雍　菁

(南京市中醫(yī)院，南京　210001)

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高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定膚白膠囊中梣酮和黃柏酮的含量

雍菁

(南京市中醫(yī)院，南京210001)

摘要：目的建立高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定膚白膠囊中梣酮和黃柏酮的含量。方法色譜柱為Waters Sunfire C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為甲醇-水(65∶35)；檢測(cè)波長為236 nm；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為30 ℃。結(jié)果梣酮進(jìn)樣量在7.19～43.15 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為98.88%，RSD為1.0%；黃柏酮進(jìn)樣量在6.94～41.66 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為98.62%，RSD為1.2%。結(jié)論該方法準(zhǔn)確、快速、穩(wěn)定、方便，可以作為膚白膠囊中梣酮和黃柏酮的含量測(cè)定方法。

關(guān)鍵詞：膚白膠囊；梣酮；黃柏酮；高效液相色譜法

膚白膠囊是由白鮮皮、地膚子、蟬蛻等五味中藥組成的中藥復(fù)方制劑，其功效為清熱燥濕、祛風(fēng)止癢，臨床上用于治療濕疹、疥癬、濕瘡、熱毒瘡腫、皮膚瘙癢等癥。處方中白鮮皮為蕓香科植物白鮮DictamnusdasycarpusTurcz.的干燥根皮，性寒味苦，歸脾、胃、膀胱經(jīng)，具有清熱燥濕、祛風(fēng)解毒的功效[1]。白鮮皮主要含有白鮮堿、梣酮和黃柏酮等生物堿及內(nèi)酯類活性物質(zhì)，其中梣酮和黃柏酮具有抑菌、殺蟲和廣譜抗真菌作用[2]，對(duì)本方所治病癥起主要作用，為本處方中君藥。為了進(jìn)一步有效控制膚白膠囊的質(zhì)量，從而保證臨床用藥安全有效，本實(shí)驗(yàn)建立高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定其中梣酮和黃柏酮的含量，該方法準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便、穩(wěn)定，可以作為測(cè)定膚白膠囊中梣酮和黃柏酮含量的方法。

1儀器與試藥

1.1儀器沃特斯e2695高效液相色譜儀，Empower2 色譜工作站(美國沃特斯)；KQ301-DA超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)；分析天平(德國賽多利斯)。

1.2試藥 梣酮對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)200602，質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%，供含量測(cè)定用)；黃柏酮對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)201001，質(zhì)量分?jǐn)?shù)97.5%，供含量測(cè)定用)；甲醇；水。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱為Waters Sunfire C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為甲醇-水(65∶35)；檢測(cè)波長為236 nm；流速為1 mL·min-1；柱溫為30 ℃。

2.2溶液的制備混合對(duì)照品溶液的制備：精密稱取梣酮對(duì)照品8.68 mg，置于50 mL的量瓶中，加甲醇使其溶解并定容至刻度，搖勻，制得每1 mL含梣酮0.173 6 mg的梣酮對(duì)照品溶液；精密稱取黃柏酮對(duì)照品9.22 mg，置于50 mL量瓶中，加甲醇使其溶解并定容至刻度，搖勻，制得每1 mL含黃柏酮0.179 8 mg的黃柏酮對(duì)照品溶液。分別精密吸取梣酮對(duì)照品溶液和黃柏酮對(duì)照品溶液各10 mL，置于同一50 mL量瓶中，加甲醇定溶至刻度，制得每1 mL含梣酮、黃柏酮分別為34.72和35.96 μg的混合對(duì)照品溶液。

供試品溶液的制備：取本品內(nèi)容物1 g，研細(xì)，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加甲醇40 mL，超聲處理30 min，放冷，用甲醇定容，用0.45 μm微孔濾膜過濾，得供試品溶液。

陰性樣品溶液的制備：按照膚白膠囊制備工藝陰性樣品，按照供試品溶液制備方法制備陰性樣品溶液。

2.3系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)精密吸取上述溶液各10 μL進(jìn)樣，測(cè)定，供試品色譜中梣酮和黃柏酮的保留時(shí)間與混合對(duì)照品色譜一致，梣酮和黃柏酮的分離度均大于1.5，陰性樣品色譜在梣酮和黃柏酮保留時(shí)間處沒有干擾，見圖1。本方法專屬性強(qiáng)，理論塔板數(shù)以黃柏酮計(jì)不低于5 000。

圖1HPLC圖

A.對(duì)照品溶液；B.供試品溶液；C.陰性樣品溶液；

1.梣酮2.黃柏酮

Fig.1 HPLC chromatograms

A.reference substance solution；B.sample solution；C.negative sample solution；

1.fraxinellone；2.obakunone

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別吸取混合對(duì)照品1，2，4，6，8，10和12 μL進(jìn)樣，按照2.1 項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，分別以梣酮和黃柏酮進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)(Y)，以對(duì)應(yīng)的峰面積為橫坐標(biāo)(X)做線性回歸。梣酮的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=24 680.89X-6 996.61，r=0.999 7；黃柏酮的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=5 578.45X-449.26，r=0.999 6。梣酮的線性范圍為7.19～43.15 μg，黃柏酮的線性范圍為6.94～41.66 μg。

2.5精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取上述混合對(duì)照品溶液10 μL進(jìn)樣，連續(xù)進(jìn)樣6次，按照2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，分別以梣酮和黃柏酮峰面積計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD分別為0.83%和0.73%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取批號(hào)為140616的樣品內(nèi)容物1 g，制備供試品溶液，測(cè)定，計(jì)算梣酮和黃柏酮含量的RSD分別1.2%和1.5%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取本品內(nèi)容物1.0 g，精密稱定，制備供試品溶液，分別在0，1，2，4，8，12和24 h吸取供試品溶液10 μL進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算梣酮和黃柏酮含量的RSD分別1.6%和1.8%。結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8回收率實(shí)驗(yàn)取批號(hào)為140615(已知梣酮為0.72 mg·g-1，黃柏酮為2.17 mg·g-1)的樣品0.5 g，精密稱定，分別加入梣酮0.347 2 mg和黃柏酮1.078 8 mg，制備供試品溶液，測(cè)定，回收率結(jié)果見表1。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)回收率符合實(shí)驗(yàn)要求。

表1回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.1Results of the recovery test

名稱稱樣量/g原有量/mg加入量/mg測(cè)得量/mg回收率/%平均值/%RSD/%梣酮0.51120.36810.34720.714299.6898.881.00.49180.35410.34720.700399.710.50230.36170.34720.701697.900.51760.37270.34720.711197.470.51140.36820.34720.714599.740.50080.36060.34720.703698.79黃柏酮0.51121.10931.07882.168198.1598.621.20.49181.06721.07882.136099.070.50231.09001.07882.139897.310.51761.12321.07882.181298.070.51141.10971.07882.1965100.740.50081.08671.07882.147898.36

2.9樣品測(cè)定按照2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備3批(批號(hào)分別為140616，140618，140704)供試品溶液，精密吸取10 μL測(cè)定，計(jì)算梣酮和黃柏酮含量。結(jié)果顯示，批號(hào)為140616，140618，140704的樣品中梣酮含量分別為0.71，0.69和0.74 mg·g-1，平均含量為0.71 mg·g-1；黃柏酮含量分別為2.10，2.09和2.16 mg·g-1，平均含量為2.13 mg·g-1。

3討論

3.1供試液制備方法的選擇本實(shí)驗(yàn)通過考察比較回流提取和超聲提取對(duì)梣酮和黃柏酮含量的影響，證明二者沒有顯著性差異，超聲提取更方便。分別測(cè)定超聲提取10，20，30，40和50 min時(shí)梣酮和黃柏酮的含量，超聲30 min后二者的含量均不再顯著性增加，因此選擇超聲時(shí)間為30 min。通過比較體積分?jǐn)?shù)為30%，50%，70%和100%的甲醇超聲提取結(jié)果，不同體積分?jǐn)?shù)甲醇超聲提取對(duì)梣酮和黃柏酮含量沒有顯著性影響，而體積分?jǐn)?shù)為100%的甲醇直接超聲提取雜質(zhì)峰最少，因此選體積分?jǐn)?shù)為100%的甲醇直接超聲提取。

3.2流動(dòng)相的選擇通過比較甲醇-水[3-9]不同比例下梣酮和黃柏酮的分離度和保留時(shí)間，當(dāng)甲醇-水(65∶35)時(shí)，梣酮和黃柏酮分離度良好，保留時(shí)間適當(dāng)，沒有雜質(zhì)峰干擾，因此選擇甲醇-水(65∶35)為流動(dòng)相。通過二極管陣列檢測(cè)器全波長掃描，在波長為236 nm時(shí)，梣酮和黃柏酮均有較好的響應(yīng)值，色譜峰形良好，故選擇236 nm為檢測(cè)波長。

3.3小結(jié)本實(shí)驗(yàn)建立高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定膚白膠囊中梣酮和黃柏酮的含量，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和回收率均良好，能夠在膚白膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中作為梣酮和黃柏酮含量測(cè)定的方法。

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Determination of fraxinellone and obacunone in Fubai Capsules by HPLC

YONG Jing(Nanjing Hospital of Traditional Chinese Medicine，Nanjing 210001，China)

Abstract:ObjectiveTo develop an HPLC for determining fraxinellone and obacunone in Fubai Capsules. MethodsThe column was Waters Sunfire C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，the mobile phase was methanol-water(65∶35)，the detection wavelength was 236 nm，the flow rate was 1.0 mL·min-1，and the temperature was 30 ℃. ResultsFraxinellone showed a good linear relationship from 7.19 to 43.15 μg，and the average recovery was 98.9% ，with RSD 1.0%；obacunone showed a good linear relationship from 6.94 to 41.66 μg，and the average recovery was 98.6%，with RSD 1.2%. ConclusionThe method was accurate，fast，reliable and convenient，and can be used for determining fraxinellone and obacunone in Fubai Capsules.

Key words:Fubai Capsules；fraxinellone；obacunone；HPLC

收稿日期：(2015-04-20)

中圖分類號(hào)：R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1004-2407(2016)01-0042-04

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.01.014