血紅素加氧酶-1基因多態(tài)性與急性心肌梗死的關(guān)系

范廣慈崔國方秦琴李玉耕王剛

【摘要】目的 探討血紅素加氧酶-1基因多態(tài)性與急性心肌梗死發(fā)病風(fēng)險之間的關(guān)系。方法 選取連續(xù)的80例急性ST段抬高性心肌梗死患者和85例健康體檢者（對照組），采用聚合酶鏈反應(yīng)和凝膠電泳方法分析HO-1基因啟動子區(qū)域c的分布是否存在差異。結(jié)果 HO-1基因啟動子區(qū)域（GT）n重復(fù)序列存在差異；急性心肌梗死組和對照組L/L基因型（P=0.003）及L型等位基因（P=0.001）頻率分布差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；多因素回歸分析顯示HO-1基因多態(tài)性、吸煙史、高血壓、糖尿病及總膽固醇水平是急性心肌梗死的預(yù)測因子。結(jié)論 血紅素加氧酶-1基因啟動子區(qū)域遺傳多態(tài)性與急性心肌梗死的發(fā)病、以及疾病進(jìn)展密切相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】急性心肌梗死；血紅素加氧酶-1；多態(tài)性

作者單位：266000 青島市海慈醫(yī)療集團(tuán)心血管二科

急性心肌梗死是臨床常見的急重癥，是致殘與致死最主要也是最重要原因之一。急性心肌梗死的發(fā)病基礎(chǔ)為冠狀動脈粥樣硬化病變，是由多個基因位點和基因多態(tài)性控制。血紅素加氧酶（Heme oxgenase，HO）是將血紅素分解為膽綠素合成過程中的限速酶，在這過程中釋放出鐵（Fe2+）和一氧化碳（CO）。HO-1分布于動脈粥樣硬化斑塊，平滑肌細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞中，在各種外界刺激下如氧化應(yīng)激、炎癥會釋放增加。具有抗內(nèi)皮細(xì)胞增值、抗炎、抗氧化和抗細(xì)胞凋亡的作用。HO-l基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)位于啟動子的5’端，近年來對HO-1最關(guān)注的是（GT）n雙核苷酸鏈的多態(tài)性，提示（GT）n重復(fù)頻率越高HO-l基因的表達(dá)水平越低，因此，在外界因素刺激下，HO-1表達(dá)水平的不一致性可能是其在許多疾病發(fā)病中發(fā)揮作用的機(jī)制之一。

1　資料與方法

1.1研究對象

研究對象分成兩組：選取自2010年10月～2013年3月入我院接受急診PCI的STEMI患者80例，平均年齡（60.90±2.38）歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）出現(xiàn)癥狀12小時內(nèi)（典型胸痛持續(xù)30分鐘）。（2）心電圖至少兩個相鄰導(dǎo)聯(lián)J點后60 ms的ST段抬高≥2 mm。排除標(biāo)準(zhǔn)：冠脈搭橋術(shù)后，合并嚴(yán)重的瓣膜病，左或右束支傳導(dǎo)阻滯，有慢性充血性心力衰竭病史，慢性腎臟疾病。 體檢健康者共85例（健康對照組），平均年齡（62.00±2.26）歲。

1.2方法

1.2.1DNA提取 抽取受試者外周靜脈血4 ml，應(yīng)用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，加入裂解液進(jìn)行裂解，然后提取DNA，在-20℃條件下，TE緩沖液溶解后保存。

1.2.2引物設(shè)計與合成 應(yīng)用PCR方法對HO-1的GT重復(fù)序列進(jìn)行擴(kuò)增：

正義引物 5′-AGAGCCTGCAGCTTCTCAGA-3′

反義引物 5′-ACAAAGTCTGGCCATAGGAC-3′

反應(yīng)條件94℃變性30 s，57℃退火30 s，72℃延伸30 s，共完成30個循環(huán)。

1.2.3電泳 配制15 ml 8%非變性聚丙烯酰胺溶液，加樣PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，調(diào)整至適當(dāng)電壓開始電泳，最后進(jìn)行染色和基因型判定。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析。計數(shù)資料選用χ2檢驗，計量資料進(jìn)行t檢驗，方差分析及其兩兩比較采用q檢驗。各因素之間相關(guān)性應(yīng)用多因素Logistic回歸分析。P＜0.05認(rèn)為差異具有意義。

2　結(jié)果

2.1患者一般資料

兩組在年齡和性別無統(tǒng)計學(xué)差異。入選患者主要為男性，在冠狀動脈危險因素方面包括糖尿病，高血壓，年齡和吸煙，兩組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。見表1。

2.2AMI組與健康對照組的HO-1比較

基因型頻率及等位基因頻率分布結(jié)果顯示，急性心肌梗死組（AMI）和對照組在L/L基因型頻率和 L 型等位基因頻率的分布，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.001），見表2。

2.3HO-1 基因多態(tài)性和急性心肌梗死之間的多因素Logistic回歸分析

將急性心肌梗死作為因變量，性別、吸煙史、冠心病的家族史、高血壓病、糖尿病、高脂血癥、TG、TC、和 HO-1 基因多態(tài)性作為自變量，進(jìn)行多因素logistic 回歸分析，見表3。

表1　兩組患者一般情況［n，%］

表2　急性心肌梗死組與對照組 HO-1基因多態(tài)性分布

表3　多因素 Logistic 回歸分析結(jié)果

3　討論

急性心肌梗死是冠心病的急重癥之一，是導(dǎo)致臨床患者死亡的主要原因［1-2］。急性心肌梗死的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，近年來發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激、炎癥等因素在心肌梗死的發(fā)生、發(fā)展的生理機(jī)制中發(fā)揮著重要作用，血紅素加氧酶（heme oxygenase，HO）是一種參與血紅素代謝的限速酶，是作用于亞鐵血紅素代謝過程的一種包含多種功能的氧化酶，分布于人體的多個器官組織中，如肺臟、脾臟、肝臟、血管內(nèi)膜和動脈粥樣硬化斑塊中［3］。HO-1有重要的抗炎抗氧化作用，研究顯示上調(diào)HO-1的表達(dá)水平，能明顯降低心肌梗死大鼠的梗死心肌面積［4］，動物研究表明GT 重復(fù)次數(shù)與HO-1的轉(zhuǎn)錄水平呈負(fù)相關(guān)，重復(fù)次數(shù)越少，HO-1的表達(dá)水平越高［5］，因此啟動子基因型分布頻率重復(fù)的次數(shù)與多種疾病的發(fā)病相關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)，AMI組HO-1的基因型主要以L/L型和L/S型為主，對照組則以L/S型和SS型為主，統(tǒng)計結(jié)果表明兩組基因型頻率分布差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；就等位基因頻率分布而言，急性心肌梗死組以L型為多見，而對照組以S型為主，兩組等位基因頻率分布具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），這進(jìn)一步表明L型等位基因攜帶者罹患AMI的風(fēng)險更高。另外，本研究在去除吸煙、高脂血癥、糖尿病和高血壓等危險因素后，發(fā)現(xiàn)HO-1基因啟動子區(qū)多態(tài)性仍與急性心肌梗死密切相關(guān)。這表明HO-1基因多態(tài)性作為危險因素之一，可能在急性心肌梗死的發(fā)生、發(fā)展的病理生理過程中發(fā)揮著重要作用。

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Relationship Between GT Repeat Polymorphism in Heme Oxygenase-1 and Acute Myocardial Infarction

FAN Guangci CUI Guofang QIN Qin LI Yugeng WANG Gang Department of Internal Medicine-cardiovascular，Qingdao Haici Medical Group，Qingdao 266000， China

【Abstract】

Objective The aim of this study was to investigate the relationship between heme oxygenase-1 gene polymorphism and acute myocardial infarction. Methods After exclusion， 80 patients with AMI and 85 cases of healthy check-up were prospectively enrolled in this study. Polymerase chain reaction and the modified polyacrylamide gel electrophoresis methods were used to analyze HO-1 gene promoter regions （GT）n distribution. Results There were obvious difference between two groups in HO-1 gene promoter regions （GT）n repetitive sequence.Acute myocardial infarction group and the control group L/L genotype （P=0.003） and L allele frequency （P=0.001） differences were statistically significant. Multiple factors regression analysis showed that HO-1 gene polymorphism， smoking history， hypertension， diabetes， and total cholesterol levels were predictors of acute myocardial infarction. Conclusion HO-1 gene promoter regions （GT）n repetitive sequence’s genetic polymorphism is associated with the occurrence and development of acute myocardial infarction.

【Key words】Acute myocardial infarction， Heme oxygenase-1， Polymorphism

doi:10.3969/j.issn.1674-9316.2015.19.119

【中圖分類號】R542.2

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B

【文章編號】1674-9316（2015）19-0154-03