王　英高興嶺吳　華.陜西博森生物制藥股份集團(tuán)有限公司，陜西　西安　708;.四川省精鼎醫(yī)藥研究開發(fā)(上海)有限公司，四川　成都　6004;.陜西新民生醫(yī)藥有限公司，陜西　西安　7006

HPLC法測(cè)定琥珀酸美托洛爾緩釋膠囊的含量

王英1高興嶺2吳華3
1.陜西博森生物制藥股份集團(tuán)有限公司，陜西西安710118;
2.四川省精鼎醫(yī)藥研究開發(fā)(上海)有限公司，四川成都610041;
3.陜西新民生醫(yī)藥有限公司，陜西西安710026

【摘要】目的:建立以高效液相色譜法測(cè)定琥珀酸美托洛爾緩釋膠囊含量的測(cè)定方法.方法:用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以醋酸銨緩沖液(3. 9g醋酸銨，加水至810ml，加三乙胺3. 0ml，加冰醋酸10ml，加磷酸3. 0ml)－乙腈(85∶15)為流動(dòng)相，流速為1. 0m/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，進(jìn)樣量為10μl.結(jié)果:琥珀酸美托洛爾進(jìn)樣量在0. 3208～1. 2832μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r = 0. 9992);平均加樣回收率為100. 1%(RSD =1. 2%，n =6).結(jié)論:本方法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定、重現(xiàn)性好.

【關(guān)鍵詞】琥珀酸美托洛爾緩釋膠囊;高效液相色譜法;含量

美托洛爾為全球首個(gè)選擇性的β1受體阻滯劑，于1969年在瑞典的Hassle實(shí)驗(yàn)室研發(fā)成功，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于高血壓、缺血性心臟病、慢性穩(wěn)定性心力衰竭、心律失常等多種心血管疾病的治療.琥珀酸美托洛爾緩釋膠囊是根據(jù)緩釋片改劑型開發(fā)的品種，琥珀酸美托洛爾及其制劑收載于各國(guó)藥典[1－2，4]的含量測(cè)定方法為高效液相色譜法，但各方法不能完全排除有關(guān)物質(zhì)的干擾.本文對(duì)現(xiàn)有的HPLC法進(jìn)行優(yōu)化，用以測(cè)定琥珀酸美托洛爾緩釋膠囊的含量.

1　儀器與試藥

1. 1儀器日本島津LC－20A高效液相色譜儀; ZORBAX Eclipse XDB－C8柱(4. 6mm×150mm，5μm).

1. 2試藥琥珀酸美托洛爾對(duì)照品購(gòu)自英國(guó)LGC標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào): 21603);琥珀酸美托洛爾緩釋膠囊樣品(批號(hào): 20140615、20140618、20140621，自制);乙腈為色譜純;實(shí)驗(yàn)試劑均為分析純;水為注射用水.

2　方法與結(jié)果

2. 1色譜條件色譜柱: ZORBAX Eclipse XDB－C8柱(4. 6mm×150mm，5μm);流動(dòng)相:醋酸銨緩沖液(3. 9g醋酸銨，加水至810ml，加三乙胺3. 0 ml，加冰醋酸10ml，加磷酸3. 0ml)－乙腈(85∶15);檢測(cè)波長(zhǎng): 280nm;柱溫: 30℃;流速: 1. 0ml/min;進(jìn)樣量: 10μl.

2. 2檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇取琥珀酸美托洛爾對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解，以流動(dòng)相為空白，在400～200nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果表明琥珀酸美托洛爾在280nm的波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇280nm作為本品的檢測(cè)波長(zhǎng).

2. 3溶液的制備

2. 3. 1對(duì)照品溶液精密量取琥珀酸美托洛爾對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每1ml約含80μg的溶液.

2. 3. 2供試品溶液取供試品10粒，倒出內(nèi)容物(白色緩釋微丸)，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量(約相當(dāng)于琥珀酸美托洛爾100mg)，置250ml量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲處理30min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液5ml置25ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液.

2. 4方法學(xué)考察

2. 4. 1精密度測(cè)定精密量取琥珀酸美托洛爾對(duì)照品溶液，進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積值，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0. 09%.

2. 4. 2專屬性考察精密量取琥珀酸美托洛爾對(duì)照品溶液、琥珀酸美托洛爾緩釋膠囊供試品溶液及不含琥珀酸美托洛爾的陰性對(duì)照溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，試驗(yàn)結(jié)果表明:琥珀酸美托洛爾與其他物質(zhì)的分離符合規(guī)定，陰性樣品在此條件下無(wú)干擾，高效液相色譜圖見圖1.

圖1　琥珀酸美托洛爾高效液相色譜圖

2. 4. 3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取琥珀酸美托洛爾對(duì)照品8. 02mg，置100ml量瓶中，用水溶解并稀釋至濃度，搖勻.分別精密量取4、6、8、12、16μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖.以峰面積Y為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量X為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程: Y = 50520X + 16401(r = 0. 9992).結(jié)果表明，琥珀酸美托洛爾在0. 3208～1. 2832μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系.

2.4.4重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)(20140615)的樣品6份，分別依法制成供試品溶液，測(cè)定琥珀酸美托洛爾的含量，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.64%，表明本法重現(xiàn)性較好.

2. 4. 5穩(wěn)定性試驗(yàn)取新制備的供試品溶液，精密吸取10μl，分別于0、6、12、16、24h內(nèi)分別進(jìn)樣，記錄琥珀酸美托洛爾峰面積，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0. 12%，表明在24h內(nèi)溶液穩(wěn)定.

2. 4. 6加樣回收率精密稱取已知含量(235mg/g)的樣品研細(xì)內(nèi)容物(批號(hào)20140615)適量(約相當(dāng)于琥珀酸美托洛爾10mg)，共6份，分別精密加入琥珀酸美托洛爾原料適量(約相當(dāng)于琥珀酸美托洛爾100mg，原料含量為98. 6%)，按擬定的含量測(cè)定方法，測(cè)定琥珀酸美托洛爾含量，平均回收率為100. 1 %，RSD為1. 2%，表明本法具有良好的回收率.

2. 4. 7樣品測(cè)定連續(xù)3批樣品按上述方法制備樣品溶液，精密量取對(duì)照品溶液及樣品溶液各10μl注入高效液相色譜儀，按外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果批號(hào)20140615、20140618及20140621批琥珀酸美托洛爾緩釋膠囊中琥珀酸美托洛爾含量分別為標(biāo)示量的99. 8%、99. 7%和99. 5%.

3　討論

在色譜系統(tǒng)流動(dòng)相及色譜柱的選擇中，先后開展了對(duì)不同來(lái)源的含量測(cè)定法方法進(jìn)行比較的研究實(shí)驗(yàn).采用琥珀酸美托洛爾USP含量測(cè)定方法[1]，實(shí)驗(yàn)證明，選用該流動(dòng)體系進(jìn)行檢測(cè)色譜柱耐受性差;采用琥珀酸美托洛爾緩釋片USP含量測(cè)定方法[2]，實(shí)驗(yàn)證明，主峰出峰過(guò)早，混合雜質(zhì)分離度不符合要求;采用琥珀酸美托洛爾緩釋片進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定方法[3]，實(shí)驗(yàn)證明，主峰出峰過(guò)早，混合雜質(zhì)分離度不符合要求;采用琥珀酸美托洛爾EP含量測(cè)定方法[4]，實(shí)驗(yàn)證明，選用該色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，通過(guò)調(diào)整色譜柱類型C18調(diào)整為C8柱，結(jié)果當(dāng)以醋酸銨緩沖液(3. 9g醋酸銨，加水至810ml，加三乙胺3. 0ml，加冰醋酸10ml，加磷酸3. 0ml)－乙腈，(85∶15)為流動(dòng)相時(shí)，保留時(shí)間合適，琥珀酸美托洛爾峰形對(duì)稱，且與其他雜質(zhì)峰均能達(dá)到基線分離，通過(guò)對(duì)樣品破壞后DAD檢測(cè)試驗(yàn)結(jié)果表明，色譜峰純度亦符合要求.

參考文獻(xiàn)

[1]United States Pharmacopeia(31)[S]．26: 2696．

[2]美國(guó)藥典委員會(huì)．修訂公告．2012．

[3]國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)．琥珀酸美托洛爾緩釋片進(jìn)口藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)[S]．2002．

[4]European Pharmacopoeia[S]．6. 0: 2409－2410．

收稿日期:( 2014. 12. 03)

【文章編號(hào)】1007－8517(2015)05－0030－02

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【中圖分類號(hào)】R927. 2