGT CCC TGT ATG CCT CTG GT-3’，反向引物序列為5’-GAT GTC ACG CAC GAT TTC C-3’。通過2-ΔΔCt計算相對表達水平。

2.5免疫共沉淀小鼠引頸處死，取心房組織，冰上剪碎，加入裂解液(50 mmol/L NaCl、20 mmol/L HEPES、1% Triton X-100、0.5% NP-40、1 mmol/L EDTA、1 mmol/L PMSF、 1 mmol/L NaVO3、50 mmol/L NaF 和蛋白酶抑制劑)勻漿，制備組織裂解液。3 500 r/min 離心 15 min， 去沉淀。預處理組織裂解液，取1 mL 上清液加入30 μL protein A/G 瓊脂糖珠(Upstate)，4 ℃ 緩慢搖晃30 min。3 500 r/min 離心5 min，取上清液，測蛋白濃度(Bio-Rad)。每1 mL組織裂解液中含有400 μg蛋白；1 mL組織裂解液中加入8 μg兔抗Cav2.1 (LCC α1c; Alomone)，4 ℃ 緩慢搖晃1 h。加入50 μL protein A/G瓊脂糖珠，4 ℃緩慢搖晃1 h；將 抗體-protein A/G瓊脂糖珠復合物2 000 r/min離心5 min，裂解緩沖液洗3遍。加入100 μL裂解液和25 μL 4×上樣緩沖液；取30 μL樣本，95 ℃，10 min。Western blot檢測Cx43的表達；等量兔IgG加入組織裂解液，以及預去除LCC α1c的心房組織裂解液作為陰性對照組；心房組織裂解液作為陽性對照。

2.6激光共聚焦顯微鏡成像原代乳大鼠心房肌細胞生長于蓋玻片上，4%多聚甲醛固定15 min，0.25% Triton X-100透化15 min。1%牛血清白蛋白室溫封閉1 h。PBS洗3遍，分別加anti-Cx43的 I 抗和anti-Cav2.1(LCCα1c)I 抗(1∶100)，4 ℃ 過夜。PBS洗3遍，分別加入相對應的 II 抗(1∶100)，室溫1 h。DAPI (Vector Laboratories)染核后，封片；激光共聚焦顯微鏡(Leica)下觀察。

2.7全細胞膜片鉗技術記錄ICa,LHL-1細胞經(jīng)干擾Cx43表達后，接種于35 mm培養(yǎng)皿中，棄去培養(yǎng)基，予0.05%胰蛋白酶-EDTA消化約1 min，終止消化，細胞在6 h內(nèi)用于電生理實驗。全細胞膜片鉗技術記錄ICa,L，細胞外液(mmol/L)：TEA-Cl 140, CaCl25, MgCl22, HEPES 10, Glucose 10(pH 7.4)。玻璃電極由硼硅玻璃毛細管(Corning)拉制而成。充滿細胞內(nèi)液后電極尖端電阻為2～3 ΩM。細胞內(nèi)液(mmol/L)： CsCl 100, TEA-Cl 20, Na2ATP 5, Na2GTP 0.4, EGTA 10, HEPES 10 (pH 7.2)。

液接電位補償后用負壓使電極與細胞表面形成高阻封接后(阻抗>1 GΩ)，在接觸細胞前，補償尖端電位。給負壓破膜，形成全細胞記錄。用Axopatch 200B 放大器和Digidata 1200B-pClamp 7.0 data-acquisition system (Axon Instruments)記錄電流信號。5 kHz過濾信號，儲存于電腦的硬盤中。串聯(lián)電阻(Rs)為3～5 MΩ，電補70%～80%以使在記錄電流和鉗夾的膜上電壓下降時電容激增縮小至最小，并在電流記錄過程中保持穩(wěn)定。為了避免細胞體積所致的差異，所有數(shù)據(jù)均以電流密度表示。實驗在(25±1) ℃ 左右進行。

3統(tǒng)計學處理

所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準誤(mean±SEM)表示，用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件分析。兩組間的比較使用t檢驗，多組間均數(shù)比較用單因素方差分析，組間均數(shù)的兩兩比較使用LSD法和SNK法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結果

1SR和AF患者的Cx43 mRNA和蛋白的表達差異

本研究中，我們發(fā)現(xiàn)與SR組(n=7) 相比，AF組(n=9)患者心房肌組織中Cx43 的mRNA表達明顯降低 (P<0.05)。蛋白水平的表達差異結果亦相似(P<0.05)，見圖 1。我們之前的研究中已發(fā)現(xiàn)AF組心房肌組織中LCC α1c的mRNA和蛋白水平明顯低于SR組。因此我們觀察心房肌細胞中LCC α1c是否與Cx43存在相互作用。

2Cx43 siRNA成功沉默HL-1細胞Cx43的表達

將Cx43 siRNA序列轉(zhuǎn)染至HL-1細胞，干擾48 h，Western blot檢測Cx43的表達，提示Cx43 siRNA-IV為有效靶序列，見圖2。

Figure 1.The expression of Cx43 at mRNA and protein levels in the atrium tissues from the patients with SR and AF.Mean±SEM.*P<0.05vsSR.

圖1竇性心律和房顫患者心房肌組織中Cx43表達水平的比較

Figure 2.Cx43 expression in HL-1 cells after knockdown ofCx43 expression by siRNA. Screening of effective interference chain was analyzed by Western blot.

圖2篩選有效Cx43 siRNA序列

3Cx43 siRNA敲低HL-1細胞Cx43對LCC的影響

經(jīng)有效Cx43 siRNA處理HL-1細胞48 h后，檢測Cx43和LCC α1c的mRNA表達。結果發(fā)現(xiàn)LCC α1c基因表達明顯被抑制(P<0.05)，見圖 3。

4敲低HL-1細胞Cx43表達對ICa,L的影響

經(jīng)有效Cx43 siRNA處理HL-1細胞48 h后，將細胞接種至35 mm培養(yǎng)皿，全細胞膜片鉗檢測ICa,L。結果發(fā)現(xiàn)HL-1細胞的Cx43被敲低后，ICa,L明顯被抑制(P<0.01)，見圖 4。

Figure 3.The mRNA expression of Cx43 and LCC α1c in the HL-1 cells before and after knockdown ofCx43. The mRNA levels of Cx43 and LCC α1c subunit were analyzed by real-time PCR. β-actin served as an internal control. Mean±SEM.n=4.*P<0.05,**P<0.01vscontrol.

圖3敲低Cx43對HL-1細胞Cx43和LCC α1c mRNA表達的影響

Figure 4.TheICa,Lcurrent-voltage relationship in the HL-1 cells before and after knockdown ofCx43. A: representative recordings of whole-cellICa,L.ICa,Lwas measured as the nicardipine-sensitive current. B: representativeICa,Ldensity-voltage relationships. Mean±SEM.n=7～8.*P<0.05,**P<0.01vscontrol.

圖4敲低Cx43對HL-1細胞ICa,L密度的影響

5Cx43與LCC α1c的相互作用

干擾Cx43的表達，可影響LCC和ICa,L的mRNA表達，提示Cx43與LCC α1c可能存在相互作用。用免疫共沉淀實驗和激光共聚焦顯微鏡成像觀察Cx43與LCC α1c的共定位；用LCC α1c的 I 抗包被瓊脂糖珠沉淀LCC α1c，Western blot檢測到Cx43的存在；免疫熒光提示在原代乳大鼠心房肌細胞中，LCC α1c與Cx43存在共定位現(xiàn)象，見圖5。

Figure 5.The interaction of LCC α1c with Cx43. A: co-immunoprecipitation of LCC α1c with Cx43. Immunoblots for Cx43 from samples exposed to protein A/G beads coated with rabbit IgG (negative control) or LCC α1c antibody. B: co-localization of LCC α1c with Cx43 confirmed by confocal microscopy. HL-1 cells were co-stained with anti-LCC α1c antibody, anti-Cx43 and DAPI. Merged images of LCC α1c (green), Cx 43 (red) and DAPI staining (blue) were shown. The scale bar= 25 μm.

圖5Cx43與LCC α1c的相互作用

討論

隨著我國人口的老齡化和心血管疾病的生存率的增加，AF發(fā)病率逐年上升，但其發(fā)病機制尚未得到闡明，需進一步研究；眾所周知，心肌細胞間通訊異常在AF的發(fā)病中起著非常重要的作用。心臟電活動的協(xié)調(diào)是心肌細胞間通過位于閏盤的縫隙連接通道形成的細胞間偶聯(lián)維持的。Cxs是組成連接子和縫隙連接的主要蛋白。近年來的研究發(fā)現(xiàn)改善縫隙連接開放，可有效增加心肌細胞間傳導，起抗心律失常的作用[8]。心房中主要有Cx40和Cx43，兩者表達量相等，是心房肌細胞間傳導的主要決定因素。以往關于Cxs與AF的研究主要集中在Cx40，但Cx43在AF發(fā)病中也起著非常重要的作用。

現(xiàn)有研究表明AF可能與Cx43的表達下降，去磷酸化和分布側邊化相關[5]。其可能機制是Cx43表達下調(diào)使心房肌細胞間的傳導速度減慢，或異質(zhì)性分布使相鄰細胞具有不同的阻抗和傳導速度，產(chǎn)生許多微小傳導阻滯區(qū)，形成微小折返環(huán)路，誘發(fā)AF。正常情況下，心肌細胞表達的Cx43具有非常大的冗余度。Cx43基因敲除小鼠使Cx43降低大于90%時，才引起心肌細胞電傳導減慢[9]。提示心肌細胞Cx43分布不均勻，導致電傳導速度減慢[8]，與Cx43表達降低協(xié)同作用更易導致心律失常的發(fā)生。

Cx43除了在心肌細胞間電傳導中起重要作用，還可通過組成半通道，允許一些小分子通過，其中包括Na+和Ca2+；近年來有研究發(fā)現(xiàn)，Cx43可直接參與膜上離子通道的調(diào)控。在致心律失常右室心肌病(arrhythmogenic right ventricular cardiomyopathy，ARVC)的研究中表明，Cx43和PKP2 共存于一個大分子復合物中，敲除PKP2可使Cx43表達下降，Cx43重新分布，縫隙連接斑減少，從而誘發(fā)心律失常[7]。進一步研究發(fā)現(xiàn)，HL-1細胞中，PKP2可與電壓門控的鈉離子通道相互作用；敲除PKP2可降低鈉電流，使動作電位傳播速率減慢。免疫共沉淀結果提示PKP2和鈉離子通道共定位[10]，提示Cx43、PKP2和鈉離子通道三者共存于一個復合物中，Cx43的表達改變可能直接影響鈉離子通道的特性，從而誘發(fā)心律失常[10]。新近有研究發(fā)現(xiàn)，Cx43和NaV1.5可能參與心肌纖維化。過表達鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(calcineurin A，CnA)小鼠誘導心肌肥厚模型，與野生型小鼠相比，MHC-CnA小鼠出生后第 1 周即出現(xiàn)Cx43和NaV1.5的表達明顯降低，第 4 周出現(xiàn)纖維化指標明顯升高，心室出現(xiàn)纖維化，提示Cx43和NaV1.5的表達明顯降低可導致纖維化[11]。

心房肌細胞的電重塑和結構重塑是AF發(fā)病的主要機制；電重塑的主要標志是心房有效不應期縮短，頻率適應性喪失和心房傳導延長。心房肌細胞ICa,L降低是AF電重塑時心房肌有效不應期縮短的主要原因之一[12]；此外，有研究發(fā)現(xiàn)AF時心房Cx43分布與纖維化相關[13]，但心房肌細胞中Cx43是否參與鈣電流的調(diào)控，從而參與AF的發(fā)病機制，目前尚未有研究報道。本實驗中我們發(fā)現(xiàn)AF患者心房組織標本中，Cx43的mRNA和蛋白表達明顯低于SR患者；而之前的研究提示ICa,L和LCC亞單位的表達亦以AF組表達明顯降低，提示兩者之間可能存在相互作用；進一步研究發(fā)現(xiàn)，敲低Cx43可明顯使LCC α1c亞單位的表達下調(diào)，以及ICa,L的密度明顯下調(diào)；在本研究中，我們還觀察了Cx43和LCC α1c是否通過共定位相互作用。免疫共沉淀發(fā)現(xiàn)LCC α1c可將Cx43從小鼠心臟組織裂解中拖帶下來，提示2個蛋白質(zhì)之間存在直接或間接的相互作用；免疫熒光提示在原代乳大鼠心房肌細胞中，Cx43和LCC α1c存在共定位；但該結果存在一定的局限性，免疫熒光雖然提示Cx43和LCC α1c共同存在于同一個細胞中。但擬合后的圖像可能反映真實的共定位，亦或者僅僅是非?？拷?。

綜上所述，我們認為在心房肌細胞中，Cx43可能通過與LCC共定位，直接調(diào)控ICa,L；在病理情況下，Cx43表達降低，可抑制ICa,L，從而促進AF的發(fā)生和發(fā)展。

[參考文獻]

[1]Hertervig EJ, Yuan S, Carlson J, et al. Evidence for electrical remodelling of the atrial myocardium in patients with atrial fibrillation. A study using the monophasic action potential recording technique[J]. Clin Physiol Funct Imaging, 2002, 22(1):8-12.

[2]Nattel S. New ideas about atrial fibrillation 50 years on[J]. Nature, 2002, 415(6868):219-226.

[3]Everett TH, Olgin JE. Atrial fibrosis and the mechanisms of atrial fibrillation[J]. Heart Rhythm, 2007, 4(3 Suppl):S24-S27.

[4]Dhein S, Hagen A, Jozwiak J, et al. Improving cardiac gap junction communication as a new antiarrhythmic mechanism: the action of antiarrhythmic peptides[J]. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol, 2010, 381(3):221-234.

[5]余志斌，圣娟娟. 心肌細胞縫隙連接重塑和心律失常[J]. 生理學報, 2011, 63(6):586-592.

[6]Oxford EM, Musa H, Maass K, et al. Connexin43 remo-deling caused by inhibition of plakophilin-2 expression in cardiac cells[J]. Circ Res, 2007, 101(7):703-711.

[7]Sato PY, Musa H, Coombs W, et al. Loss of plakophilin-2 expression leads to decreased sodium current and slower conduction velocity in cultured cardiac myocytes[J]. Circ Res, 2009, 105(6):523-526.

[8]Boulaksil M, Winckels SK, Engelen MA, et al. Heterogeneous Connexin43 distribution in heart failure is associated with dispersed conduction and enhanced susceptibility to ventricular arrhythmias[J]. Eur J Heart Fail, 2010, 12(9):913-921.

[9]Gutstein DE, Morley GE, Tamaddon H, et al. Conduction slowing and sudden arrhythmic death in mice with cardiac-restricted inactivation of connexin43[J]. Circ Res, 2001, 88(3):333-339.

[10]Sato PY, Coombs W, Lin X, et al. Interactions between ankyrin-G, Plakophilin-2, and Connexin43 at the cardiac intercalated disc[J]. Circ Res, 2011, 109(2):193-201.

[11]Fontes MS, Raaijmakers AJ, van Doorn T, et al. Changes in Cx43 and NaV1.5 expression precede the occurrence of substantial fibrosis in calcineurin-induced murine cardiac hypertrophy [J]. PLoS One, 2014, 9(1):e87226.

[12]Rao F, Deng CY, Wu SL, et al. Involvement of Src in L-type Ca2+channel depression induced by macrophage migration inhibitory factor in atrial myocytes [J]. J Mol Cell Cardiol, 2009, 47(5):586-594.

[13]何文聰，李裕舒，羅明華，等.心房顫動患者心房纖維化與縫隙連接重構的關系[J].中國病理生理雜志,2008,24(10):1943-1947 .

(責任編輯： 陳妙玲， 羅森)