王文喜，洪　璐，蔡　婷，鄭海麗，朱　淼，陳麗娜

(浙江工業(yè)大學(xué) 藥學(xué)院,浙江 杭州 310014)

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陽離子膽固醇的合成及其基因傳遞性能研究

王文喜，洪璐，蔡婷，鄭海麗，朱淼，陳麗娜

(浙江工業(yè)大學(xué) 藥學(xué)院,浙江 杭州 310014)

摘要：采用琥珀酸將N,N-二甲基乙二氨偶聯(lián)到膽固醇上，合成新型的陽離子膽固醇衍生物——N-(N′,N′-二甲基)乙基丁二酸單膽固醇酯單酰胺(DC-CHEMS)，并考察其作為基因載體的可行性.以DC-CHEMS和磷脂為膜材采用薄膜分散法制備脂質(zhì)體，透射電鏡顯示其形態(tài)規(guī)整，粒徑均勻；激光粒度測定儀測得其平均粒徑為136 nm，Zeta電位為25 mV.瓊脂糖凝膠電泳顯示當(dāng)+/-電荷比大于4∶1時(shí)，脂質(zhì)體能將DNA完全結(jié)合，且能保護(hù)DNA免受DNase I酶的降解.溶血試驗(yàn)和MTT細(xì)胞毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示，所得脂質(zhì)體具有較低的毒性.細(xì)胞攝取和基因轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)表明：所得脂質(zhì)體能顯著促進(jìn)HepG2細(xì)胞對(duì)F-ODN的攝??；當(dāng)+/-電荷比為1∶1,1∶2時(shí)，基因轉(zhuǎn)染效果強(qiáng)于市售的轉(zhuǎn)染試劑Lipfectamine?2000.因此，DC-CHEMS作為基因載體，具備了高效低毒的優(yōu)勢，值得進(jìn)一步的深入研究.

關(guān)鍵詞：陽離子膽固醇衍生物；陽離子脂質(zhì)體；基因載體

如何安全有效地將外源基因藥物遞送至細(xì)胞內(nèi)是基因治療廣泛應(yīng)用急需解決的瓶頸問題之一[1-2].非病毒載體因具有低毒、基因攜載率高、免疫原性小和制備方便等優(yōu)點(diǎn)，越來越受到國內(nèi)外研究者的青睞[3].其中陽離子脂質(zhì)體為研究最多且最為成熟的非病毒類載體，已有多種產(chǎn)品上市[4].這些陽離子脂質(zhì)體主要由陽離子型脂質(zhì)和膽固醇混合制備而得，由于陽離子脂質(zhì)價(jià)格昂貴，合成工藝復(fù)雜，作為藥物載體則不利于市場推廣.為了解決這一問題，近年來有許多學(xué)者嘗試在膽固醇上進(jìn)行修飾，制備各種陽離子型的膽固醇衍生物用作基因載體，也獲得了較高的轉(zhuǎn)染效率[5-8].與脂肪烴鏈組成的陽離子脂質(zhì)相比，膽固醇因其剛性、生物降解性及膜融合能力使復(fù)合物有更好的穩(wěn)定性，在真核細(xì)胞中表達(dá)出更好的轉(zhuǎn)染效率[9].其中最引人關(guān)注的是3β[N-(N,N,-二甲氨基乙烷)-氨甲?；鵠膽固醇(DC-Chol)，常被用作陽性對(duì)照試劑用于基因載體的研究中[10].因此，本實(shí)驗(yàn)通過琥珀酰基將N,N-二甲基乙二胺接到膽固醇上合成一種新的陽離子膽固醇衍生物——N-(N′,N′-二甲基)乙基丁二酸單膽固醇酯單酰胺，將其與磷脂混合制備脂質(zhì)體，測定其理化性質(zhì)和生物學(xué)性質(zhì)，并以反義寡核苷酸和綠熒光蛋白質(zhì)粒DNA為基因藥物模型，考察其作為基因藥物載體的可行性.

1試劑與儀器

1.1試劑

N,N-二甲基乙二胺、N-羥基琥珀酰亞胺購自于阿拉丁試劑(上海)有限公司；二環(huán)己基碳二亞胺、膽固醇購自于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；綠熒光蛋白質(zhì)粒DNA和FITC-寡核苷酸購自于上海生工技術(shù)服務(wù)有限公司；磷酸鹽緩沖液(PBS)、胎牛血清、胰酶和DMEM購自于吉諾生物醫(yī)藥有限公司；大豆卵磷脂S100購自于德國Lipoid公司；MTT購自于美國Sigma公司；其他試劑均為分析純.

1.2儀器

ANANCEⅢ(500M)核磁共振波普儀(瑞士Bruker公司); SpectraMax M2e多功能酶標(biāo)儀(美國分子儀器公司);DelsaNano激光粒度測定儀(Beckman公司);J-25型高速冷凍離心機(jī)(Beckman公司);JY92超聲細(xì)胞粉碎機(jī)(寧波新芝科技研究所)；311二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱(Thermo ELECTRON 公司)；FC500MCL流式細(xì)胞儀(Beckman公司)； REV-52CS旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化設(shè)備儀器有限公司)；JEM透射電子顯微鏡(日本電子公司)；ECLIPSE-Ti顯微鏡(Nikon公司).

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1DC-CHEMS的合成與表征

將5 g膽固醇、4 g丁二酸酐、150 mL四氫呋喃和40 mL三乙胺置于圓底燒瓶中，80 ℃回流攪拌48 h.反應(yīng)結(jié)束后，40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸干，所得的固體溶解在60 mL無水乙醇中，加入100 mL蒸餾水快速攪拌，冰水浴析出白色固體，抽濾得粗產(chǎn)物膽固醇琥珀酸單酯(CHEMS).采用丙酮重結(jié)晶法純化CHEMS，N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活潑酯法活化CHEMS上的羧基形成活潑酯.0.5 g活潑酯溶于20 mL二氯甲烷中形成溶液A，冰水浴準(zhǔn)備.120 μL N,N-二甲基乙二胺溶于10 mL預(yù)冷的二氯甲烷中形成溶液B.將溶液B逐滴加入到溶液A中，冰水浴反應(yīng)1 h.反應(yīng)結(jié)束后，常溫旋干，加3 mL異丙醇溶解固體，冰水浴使初產(chǎn)物析出，所得固體用乙醚純化，真空抽干乙醚，得產(chǎn)物，通過薄層色譜法、核磁共振法和質(zhì)譜法對(duì)該產(chǎn)物進(jìn)行表征.其合成路線為

2.2DC-CHEMS脂質(zhì)體的制備與表征

采用薄膜分散法制備脂質(zhì)體.稱取適量的摩爾比為2∶1的大豆卵磷脂S100和DC-CHMES，溶于10 mL氯仿中，30 ℃真空旋轉(zhuǎn)蒸干，加5 mL 磷酸緩沖液(PBS)搖晃，待梨型瓶壁上的薄膜消失，再置于37 ℃水浴鍋中水化2 h.探頭超聲200次(超聲功率400 W，工作時(shí)間2 s，間歇2 s)，得磷脂終質(zhì)量濃度為10 mg/mL的脂質(zhì)體[11].

脂質(zhì)體適當(dāng)稀釋后，用透射電子顯微鏡觀察其形態(tài)，并用納米粒徑儀測定脂質(zhì)體的粒徑及Zeta電位.

2.3脂質(zhì)體與質(zhì)粒DNA結(jié)合率以及保護(hù)DNA能力的測定

采用瓊脂糖凝膠電泳阻滯實(shí)驗(yàn)來判斷脂質(zhì)體/質(zhì)粒DNA復(fù)合物的形成情況.配制脂質(zhì)體5個(gè)梯度，控制+/-電荷比分別為1∶1,2∶1,4∶1,8∶1，16∶1.取質(zhì)粒DNA 10 μL(100 μg/mL)和樣品5 μL 37 ℃孵育0.5 h，以同質(zhì)量濃度的純質(zhì)粒DNA作對(duì)照組.取15 μL樣品與3 μL 6×DNA電泳加樣緩沖液混勻，將各樣品上樣于0.8%的瓊脂糖凝膠電泳上樣孔中，140 V，20 min，置于紫外燈下觀察，并用凝膠成像系統(tǒng)拍照保存.

采用同樣的方法來考察脂質(zhì)體保護(hù)DNA的能力.配制3個(gè)梯度的脂質(zhì)體，控制+/-電荷比分別為2∶1,4∶1,8∶1.取質(zhì)粒DNA10 μL和樣品5 μL于37 ℃孵育0.5 h，另取相同量的質(zhì)粒DNA加5 μL PBS稀釋.每份樣品加5 μL DNaseI酶(2.5 U/μL)置37 ℃恒溫水浴20 min.將樣品轉(zhuǎn)移到80 ℃水浴中放置5 min滅活DNaseI酶，再加2 μL體積分?jǐn)?shù)為10%的Triton X-100溶液破壞脂質(zhì)體[12].以同質(zhì)量濃度的質(zhì)粒DNA作為對(duì)照組.將各樣品上樣于0.8%的瓊脂糖凝膠電泳，140 V，20 min，置于紫外燈下觀察，并用凝膠成像系統(tǒng)拍照保存.

2.4溶血試驗(yàn)

用生理鹽水配置2%大鼠血紅細(xì)胞懸液.按表1配比生理鹽水和脂質(zhì)體，輕輕混合均勻，置37 ℃水浴鍋中1 h，3 000 r/min離心5 min，取上清液2 mL，加10% Triton X-100溶液0.3 mL破乳.在550 nm下測吸光度.以生理鹽水組離心前加曲拉通樣品為陽性對(duì)照，生理鹽水組離心得上清液加Triton X-100樣品為陰性對(duì)照，計(jì)算溶血百分率為

溶血百分率=(A樣品-A2)/(A1-A2)×100%

式中：A樣品為樣品的吸光度；A2為陰性對(duì)照組吸光度；A1為陽性對(duì)照組吸光度.

表1　不同質(zhì)量濃度脂質(zhì)體溶血試驗(yàn)

注：1) 為離心前加Triton X-100，其余為離心后加.

2.5細(xì)胞毒性

采用溴化四氮唑比色法(MTT Assay)測定陽離子脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性[13].取對(duì)數(shù)生長期的HepG2細(xì)胞，接種于96孔板中(5×103個(gè)/孔)，于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜.每孔加入150μL DMEM稀釋的空白DC-CHEMS脂質(zhì)體，其磷脂質(zhì)量濃度分別為0.01，0.25,0.5,0.1,0.2 mg/mL，每個(gè)質(zhì)量濃度設(shè)置6個(gè)副孔.置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 h后，每孔加入20 μL MTT溶液(5 mg/mL)，再繼續(xù)培養(yǎng)4 h.小心吸棄培養(yǎng)基，每孔加入150 μL二甲基亞砜，平行搖動(dòng)使甲瓚晶體溶解并測量其在490 nm處的吸光值，計(jì)算細(xì)胞存活率為

細(xì)胞存活率=A490樣品/A490對(duì)照×100%

式中：A490樣品為不同磷脂質(zhì)量濃度樣品的吸光度；A490對(duì)照為對(duì)照孔的吸光度.

2.6脂質(zhì)體對(duì)F-ODN在HepG2細(xì)胞攝取的促進(jìn)作用

將呈對(duì)數(shù)生長的HepG2細(xì)胞胰酶消化后，以5×103個(gè)/孔的密度接種于96孔板中培養(yǎng)過夜.分別按+/-電荷比1∶1,4∶1,8∶1，16∶1制備含熒光標(biāo)記的寡核苷酸(F-ODN)脂質(zhì)體復(fù)合物.用無血清DMEM培養(yǎng)基稀釋，控制寡核苷酸終質(zhì)量濃度為1μg/mL，同時(shí)設(shè)立單用寡核苷酸和Lipofectamine?2000(加入量按說明書上配置)做對(duì)照.傾去培養(yǎng)液，每孔加入150 μL脂質(zhì)體復(fù)合物，每個(gè)比例設(shè)3個(gè)副孔.5 h后，吸除上清液，200 μL/孔PBS洗3次，加40 μL胰酶消化2～3 min，加40 μL血清終止消化，離心，收集細(xì)胞，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的陽性染色率以及細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度，以兩者的乘積作為胞內(nèi)熒光總量.每份樣品分析的細(xì)胞數(shù)為104個(gè).

2.7脂質(zhì)體的基因轉(zhuǎn)染效率

將呈對(duì)數(shù)生長的HepG2細(xì)胞胰酶消化后，以5×103個(gè)/孔的密度接種于96孔板中培養(yǎng)過夜.分別按+/-電荷比1∶8,1∶4,1∶2,1∶1，4∶1制備帶有綠熒光基因的質(zhì)粒DNA脂質(zhì)體.用無血清培養(yǎng)基稀釋，控制質(zhì)粒DNA質(zhì)量濃度為1 μg/mL，同時(shí)設(shè)立單用質(zhì)粒DNA和Lipofectamine?2000(加入量按說明書上配置)做對(duì)照.傾去培養(yǎng)液后，每孔加入150 μL稀釋后的脂質(zhì)體復(fù)合物，每個(gè)比例設(shè)3個(gè)副孔.5 h后，去除培養(yǎng)基，換成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的血清完全培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h，用熒光顯微鏡進(jìn)行熒光拍照.

3結(jié)果與討論

3.1DC-CHEMS的表征

圖1(a)為DC-CHEMS的質(zhì)譜圖，從圖1可看出：在質(zhì)荷比m/z為557.5[M+H+]處有一個(gè)很大的峰，該峰為DC-CHEMS的質(zhì)子化物.圖1(b)為的DC-CHEMS的1H NMR(CDCl3,500 MHz)譜圖.化學(xué)位移δ0.64～1.49,δ4.56～4.59,δ5.35是膽固醇上的特征峰.δ2.67是—N(CH3)2的特征峰，δ2.47是—NHCH2CH2N(CH3)2的特征峰.

圖1　DC-CHEMS的質(zhì)譜圖和1H核磁共振圖Fig.1　Mass Spectrometryand 1H NMR spectra of DMAPA-CHEMS

3.2DC-CHEMS脂質(zhì)體的表征

激光粒度測定儀測定DC-CHEMS脂質(zhì)體在pH7.2的PBS中的Zeta電位為25.37 mV，為陽離子脂質(zhì)體.圖2顯示了脂質(zhì)體粒徑分布情況，從圖2可以看出:脂質(zhì)體的大小較為均一，呈較好的正態(tài)分布，平均直徑為136 nm．圖3是為磷鎢酸負(fù)染后脂質(zhì)體的透射電鏡圖，從圖3可看出:脂質(zhì)體形態(tài)較規(guī)整，幾乎都呈圓形，而且顆粒大小較均一，與激光粒度儀所測得的粒徑相近.

圖2　DC-CHEMS脂質(zhì)體粒徑分布Fig.2　The size distribution of liposomes

圖3　DC-CHEMS脂質(zhì)體透射電鏡圖Fig.3　Transmission electron micrograph images of liposomes

3.3脂質(zhì)體與質(zhì)粒DNA結(jié)合率以及保護(hù)DNA能力的測定

DNA脂質(zhì)體復(fù)合物的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果如圖4所示，從圖4可看出:當(dāng)+/-電荷比較低時(shí)，只有部分質(zhì)粒DNA被阻滯在點(diǎn)樣口，隨著+/-電荷比的升高，結(jié)合在加樣孔的質(zhì)粒逐漸增加,加樣孔上方瓊脂糖膠面上的條帶逐漸減弱.當(dāng)+/-電荷比超過4∶1時(shí)，DNA全部被阻滯在加樣孔，膠面上觀察不到亮條帶，說明在+/-電荷比大于4∶1時(shí)DC-CHEMS脂質(zhì)體與質(zhì)粒DNA能完全結(jié)合.

1—純質(zhì)粒；2～6—分別表示+/-電荷比為16∶1,8∶1,4∶1,2∶1,1∶1圖4　DC-CHEMS脂質(zhì)體與質(zhì)粒DNA結(jié)合率實(shí)驗(yàn)Fig.4　Agarose gel electrophoresis of DC-CHEMS liposomes/pDNA complexes

為了考察脂質(zhì)體對(duì)DNA的保護(hù)作用，將DNA脂質(zhì)體復(fù)合物與DNaseI酶作用20 min，再加曲拉通破壞脂質(zhì)體，使DNA游離后電泳，結(jié)果見圖5.從圖5可看出：游離的質(zhì)粒DNA與DNaseI酶作用20 min后，已被全部降解，與對(duì)照組相同位置處已無條帶，而脂質(zhì)體復(fù)合物組在相應(yīng)位置處有類似對(duì)照組的強(qiáng)量條帶，說明DC-CHEMS脂質(zhì)體能有效地質(zhì)粒DNA使其免受DNaseI酶的降解.

1—純質(zhì)粒；2—質(zhì)粒+酶，作用時(shí)間20 min；3～5—分別表示+/-電荷比為8∶1,4∶1,2∶1圖5　DC-CHEMS脂質(zhì)體保護(hù)DNA能力Fig.5　pDNA protection from DNase I by DC-CHEMS liposmes

3.4細(xì)胞溶血試驗(yàn)

陽離子型兩親性物質(zhì)常具有較強(qiáng)的細(xì)胞膜破壞作用而呈現(xiàn)較大的毒性[14-15].為此，首先通過測量抗紅細(xì)胞破裂實(shí)驗(yàn)來評(píng)價(jià)DC-CHEMS脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性，結(jié)果如圖6所示.從圖6可看出：即使當(dāng)脂質(zhì)的終質(zhì)量濃度高達(dá)4 mg/mL，脂質(zhì)體的溶血百分率小于2%.說明所得脂質(zhì)體沒有溶血作用，細(xì)胞毒性較小[16].

圖6　DC-CHEMS脂質(zhì)體的溶血性能Fig.6　Hemolytic activity of DC-CHEMS liposomes

3.5細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)

采用MTT法測得各種質(zhì)量濃度脂質(zhì)體對(duì)HepG2細(xì)胞的毒性結(jié)果如圖7所示，在磷脂質(zhì)量濃度小于0.2 mg/mL時(shí)，HepG2細(xì)胞存活率幾乎都為100%，說明DC-CHEMS具有很低的細(xì)胞毒性.因此，在攝取與轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，將磷脂質(zhì)量濃度控制在這一范圍之內(nèi)即可.

圖7　DC-CHEMS脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性Fig.7　Cell toxicity of DC-CHEMS liposomes

3.6脂質(zhì)體對(duì)F-ODN在HepG2細(xì)胞攝取的促進(jìn)作用

HepG2細(xì)胞與F-ODN脂質(zhì)體復(fù)合物共同孵育5 h后，收集3個(gè)平行孔細(xì)胞合成1管，用流式細(xì)胞儀測定帶熒光的陽性細(xì)胞率和胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度，將兩者的乘積作為細(xì)胞內(nèi)熒光總量，考察脂質(zhì)體用量對(duì)細(xì)胞內(nèi)熒光總量的影響，如圖8所示.結(jié)果發(fā)現(xiàn)：DC-CHEMS脂質(zhì)體各質(zhì)量濃度組的胞內(nèi)熒光總量遠(yuǎn)高于市售轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine?2000對(duì)照組，+/-電荷比為1∶1的F-ODN脂質(zhì)體復(fù)合物組的熒光總量為Lipofectamine?2000對(duì)照組的3倍多.

圖8　DC-CHEMS脂質(zhì)體細(xì)胞攝取Fig.8　Cells uptake of DC-CHEMS liposomes

3.7脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效果

進(jìn)入細(xì)胞只是基因藥物要發(fā)揮作用的第一步，入胞后的命運(yùn)及細(xì)胞內(nèi)的分布對(duì)基因轉(zhuǎn)染至關(guān)重要.因此，一個(gè)良好的基因載體不僅能促進(jìn)基因的入胞，更重要的是能有效地控制基因在細(xì)胞內(nèi)的釋放和轉(zhuǎn)運(yùn)[17-18].為了評(píng)價(jià)DC-CHEMS所制脂質(zhì)體作為基因載體的可行性，采用綠熒光蛋白質(zhì)粒DNA為報(bào)告基因，考察其轉(zhuǎn)染效果.結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在缺乏DOPE等輔助磷脂的情況下，雖然DC-CHEMS脂質(zhì)體的細(xì)胞攝取較好，但基因轉(zhuǎn)染效率較低，與Koynova等研究結(jié)果類似[19].將磷脂換成DOPE后制備DC-CHEMS脂質(zhì)體，結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率顯著提高，各種電荷比DC-CHEMS脂質(zhì)體表現(xiàn)出的轉(zhuǎn)染活性要高于DC-Chol脂質(zhì)體對(duì)照組，如圖9所示.從圖9中可看出：當(dāng)脂質(zhì)體的質(zhì)量濃度較低時(shí)(+/-電荷比1∶8)，細(xì)胞內(nèi)的熒光強(qiáng)度較弱，隨著脂質(zhì)體質(zhì)量濃度的增加，細(xì)胞內(nèi)的熒光強(qiáng)度顯著增加.當(dāng)+/-電荷比為1∶2和1∶1時(shí)，DC-CHEMS脂質(zhì)體組表現(xiàn)了很高的轉(zhuǎn)染效率，細(xì)胞內(nèi)的熒光強(qiáng)度超過了Lipfectamine?2000對(duì)照組.繼續(xù)增加脂質(zhì)體的量，其轉(zhuǎn)染效率反而下降，這可能是由于內(nèi)吞飽和所致.當(dāng)脂質(zhì)體過多時(shí)，有一部分復(fù)合物沒有機(jī)會(huì)與細(xì)胞作用，使得這部分復(fù)合物上的質(zhì)粒DNA或寡核苷酸不能進(jìn)入到細(xì)胞.

圖9　脂質(zhì)體復(fù)合物的細(xì)胞轉(zhuǎn)染Fig.9　Transfection efficiency of GFP-pDNA complexed with liposomes

4結(jié)論

采用N-羥基琥珀酰亞胺活化膽固醇琥珀酸單酯能將N,N-二甲基乙二胺接到膽固醇上合成一種新的陽離子膽固醇衍生物——DC-CHEMS，將其和磷脂混合可制得性能良好的陽離子脂質(zhì)體.該陽離子脂質(zhì)體具有較低的溶血性和細(xì)胞毒性，對(duì)DNA有很強(qiáng)的包裹能力并能保護(hù)DNA免受核酸酶的降解，能顯著地促進(jìn)DNA的入胞，提高基因轉(zhuǎn)染效率，基因轉(zhuǎn)染效率可高于含酯?；鵇C-CHOL脂質(zhì)體和市售基因轉(zhuǎn)染試劑Lipfectamine?2000，故為一個(gè)極有發(fā)展前途的非病毒類基因載體.

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(責(zé)任編輯：陳石平)

Synthesis and characterization of a novel cationic

cholesterol derivatives for gene delivery

WANG Wenxi， HONG Lu, CAI Ting, ZHENG Haili, ZHU Miao, CHEN Lina

(College of Pharmaceutical Science，Zhejiang University of Technology，Hangzhou 310014，China)

Abstract:To synthesis and evaluate the feasibility as a gene carrier of a novel cationic cholesterol derivative , N,N-dimethylethylenediaminyl succinyl cholesterol (DC-CHEMS), which N,N-Dimethyl-1,2-ethanediamine was coupled to cholesterol by Succinate. The liposome was made of DC-CHEMS and phosphatide by film dispersion method, which showed sphere and uniform morphology under transmission electron microscopy( TEM). The size of liposome was 136 nm and Zeta potential was 25 mV determined by a laser particulate size analyser. Agarose gel electrophoresis demonstrated that the liposome could condense and protect plasmid DNA completely when the +/- charge ratio was more than 4∶1.The results of hemolysis test and MTT test showed that liposome was low toxic. Cellular uptake and gene transfeciton experiments showed that the liposome could enhance the uptake of F-ODN in HepG2 cells significantly ; when +/-charge ratio was 1∶1 or 1∶2, the gene transfection efficiency was stronger than the commercially available transfection reagent Lipfectamine?2000.Therefore, DC-CHEMS has the advantage of high efficiency and low toxicity as a gene carrier and is worthy of further research.

Keywords:cationic cholesterol derivatives ; cationic liposomes; gene carrier

文章編號(hào)：1006-4303(2015)04-0383-06

中圖分類號(hào)：R944

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

作者簡介：王文喜(1977—)，男，浙江蒼南人，副教授，博士，碩士生導(dǎo)師，主要從事新型給藥系統(tǒng)研究，E-mail：yjw@zjut.edu.cn.

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81102396)

收稿日期：2015-01-30