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分化抑制蛋白-1在套細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及預(yù)后關(guān)系

任明強(qiáng)1，譚天海1，蘇俊2，葛金麗3

(1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 血液科，貴州 遵義563099；2.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 病理科， 貴州 遵義563099；3. 遵義醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院 血液科，貴州 遵義563003)

[摘要]目的 探討分化抑制蛋白-1(Inhibitor of differentiation-1, Id1)在套細(xì)胞淋巴瘤患者中的表達(dá)情況及其臨床意義。方法 采用SP免疫組化法檢測并分析45例套細(xì)胞淋巴瘤和20例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生淋巴結(jié)組織中Id1表達(dá)水平，以及Id1的表達(dá)與其臨床預(yù)后指標(biāo)的關(guān)系。結(jié)果 Id1在套細(xì)胞淋巴瘤和淋巴結(jié)反應(yīng)性增生淋巴結(jié)組織中陰性、弱陽性和強(qiáng)陽性的表達(dá)率分別是15.56%，31.11%，53.33%和65.00%，25.00%，10.00%(P<0.05)。套細(xì)胞淋巴瘤組織中Id1陽性表達(dá)與患者LDH、臨床分期、結(jié)外累及部位和近期療效有關(guān)(P均<0.05)；年齡、性別、WBC計(jì)數(shù)、PLT計(jì)數(shù)、HB含量無相關(guān)(P均>0.05)。經(jīng)過Log-rank檢驗(yàn)顯示，Id1低表達(dá)組和Id1高表達(dá)組的1年生存率分別是90.48%和79.17%(P>0.05)；3年生存率分別是66.67%和33.33%(P<0.05)；5年生存率分別是47.62%和16.67%(P<0.05)，Kaplan-Meier生存分析顯示Id1高表達(dá)組3年、5年生存率低于Id1低表達(dá)組(P<0.05)。結(jié)論 Id1在套細(xì)胞淋巴瘤淋巴結(jié)中呈高表達(dá)，并與部分預(yù)后相關(guān)指標(biāo)有關(guān)，Id1高表達(dá)組表現(xiàn)出低生存率，Id1可能成為套細(xì)胞淋巴瘤預(yù)后不良的評(píng)價(jià)指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞]套細(xì)胞淋巴瘤；淋巴結(jié)反應(yīng)性增生；分化抑制蛋白-1

套細(xì)胞淋巴瘤是一種富有侵襲性和預(yù)后差的B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤，約占非霍奇金淋巴瘤的5%，平均生存率為2～3年[1]。目前絕大部分套細(xì)胞淋巴瘤患者治療效果依舊不理想，然而又缺乏特異相關(guān)肯定的預(yù)后指標(biāo)指導(dǎo)治療。分化抑制蛋白1(Inhibitor of differentiation/DNA binding-1,Id1)作為堿性螺旋-環(huán)-螺旋(Helix-Loop-Helix,HLH)蛋白的亞家族成員之一，研究發(fā)現(xiàn)Id1高表達(dá)和乳腺癌、肺癌等預(yù)后相關(guān)。然而國內(nèi)外還缺乏Id1對(duì)套細(xì)胞淋巴瘤的相關(guān)研究。因此，本研究對(duì)45例套細(xì)胞淋巴瘤和20例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生的組織Id1表達(dá)情況進(jìn)行分析，探討在套細(xì)胞淋巴瘤患者中的Id1表達(dá)情況及其臨床意義。

1材料與方法

1.1組織標(biāo)本采集選取2004年1月至2012年5月遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院、遵義醫(yī)院血液內(nèi)科及腫瘤科住院患者，套細(xì)胞淋巴瘤45例為實(shí)驗(yàn)組，其中男性28例，女性17例，年齡范圍18～61歲，中位年齡46歲，臨床分期根據(jù)Ann Arbor-Colswolds分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期、Ⅱ期共16例和Ⅲ期、Ⅳ期共29例，均為淋巴結(jié)內(nèi)原發(fā)病變。另取同時(shí)期淋巴結(jié)反應(yīng)性增生(RH)的初治患者20例為對(duì)照組，男性12例，女性8例，年齡范圍25～58歲，中位年齡42歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)符合《張之南血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》(第3版)，所有患者均活檢淋巴結(jié)組織，并對(duì)標(biāo)本制作石蠟冰凍切片保存。

1.2實(shí)驗(yàn)材料與方法將石蠟標(biāo)本包埋并制作2 μm連續(xù)病理切片，按照免疫組織化學(xué)染色說明書中的方法進(jìn)行染色。DAB試劑盒和SP染色試劑盒均從重慶生物制品有限公司購買，兔克隆Id1單克隆抗體購自aviva systems biology 公司(武漢)，由兩位病理醫(yī)生進(jìn)行雙盲閱片，結(jié)果取平均值。免疫組化結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：采用半定量對(duì)Id1進(jìn)行分析，按陽性細(xì)胞的染色強(qiáng)度記分等級(jí)為0分(陰性)、1分(弱陽性)、2分(中度陽性)和3分(強(qiáng)陽性)；按染色陽性細(xì)胞百分比記分等級(jí)為0分(<10%細(xì)胞陽性)、1分(10%～25%細(xì)胞陽性)、2分(26%～50%細(xì)胞陽性)、3分(51%～75%細(xì)胞陽性)、4分(>75%細(xì)胞陽性)；將染色強(qiáng)度和染色百分比相乘得到的分?jǐn)?shù)即為最后染色水平分級(jí)：0分定義為陰性，1～6分定義為弱陽性，8～12分定義為強(qiáng)陽性。

1.3分組將45例套細(xì)胞淋巴瘤和20例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生的患者分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。將套細(xì)胞淋巴瘤Id1表達(dá)為陰性和弱陽性的患者劃分為Id1低表達(dá)組，Id1表達(dá)為強(qiáng)陽性的患者劃分為Id1高表達(dá)組。

1.4研究內(nèi)容分析套細(xì)胞淋巴瘤和淋巴結(jié)反應(yīng)性增生患者中Id1表達(dá)情況，分析套細(xì)胞淋巴瘤患者年齡、性別、WBC、PLT、HB、LDH、臨床分期、結(jié)外累及部位和近期療效與Id1表達(dá)強(qiáng)度的關(guān)系，并對(duì)套細(xì)胞淋巴瘤患者進(jìn)行3～5年隨訪，分析Id1表達(dá)強(qiáng)度和遠(yuǎn)期預(yù)后的關(guān)系。套細(xì)胞淋巴瘤患者在經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)CHOP治療4～6療程后判斷療效，第1年每3月進(jìn)行一次隨訪，第2年以后每6個(gè)月進(jìn)行一次隨訪，以1、3 、5 年的總生存率為遠(yuǎn)期預(yù)后評(píng)價(jià)指標(biāo)，并繪制兩組患者的生存曲線，比較兩組患者的遠(yuǎn)期預(yù)后療效。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本臨床研究的所有數(shù)據(jù)采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，對(duì)計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn)，兩組生存資料采取Kaplan-Meier方法繪制生存曲線，采用Log-rank檢驗(yàn)分析組間差異。當(dāng)P<0.05時(shí)，認(rèn)為差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1Id1在套細(xì)胞淋巴瘤和淋巴結(jié)反應(yīng)性增生患者中的表達(dá)45例套細(xì)胞淋巴瘤患者中Id1表達(dá)強(qiáng)度為陰性、弱陽性和強(qiáng)陽性的比例分別是15.56%、28.89%和51.11%；20例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生患者中Id1表達(dá)強(qiáng)度為陰性、弱陽性和強(qiáng)陽性的比例分別是65.0%、25.0%和10.0%；兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表1、圖1)。陽性表達(dá)定位于細(xì)胞膜、細(xì)胞漿。表1Id1在套細(xì)胞淋巴瘤和淋巴結(jié)反應(yīng)性增生患者中的表達(dá)

組織標(biāo)本例數(shù)Id1表達(dá)強(qiáng)度陰性弱陽性強(qiáng)陽性套細(xì)胞淋巴瘤457(15.56%)14(31.11%)24(53.33%)淋巴結(jié)反應(yīng)性增生2013(65.00%)5(25.00%)2(10.00%)

與淋巴結(jié)反應(yīng)性增生患者比較，P<0.001。

A:Id1蛋白在套細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá),強(qiáng)陽性；B：Id1蛋白在淋巴結(jié)反應(yīng)性增生中的表達(dá),弱陽性。　　圖1　Id1在套細(xì)胞淋巴瘤和淋巴結(jié)反應(yīng)性增生患者中的表達(dá)( ×400)

2.2Id表達(dá)與臨床特征的關(guān)系Idl表達(dá)水平與

套細(xì)胞淋巴瘤患者年齡、性別、WBC、PLT、HB無相關(guān)(P均>0.05)，與患者LDH、臨床分期、結(jié)外累及部位和近期療效有關(guān)(P均<0.05，見表2)。

2.3套細(xì)胞淋巴瘤患者Idl表達(dá)與生存預(yù)后的關(guān)系經(jīng)過Log-rank檢驗(yàn)顯示，套細(xì)胞淋巴瘤淋巴結(jié)患者Id1低表達(dá)組和高表達(dá)組1年生存率分別是90.48%和79.17%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.267)；3年生存率分別是66.67%和33.33%(P=0.026)，5年生存率分別是47.62%和16.67%(P=0.027)，兩組3年、5年生存率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見表3)，同時(shí)繪制兩組Kaplan-Meier圖(見圖2)，兩組生存率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.013)。

表2套細(xì)胞淋巴瘤患者中Id1表達(dá)與臨床特征的關(guān)系

病理指標(biāo)例數(shù)Id1表達(dá)強(qiáng)度陰性弱陽性強(qiáng)陽性P年齡(歲)714240.273≥6021579<60242715性別0.444男2831015女17449WBC0.717≥10×109/L192611<10×109/L265813PLT0.892≥100×109/L244812<100×109/L213612HB0.935≥120g/L18369<120g/L274815LDH0.002正常17674升高281720臨床分期0.038I-II16565III-IV292819淋巴結(jié)外累及器官0.006無14563有312821療效0.006≤PR151113>PR3061311

PR：部分緩解。

表3兩組不同Idl表達(dá)套細(xì)胞淋巴瘤患者總生存率(%)

組別例數(shù)總生存率1年2年3年Id1低表達(dá)組2119(90.48%)14(66.67%)10(47.62%)Id1高表達(dá)組2419(79.17%)8(33.33%)4(16.67%)P0.2670.0260.027

圖2　兩組Idl不同表達(dá)套細(xì)胞淋巴瘤患者總生存曲線

3討論

套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)是一種起源于淋巴結(jié)濾泡區(qū)的小B細(xì)胞淋巴瘤，以t(11;14)(q13;q32)易位和CD5、cyclinD1和SOX11陽性為特征[2]。MCL具有化療敏感性低、生存期短、易復(fù)發(fā)等特點(diǎn)，比其他形態(tài)類似的淋巴瘤預(yù)后差。MCL多數(shù)患者診斷時(shí)已為Ⅲ或Ⅳ期，常伴有骨髓及結(jié)外器官的浸潤。MCL在淋巴瘤治療領(lǐng)域中依舊是一個(gè)難題，標(biāo)準(zhǔn)R-CHOP方案化療療效不令人滿意，存在無法治愈，容易復(fù)發(fā)，長期生存率低等問題。故探索與MCL疾病進(jìn)展、預(yù)后療效等密切相關(guān)的新分子標(biāo)志十分必要。

分化抑制蛋白簡稱Id類蛋白，屬于HLH反式作用因子家族，Id抑制HLH與DNA及其他組織特異性HLH轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，對(duì)HLH轉(zhuǎn)錄因子活性起負(fù)調(diào)節(jié)作用，從而抑制細(xì)胞分化。Id1蛋白是一種與致癌性及細(xì)胞惡性生長相關(guān)的蛋白，有類原癌基因的功能，可以刺激DNA合成，促進(jìn)細(xì)胞由G 期向S期轉(zhuǎn)化[3]，在正常組織低表達(dá)或不表達(dá)，在多種腫瘤(乳腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、結(jié)直腸癌、非小細(xì)胞肺癌、肝癌、急性髓系白血病等)中存在高表達(dá)，并且是不良預(yù)后指標(biāo)[4-7]。

目前暫缺乏套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)中Id1表達(dá)研究的報(bào)道，MCL預(yù)后與治療反應(yīng)受多種因素影響，Hoster等根據(jù)患者白細(xì)胞計(jì)數(shù)、體能狀態(tài)評(píng)分(ECOG)、LDH水平及年齡4個(gè)危險(xiǎn)因素進(jìn)行評(píng)估評(píng)價(jià)MCL預(yù)后情況[8]。在本研究中，采用免疫組化法對(duì)45例MCL和20淋巴結(jié)反應(yīng)性增生的患者Id1表達(dá)情況進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)在MCL中Id1呈顯著高表達(dá)，弱陽性率和強(qiáng)陽性率分別是31.11%和53.33%，在淋巴結(jié)反應(yīng)性增生中弱陽性率和強(qiáng)陽性率分別只有25.00%和10.00%，結(jié)果顯示Id1在MCL中的表達(dá)顯著高于淋巴結(jié)反應(yīng)性增生(P<0.05)。在國內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)Id1在肝癌、甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達(dá)率也顯著增高[9-10]，進(jìn)一步分析ID1表達(dá)與臨床預(yù)后、療效等因素間關(guān)系，表明MCL患者Idl表達(dá)與WBC、年齡、性別、PLT、HB無相關(guān)(P均>0.05)，與患者LDH、臨床分期、結(jié)外累及部位和近期療效有關(guān)(P均<0.05)，表明高表達(dá)ID1的MCL侵襲性強(qiáng)、危險(xiǎn)度高、病情易進(jìn)展、近期治療反應(yīng)差。分析ID1作用機(jī)制與以下有關(guān)[11- 12]：①Id1通過影響細(xì)胞周期、激活MAPK信號(hào)途徑、下調(diào)p16INK4a和增加pRB磷酸化阻斷pRB/ p16INK4a途徑，使Id1誘導(dǎo)癌細(xì)胞增殖；②ID1基因在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的持續(xù)表達(dá)明顯抑制了細(xì)胞的分化，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的增殖；③ID1蛋白是抑癌蛋白，通過結(jié)合E2A蛋白而抑制cadherin的表達(dá)，使細(xì)胞失去上皮表型，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。

此外，隨訪3、5年顯示MCL患者Id1高表達(dá)組生存率明顯低于MCL患者Id1低表達(dá)組。這說明Idl表達(dá)水平和套細(xì)胞淋巴瘤患者遠(yuǎn)期預(yù)后也密切相關(guān)。由此可以推斷Id1在套細(xì)胞淋巴瘤中與臨床預(yù)后密切相關(guān)，并可能成為套細(xì)胞淋巴瘤預(yù)后不良、判斷療效的評(píng)價(jià)指標(biāo)。未來將擴(kuò)大病例數(shù)，進(jìn)一步研究ID1在MCL分子作用機(jī)制。

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[收稿2015-04-03;修回2015-05-10]

(編輯：王福軍)

·讀者·作者·編者·

The expression of inhibitor of differentiation-1 (Id1) in mantle cell lymphoma and its relationship with prognosis

RenMingqiang1，TanTianhai1，SuJun2，GeJingli3

(1.Department of Hematology,The Affiliated Hospital of Zunyi Medical University, Zunyi Guizhou 563099,China;2.Department of Pathology，The Affiliated Hospital of Zunyi Medical University, Zunyi Guizhou 563099,China; 3.Department of Hematology,The Third Affiliated Hospital of Zunyi Medical University, Zunyi Guizhou 563003,China)

[Abstract]Objective To investigate the expression level and its clinical significance of inhibitor of differentiation-1 (Id1) in mantle cell lymphoma. Methods The immunohistochemical staining was used to detect and analyze the expression of Id1 in 45 mantle cell lymphoma patients and 20 reactive hyperplasia lymphoid patients. The relationship between the expression of Id1 and clinic indicators of prognosis was anlyzed. Results The negative, weakly positive and strong positive expression rate of Id1 in mantle cell lymphoma tissues were 15.56%，31.11% and 53.33%, and unreactive hyperplasia lymphoid tissues were 65.00, 25.00% and 10.00% (P<0.05). The expression of Id1 was significantly correlated with LDH, clinical stage, extranodal infiltration and short-term effects (P<0.05), but was not correlated with age, gender, WBC, PLT and HB counts (all P>0.05). It was revealed by log-rank test that the one-year survival rate in mantle cell lymphoma patients with low and high expression of Id1 were 90.48% and 79.17% (P>0.05), three-year survival rate were 66.67% and 33.33% (P<0.05), five-year survival rate were 47.62% and 16.67% (P<0.05). It was showed by Kaplan-Meier’s survival analysis that the five-year survival in high expression of Id1 group was lower than the low expression group (P<0.05).Conclusion Id1 had high expression in mantle cell lymphoma tissues and was correlated with some indicators of prognosis. Mantle cell lymphoma patients with high expression of Id1 had lower survival rate, indicating that Id1 might be a bad prognostic indicator in mantle cell lymphoma .

[Key words]mantle cell lymphoma;reactive hyperplasia lymphoid; Id1

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼][中圖法分類號(hào)] R733.4 A

[文章編號(hào)]1000-2715(2015)03-0266-05

[基金項(xiàng)目]遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院碩士啟動(dòng)基金資助項(xiàng)目(NO：院字[2008]09)。