李大鵬，呂春雷，王鳳嬌，任 紅，鄭文哲

(解放軍88醫(yī)院a.中心實驗室；b.醫(yī)務(wù)處；c.輸血科，山東泰安 271000)

儲存血液隨保存期延長，因紅細胞生存條件變化及代謝廢物產(chǎn)生，以及部分保存紅細胞壽命縮短及損傷增加等因素，對紅細胞代謝、功能等造成不同程度影響，臨床輸注血液可能發(fā)生受血者血K+升高、非溶血性輸血反應(yīng)等[1～3]。筆者選擇在血液保存液Ⅲ中添加丙氨酰谷氨酰胺方式，結(jié)合采集血液儲存過程中監(jiān)測游離血紅蛋白(free hemoglobin,FHB)變化，探討其對紅細胞及儲存血液質(zhì)量的影響，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選擇參與采供血機構(gòu)無償獻血人員10例，均為男性，年齡不限，符合獻血條件，采集未抗凝靜脈血。

1.2 儀器與試劑 測定FHB主要儀器包括722型光柵分光光度計(上海第三分析儀器廠，檢測波長510 nm，1 cm光徑比色杯)、5415R臺式冷凍小型離心機、5810R臺式冷凍高速離心機(德國Eppendorf公司)等。FHB測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.3 血液保存液配制 選取臨床使用丙氨酰谷氨酰胺注射液(四川科倫，50 ml∶10 g)加入0.9 g/dl氯化鈉注射液50 ml稀釋，選取采供血機構(gòu)常規(guī)使用一次性使用塑料血袋中血液保存液Ⅲ[四川南格爾公司，生產(chǎn)批號150123，藥品批準文號(國藥準字H20045509)]，其配方主要為枸櫞酸鈉、枸櫞酸、無水葡萄糖等。丙氨酰谷氨酰胺稀釋液與血液保存液Ⅲ按1.8∶1比例混合均勻配成實驗組血液保存液，對照組血液保存液為血液保存液Ⅲ。

1.4 實驗方案 選取無菌試管20只均分為A，B組。A組為實驗組，1～10管中均分別加入丙氨酰谷氨酰胺稀釋液0.756 ml及血液保存液Ⅲ0.42 ml；B組為對照組，1～10管均分別加入血液保存液Ⅲ0.42 ml。

按照一次性使用塑料血袋血液保存液采集全血要求，分別采集10例獻血者未抗凝靜脈血，對應(yīng)加入A，B兩組1～10試管中各3 ml，充分搖勻后放置到4～6℃冰箱保存。

1.5 指標測定 血液采集后第10，21，35天分別檢測A，B兩組FHB含量。FHB測定采用分化比色法，嚴格按試劑盒操作說明書要求進行實驗操作，510 nm波長測各管吸光度A，檢測范圍為0～200 mg/L。

2 結(jié)果

采血后第10，21，35天分別檢測A，B兩組FHB含量，數(shù)據(jù)按檢測時間分組為T1，T2，T3，共AT1，AT2，AT3，BT1，BT2，BT36組，各組基本統(tǒng)計量見表1。由相同檢測時間同樣本A，B兩組檢測值取得配對樣本數(shù)據(jù)，配對t檢驗結(jié)果見表2。其中AT1-BT1，AT2-BT2，AT3-BT3組總體均數(shù)均不為0(P值均<0.05)，各組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

實驗數(shù)據(jù)資料為重復(fù)測量資料(時間因素和組別因素)，對數(shù)據(jù)進行球型檢驗，取得ε校正系數(shù)進行數(shù)據(jù)校正(Greenhouse-Geisser法)，檢驗結(jié)果見表3；對重復(fù)效應(yīng)和交互效應(yīng)進行方差分析(F檢驗)，結(jié)果表明各檢測時間之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=68.031，P<0.001)，檢測組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=21.422，P<0.05)，時間與組別因素之間無顯著交互作用(F=1.924，P=0.194>0.05)。LSD法進行各檢測時間之間多重比較，結(jié)果見表4。表明各檢測時間之間FHB含量差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，相同檢測時間A，B兩組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，組間FHB含量A組均顯著低于B組。

在α=0.05置信水平下，各檢測時間之間FHB含量均存在顯著性差異，相同檢測時間組間FHB含量均存在顯著性差異，A組均顯著低于B組。

表1 各組血漿FHB檢測值(mg/L)

表2 各組FHB配對t檢驗結(jié)果

注：各組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表3 球型檢驗結(jié)果

表4 不同檢測時間之間LSD多重比較結(jié)果

注：各檢測時間之間FHB含量差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；相同檢測時間A，B兩組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

血液離開機體循環(huán)，受到儲存及保養(yǎng)條件限制會發(fā)生“保存損傷”，其各種功能指標會發(fā)生改變，能保持穩(wěn)定的細胞內(nèi)、外環(huán)境，則紅細胞能存活且維持正常生理功能[4]。血液保存液是影響血液儲存的主要因素，科學(xué)、合理改良現(xiàn)有血液保存液，不斷提高儲存血液質(zhì)量及臨床輸注效果，已成為現(xiàn)階段重要研究課題[5～8]。

紅細胞隨保存時間延長，其膜上脂蛋白和脂質(zhì)逐漸喪失，細胞內(nèi)鉀離子降低及鈉、鈣離子升高，致細胞變形能力減低及滲透脆性增加，受到外界因素影響會發(fā)生溶血致血紅蛋白逸出，致血漿FHB含量不斷升高，影響紅細胞攜氧能力及輸血效果。FHB含量是反映紅細胞膜穩(wěn)定性及代謝程度的主要標志，也是檢測紅細胞溶血的主要指標，在儲存血液中含量變化可體現(xiàn)血液保存液對紅細胞膜穩(wěn)定性的影響，也是判斷全血質(zhì)量和安全輸注的重要指標[5，9]。

丙氨酰谷氨酰胺是腸外營養(yǎng)的組成部分，適用于分解代謝和高代謝狀況等患者，以及對急性肺損傷患者的保護等[10]，在血液中可迅速分解為丙氨酸和谷氨酰胺(Glutamine Gln)，谷氨酰胺可減少和對抗自由基對機體組織器官的損傷，提高血漿中谷胱甘肽水平及機體抗氧化水平，其被酶解產(chǎn)生NH4可增加紅細胞膜的流動性及對機械壓的抗性[11]。

本文實驗數(shù)據(jù)表明：各檢測時間之間FHB含量均存在顯著性差異，同一檢測時間組間FHB含量均存在顯著性差異，A組均顯著低于B組，表明儲存血液隨保存時間延長，各種因素導(dǎo)致紅細胞溶血率上升，造成血紅蛋白逸出使FHB含量顯著升高，F(xiàn)HB含量與保存時間呈正相關(guān)關(guān)系；同時，相同時間檢測血漿FHB含量A組均顯著低于B組，表明添加丙氨酰谷氨酰胺血液保存液Ⅲ可顯著降低紅細胞溶血率，對紅細胞膜保護作用優(yōu)于血液保存液Ⅲ，對紅細胞具有顯著保護作用，可增加紅細胞膜流動性及降低外界因素造成紅細胞膜破裂溶血，減少因紅細胞生存條件變化等因素對紅細胞造成的影響，提高儲存血液質(zhì)量及輸注效果。

根據(jù)本文實驗數(shù)據(jù)，在經(jīng)典血液保存液Ⅲ中按比例添加丙氨酰谷氨酰胺，對紅細胞膜保護作用優(yōu)于血液保存液Ⅲ，可對紅細胞產(chǎn)生十分顯著的保護作用，能顯著降低紅細胞溶血及血漿FHB含量，提高儲存血液質(zhì)量及臨床輸注效果，并提高受血者免疫功能和血紅蛋白含量，對危重病患者具有降低感染率等顯著治療作用[11]，充分體現(xiàn)其在血液采集、血液保存及臨床輸血工作中的良好價值[12]。

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